本發(fā)明涉及藥物分析，尤其是涉及一種人體內(nèi)血藥濃度的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、納米生物檢測是基于具有特殊性能的納米材料和納米結(jié)構(gòu)所建立的生物檢測方法和技術(shù)。相比于傳統(tǒng)的檢測方法，納米生物檢測往往具有檢測靈敏度高、特異性強、多靶標(biāo)同時檢測以及快速即時檢測等優(yōu)勢。同時，手性是生物體系中的一個獨特現(xiàn)象?：從簡單的氨基酸、糖類到具有多級結(jié)構(gòu)的多肽再到生物大分子蛋白質(zhì)和核酸都表現(xiàn)出單一的手性結(jié)構(gòu)。生物體系的手性特征不僅決定了生物分子之間相互作用的特異性，進(jìn)而也影響了生物體系的一系列過程。近年來，手性納米材料因其獨特的光學(xué)性質(zhì)、穩(wěn)定性而廣泛應(yīng)用于生物分子的檢測與識別。除此之外，手性納米材料的生物安全效應(yīng)是其應(yīng)用于生物體系的先決條件，因而也逐步受到人們的關(guān)注與研究。而手性在生物體內(nèi)廣泛存在，許多疾病的標(biāo)志物與手性息息相關(guān)，因此手性材料在生物領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景。

2、監(jiān)測血藥濃度對于確保藥物治療的安全性和有效性至關(guān)重要，首先，不同個體對藥物的吸收、分布、代謝和排泄可能存在顯著差異。通過監(jiān)測血藥濃度，醫(yī)生可以調(diào)整藥物劑量，以適應(yīng)個體的特定需要，例如，個體遺傳差異可能影響藥物代謝酶的活性，導(dǎo)致不同患者對同一藥物的反應(yīng)不同。監(jiān)測血藥濃度有助于考慮這些遺傳因素，優(yōu)化治療方案。其次，由于某些藥物的治療窗口較窄，即有效濃度與毒性濃度之間的差距很小。監(jiān)測血藥濃度有助于避免藥物過量，減少潛在的毒性反應(yīng)和副作用。確保藥物濃度維持在有效范圍內(nèi)，可以提高治療效果，減少治療失敗的風(fēng)險。而且，當(dāng)患者同時使用多種藥物時，可能會發(fā)生藥物相互作用，影響藥物的血濃度。監(jiān)測可以幫助識別這些相互作用，并及時調(diào)整治療方案。另外，監(jiān)測血藥濃度可以反映患者的代謝狀態(tài)，如肝腎功能，這些因素都會影響藥物的清除速率。對于需要長期用藥的患者，定期監(jiān)測血藥濃度有助于長期管理治療方案，確保持續(xù)的療效和安全性。同時也考慮到兒童、老年人、孕婦以及肝腎功能不全的患者可能需要特別的劑量調(diào)整，監(jiān)測血藥濃度對于這些特殊人群尤為重要。

3、臨床監(jiān)測是通過相關(guān)設(shè)備對患者生命體征及生理參數(shù)進(jìn)行實時和連續(xù)的物理檢測或化學(xué)檢驗，并以數(shù)據(jù)或圖像形式呈現(xiàn)出來，為診斷和治療提供依據(jù)。目前臨床上缺乏直接、準(zhǔn)確反映患者體內(nèi)血藥濃度的方式。在過去利用化學(xué)材料進(jìn)行體液監(jiān)測的常用方法包括質(zhì)譜分析、熒光檢測等等，但這些方法往往伴隨著耗時長、成本高、對樣本要求高等缺點，且傳統(tǒng)血液檢測需要在取血后對血液樣本進(jìn)行離心，十分耗時，無法適用于臨床血藥濃度的實時監(jiān)測。

4、目前流行的基于電化學(xué)的傳感器測量高度特異性電極表面的電流或電位以轉(zhuǎn)換分析物濃度，已經(jīng)能夠連續(xù)跟蹤體液中的一些電解質(zhì)、代謝物（如乳酸鹽和葡萄糖）和藥物；然而，這些傳感器通常限于一次檢測一種分析物。且檢測過程繁雜而不是集成式，無法成立一個集成式的監(jiān)測體系，為了獲得動態(tài)的完整監(jiān)測，將幾種感測機制和檢測方法組合到一個傳感平臺中是必要的，但具有挑戰(zhàn)性。

5、因此，本發(fā)明的目標(biāo)是開發(fā)一種具有通用目標(biāo)特異性而不是只有一個目標(biāo)的新傳感器，從而能夠同時跟蹤多個目標(biāo)，然而，找到一種更加精準(zhǔn)、可視化、更容易投入臨床使用的血藥濃度監(jiān)測方式仍然十分具有挑戰(zhàn)性，也是生命健康領(lǐng)域研究人員十分關(guān)注的熱點。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種人體內(nèi)血藥濃度的檢測方法，本發(fā)明提供的方法可以靈敏檢測到血液中低濃度的藥物的基底，并且具有良好的信號再現(xiàn)性與均勻性，同時擁有低的檢測限，并將其與可分離血漿的微流控芯片集成起來形成一個成熟的監(jiān)測體系，從而實現(xiàn)在血藥濃度檢測中的應(yīng)用，本發(fā)明通過集成可分離血漿的微流控芯片以及高手性光學(xué)活性的基底從而實現(xiàn)快速、精確的血藥濃度監(jiān)測。

2、本發(fā)明提供了一種人體內(nèi)血藥濃度的檢測方法，包括如下步驟：

3、a?)將藥品標(biāo)準(zhǔn)品至于基底表面，采用拉曼光譜進(jìn)行檢測，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；

4、b）采用微流控芯片對血液進(jìn)行采集，采用拉曼光譜進(jìn)行檢測，得到血液中的拉曼指紋圖譜，與標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對照，得到血藥濃度。

5、本發(fā)明提供的人體內(nèi)血藥濃度的檢測方法首先制備基底。

6、本發(fā)明所述基底為具有手性光學(xué)活性的納米螺旋銀基底。

7、在本發(fā)明中，優(yōu)選利用掠角沉積技術(shù)制作具有手性光學(xué)活性的納米螺旋銀基底。

8、在本發(fā)明中，所述基底的制備方法包括：利用掠角沉積技術(shù)制作具有手性光學(xué)活性的納米螺旋銀基底。

9、所述沉積速率為0.3nm/s；所述納米螺旋銀基底的理論螺距為150nm、理論直徑為70nm、理論長度為856.64nm。

10、本發(fā)明人創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)，對比同參數(shù)條件下的棒狀納米銀基底，具有螺旋結(jié)構(gòu)的手性基底的表面增強拉曼散射效應(yīng)更好，具有更低的檢測限以及更好的重復(fù)效果。

11、將藥品標(biāo)準(zhǔn)品至于基底表面，采用拉曼光譜進(jìn)行檢測，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

12、將藥品標(biāo)準(zhǔn)樣品滴在手性基底的表面，待干燥后，將手性基底置于便攜式拉曼激光光源之下，將激光光源的功率調(diào)至10mw。

13、所述拉曼光譜的激光功率是10mw，平均時間是1s，激光光源的波長為785nm，積分時間為3000。

14、本發(fā)明對于檢測能夠抵抗基質(zhì)界面效應(yīng)的復(fù)雜樣品具有優(yōu)勢，基于手性納米材料與病人血液樣本的表面增強拉曼散射效應(yīng)將病人體內(nèi)藥物濃度與拉曼信號強度相關(guān)聯(lián)，具有特殊結(jié)構(gòu)的手性納米材料作為表面增強拉曼散射基底可以靈敏地捕捉到患者血液內(nèi)低濃度的藥物含量并以圖譜信號展示，由于每個藥物分子都具有獨特的sers光譜，血漿中提取的目標(biāo)可以通過我們的傳感器進(jìn)行“指紋識別”。通過使用該傳感器，作為概念驗證研究，可以實時跟蹤人體內(nèi)藥物濃度的變化，以獲得個體的藥物代謝概況。通過觀察拉曼信號強度來直接反映患者體內(nèi)的不同藥物含量，從而實現(xiàn)血藥濃度的監(jiān)測，有助于實現(xiàn)精確化代謝評估。

15、本發(fā)明制備微流控芯片。

16、按照本發(fā)明，所述微流控芯片包括載玻片和設(shè)置于載玻片上的pdms塊；

17、所述pdms塊上設(shè)置有血液入口、收集端和血液出口；連接血液入口和收集端的細(xì)管道；連接血液入口和血液出口的主管道；所述收集端設(shè)置有基底。

18、如圖10所示，其中1為血液入口，2為載玻片，3為pdms塊，4為收集端，5為血液出口。

19、其中，所述主通道110μm寬、10μm深，細(xì)管道2μm寬、1.2μm深。

20、本發(fā)明微流控芯片由pdms和載玻片粘合而成，pdms塊內(nèi)有兩段粗細(xì)、深度不同的毛細(xì)通道、過濾梳、血液入口和血漿收集區(qū)域。

21、最初，通過光刻技術(shù)制作了一個硅片主模具，硅模具的管道圖案為110μm寬、10μm深的主通道以及2μm寬、1.2μm深的細(xì)管道，將pdms（pdms中a膠和b的比例為10:1體積比）倒在硅主模具上，并在100°c下固化60分鐘，然后小心地從硅主模上剝離。然后切割出血液入口、血漿收集和廢液收集的區(qū)域。?最后，將載玻片和pdms放入等離子體清潔器中1分鐘，隨后將等離子體活化的pdms被放置在玻璃上，將粘合的pdms和玻璃片密封并放進(jìn)60℃的烘箱加固處理1h后取出形成密閉牢固的微流控芯片。

22、本發(fā)明采用微流控芯片對血液進(jìn)行采集具體包括：將血液樣本放入微流控芯片的血液入口，待血液流經(jīng)主管道和細(xì)管道后，分離的血漿進(jìn)入收集端，待血漿吸附在樣品上并凝固后即可檢測。

23、通過照射到集成到微流控芯片上的手性基底上的藥品的激發(fā)光源散射回來后的光源信息，得到此藥品的獨特的拉曼指紋圖譜信息。

24、本發(fā)明所述藥品標(biāo)準(zhǔn)品的溶劑為水；所述藥品標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為最優(yōu)濃度級別1mg/ml~10mg/ml。

25、具體可以為1mg/?ml、2mg/?ml、3mg/?ml、4mg/?ml、5mg/?ml、6mg/?ml、7mg/?ml、8mg/?ml、9mg/?ml、10mg/?ml；或者上述任意二者之間的范圍值。

26、本發(fā)明所述藥品包括瑞芬太尼、阿曲庫銨、甲潑尼龍琥珀酸鈉或羅庫溴銨中的一種。

27、按照本發(fā)明，所述瑞芬太尼的拉曼圖譜中的特征峰位于375.39cm-1、713.71cm-1、835.09cm-1、948.54cm-1、1026.68cm-1、1444.09cm-1；

28、所述甲潑尼龍酸鈉的拉曼圖譜中的特征峰位于314.75cm-1、610.68cm-1、688.06cm-1、922.14cm-1、1000.81cm-1、1052.37cm-1、1287.85cm-1、1396.05cm-1、1602.3cm-1；

29、所述羅庫溴銨的拉曼圖譜中的特征峰位于377.9cm-1、853.11cm-1、1130.49cm-1、1604.12cm-1；

30、所述阿曲庫銨的拉曼圖譜中的特征峰位于405.42cm-1、550.22cm-1、666.96cm-1、853.35cm-1、957.3cm-1、1140.92cm-1、1378.58cm-1、1585.92cm-1。

31、應(yīng)用本發(fā)明的檢測技術(shù)可以得到各類純藥品的圖譜信息，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜信息庫，作為標(biāo)準(zhǔn)樣本對照患者的血液樣本中的未知藥品的拉曼圖譜，同時，應(yīng)用本發(fā)明的集成微流控芯片檢測技術(shù)可以實現(xiàn)快速的血漿分離，縮短了從血液采集到血漿分析的時間，加快了診斷過程。且表面增強拉曼散射的檢測原理允許使用微量的血液樣本進(jìn)行血漿分離，這對于需要多次抽血檢測的患者尤其有益，如嬰幼兒或貧血患者。與目前傳統(tǒng)的臨床血藥濃度監(jiān)測相比，基于手性基底的便攜式拉曼檢測具有樣本量小、檢測速度快、可視化強、精準(zhǔn)度高的優(yōu)勢，且拉曼圖譜的峰寬窄，不同藥品的指紋圖譜信息之間不會相互干擾，可實現(xiàn)精準(zhǔn)化的藥物檢測。便攜式芯片技術(shù)更是允許在臨床現(xiàn)場或偏遠(yuǎn)地區(qū)進(jìn)行血液樣本的處理和分析，擴大了醫(yī)療服務(wù)的覆蓋范圍。