3次，為避免由于樣本不穩(wěn)定性帶來的影響，在試驗(yàn)時(shí)使用兩個(gè)程序同時(shí)完成 一個(gè)樣本的測(cè)量后再進(jìn)行下一個(gè)樣本的測(cè)量，記錄測(cè)量結(jié)果； 方法二：使用試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品作為標(biāo)準(zhǔn)，直接測(cè)定需要評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)水平標(biāo)準(zhǔn) 品重復(fù)測(cè)定至少3次； 兩個(gè)或兩個(gè)以上不同試劑盒的互換性：采用各個(gè)試劑盒自帶的標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定帶有基質(zhì) 的實(shí)際樣本，樣本應(yīng)當(dāng)能夠覆蓋整個(gè)檢測(cè)范圍，至少10個(gè)樣品；每個(gè)試劑盒對(duì)每一個(gè)水平 的樣本至少測(cè)定3次，為避免分析間精密度帶來的影響，在測(cè)定時(shí)一個(gè)樣本連續(xù)測(cè)定3次后 再進(jìn)行下一樣本的測(cè)定，記錄測(cè)量結(jié)果； 試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品與其它標(biāo)準(zhǔn)品的互換性評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)的處理： 對(duì)應(yīng)于方法一：使用試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定樣本的結(jié)果作為x軸，使用待評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品 測(cè)定樣本的結(jié)果作為y軸，進(jìn)行Deming回歸，并確定95%置信水平下直線斜率和截距的置 信范圍；如果直線斜率的置信范圍包括1，截距的置信范圍包括0,證明待評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品與試 劑盒標(biāo)準(zhǔn)品之間具有互換性，否則說明待評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品與試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品之間不能互換； 對(duì)應(yīng)于方法二：使用試劑盒自帶標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定待評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)果作為x軸，待評(píng)價(jià)標(biāo) 準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)值作為y軸，進(jìn)行Deming回歸，并確定95%置信水平下直線斜率和截距的置信 范圍；如果直線斜率的置信范圍包括1，截距的置信范圍包括0,證明待評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品與試劑 盒標(biāo)準(zhǔn)品之間具有互換性，否則說明待評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)品與試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品之間不能互換； 兩個(gè)或兩個(gè)以上不同試劑盒的互換性評(píng)價(jià)結(jié)果的數(shù)據(jù)處理：分別以兩個(gè)試劑盒檢測(cè)結(jié) 果作為x軸和y軸，進(jìn)行Deming回歸，并確定95%置信水平下直線斜率和截距的置信范 圍；如果直線斜率的置信范圍包括1，截距的置信范圍包括0,證明兩個(gè)試劑盒之間具有互 換性；否則，說明兩個(gè)試劑盒之間沒有互換性。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的商品化定量檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)方法，其特征在于：所述試劑盒 包括但不限于胰島素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒， 采用所述胰島素化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法包括如下步驟： (1) 采用不含胰島素的空白血清，或使用經(jīng)基質(zhì)效應(yīng)驗(yàn)證在BeckmanDxl800免疫分 析系統(tǒng)上具有互通性的BSA溶液將胰島素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋至如下濃度水平：143. 4pmol/L、 15.lpmol/L、44. 7pmol/L、75. 2pmol/L、105. 0pmol/L、134. 5pmol/L，按照公式（1)進(jìn)行準(zhǔn)確 度驗(yàn)證； (2) 打開BeckmanDxl800反應(yīng)管倉(cāng)門，裝載反應(yīng)試管；換上新的洗滌緩沖液；更換新 的基質(zhì)溶液；倒空廢液和固體廢物袋，將有效期內(nèi)的胰島素檢測(cè)試劑盒裝載到系統(tǒng)中，用 lmL純水將BeckmanDxl800試劑盒配套的定標(biāo)品溶解，靜止30分鐘后轉(zhuǎn)移300yL至樣品 管中，在系統(tǒng)主菜單選擇定標(biāo)，按F1增加定標(biāo)液，掃描定標(biāo)液的條形碼錄入定標(biāo)液信息并 確認(rèn)，在主菜單上選擇樣品管理，并選擇需要使用的定標(biāo)液及放置定標(biāo)液的定標(biāo)架，上機(jī)定 標(biāo)直至通過； (3) 將143. 4pmol/L的胰島素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液分裝到6個(gè)樣品杯中，在BeckmanDxl800 主菜單樣品管理界面添加樣品進(jìn)行分析，6個(gè)樣品重復(fù)分析測(cè)定結(jié)果平均值為150.lpmol/ L;根據(jù)《ISO/IECGuide98-3:2008》國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的要求評(píng)定試劑盒測(cè)定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度 U= 7. 5pmol/L，使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的擴(kuò)展不確定度為4. 3pmol/L，根據(jù)公式（1)計(jì)算En值為 0. 77,該值小于1，說明在143. 4pmol/L量值點(diǎn)試劑盒準(zhǔn)確度通過驗(yàn)證；
其中： 商品化定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果的算術(shù)平均值； ^:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值，由使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供； U:商品化定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果平均值的擴(kuò)展不確定度，該不確定度應(yīng)為95%置 信水平下的擴(kuò)展不確定度； %:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果的擴(kuò)展不確定度，由使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供； (4) 選取血清樣本，采用同位素稀釋質(zhì)譜方法作為參考方法對(duì)血清中的胰島素含量進(jìn) 行測(cè)定測(cè)定，以氘標(biāo)記的纈氨酸合成胰島素B鏈FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT形成同 位素標(biāo)記的胰島素B鏈；取2mL血清于固相萃取柱中，待流過固相萃取柱后用500yL水進(jìn) 行淋洗一次，最后以500yL90%乙腈-水進(jìn)行洗脫，用5%體積比的1M二硫蘇糖醇溶液作 為還原劑，渦旋混勻后在60°C水浴鍋中加熱15min，取lmL胰島素標(biāo)準(zhǔn)溶液或者樣品，加入 lmL同位素標(biāo)記的胰島素B鏈肽段溶液并稱重，渦旋混勻并按上述條件進(jìn)行固相萃取和還 原，還原后的溶液用MALDI-T0F基質(zhì)混勻后點(diǎn)在靶板上，自然晾干，進(jìn)行質(zhì)譜分析，監(jiān)測(cè)還 原后的胰島素B鏈（m/z= 3431)以及同位素標(biāo)記的B鏈（m/z= 3447)的信號(hào)強(qiáng)度，根據(jù) 下面公式計(jì)算血清中胰島素含量為74. 6pmol/L;
式中，Rm-Std表示標(biāo)準(zhǔn)溶液中胰島素與標(biāo)記的B鏈的質(zhì)量比； Rh-Std表示標(biāo)準(zhǔn)溶液中非標(biāo)記的胰島素B鏈還原肽段與標(biāo)記的B鏈的峰高比或峰面積 比； Rh-S表示樣品溶液中非標(biāo)記的胰島素B鏈還原肽段與標(biāo)記的B鏈的峰高比或峰面積 比； 1^_1表示樣品溶液中標(biāo)記的B鏈的質(zhì)量（g); m為樣品溶液的質(zhì)量（g); ws為樣品溶液中胰島素的含量（g/g); 使用BeckmanDxl800胰島素化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)BeckmanDxl800免疫分析系統(tǒng)，然后用該系統(tǒng)對(duì)同一個(gè)血清樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果為72.lpmol/L;根 據(jù)《ISO/IECGuide98-3:2008》國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的要求評(píng)定參考方法和試劑盒方法測(cè)定結(jié)果的擴(kuò) 展不確定度分別為3.Opmol/L和3. 7pmol/L，根據(jù)公式（1)計(jì)算En值為0? 52,該值小于1， 說明在74. 6pmol/L量值點(diǎn)試劑盒準(zhǔn)確度通過驗(yàn)證；
其中： 無：商品化定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果的算術(shù)平均值； ^:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值，由使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供； U:商品化定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果平均值的擴(kuò)展不確定度，該不確定度應(yīng)為95%置 信水平下的擴(kuò)展不確定度； %:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值結(jié)果的擴(kuò)展不確定度，由使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供； (5)假定試劑盒的最大允許誤差為15%，即在74. 6pmol/L量值點(diǎn)的最大允許誤差MPEV =11. 19pmol/L，由于試劑盒檢測(cè)結(jié)果的擴(kuò)展不確定度U=3. 7pmol/L，所以（U=3. 7pmol/ L)〈（1/3MPEV=3. 73pmol/L)，而誤差 |E|=2. 5pmol/L，滿足 |E|彡MPEV，因此該試劑盒在 74. 6pmol/L量值點(diǎn)的測(cè)量誤差小于假定的最大允許誤差； (6) 使用BeckmanDxl800胰島素化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)Beckman Dxl800免疫分析系統(tǒng)，然后用該系統(tǒng)對(duì)同一個(gè)血清樣品連續(xù)測(cè)定6次，根據(jù)公式（3)計(jì)算 試劑盒測(cè)定結(jié)果的精密度：
式中： R-相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，以百分?jǐn)?shù)表示； Xi-第i次商品化定量檢測(cè)試劑盒分析樣品的結(jié)果； X-n次測(cè)定結(jié)果的平均值； 計(jì)算結(jié)果為2.1% ; (7) 按照步驟（2)中的操作步驟，使用BeckmanDxl800胰島素化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑 盒中的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)BeckmanDxl800免疫分析系統(tǒng)，然后用該系統(tǒng)對(duì)3份除去胰島素的血 清樣品進(jìn)行測(cè)定；并以經(jīng)梯度稀釋的胰島素國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)143. 4pmol/L、15.lpmol/L、 44. 7pmol/L、75. 2pmol/L、105. 0pmol/L、134. 5pmol/L繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將 3 倍空白樣品響應(yīng) 值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的濃度作為檢測(cè)限，計(jì)算結(jié)果為1. 3pmol/L; (8) 按照步驟（2)中的操作步驟，使用BeckmanDxl800胰島素化學(xué)發(fā)光免疫分析試 劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)BeckmanDxl800免疫分析系統(tǒng)，然后用該系統(tǒng)對(duì)3份除去胰島素的 血清樣品進(jìn)行測(cè)定，每份樣品重復(fù)測(cè)定3次；并以經(jīng)梯度稀釋的胰島素國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 143. 4pmol/L、15.lpmol/L、44. 7pmol/L、75. 2pmol/L、105. 0pmol/L、134. 5pmol/L繪制標(biāo)準(zhǔn) 曲線，將3倍空白樣品響應(yīng)值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出的濃度；同時(shí)將3份空白樣品測(cè)定結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度，將以上兩個(gè)濃度相加作為定量限，計(jì)算結(jié)果為 4.3pmol/L； (9) 按照步驟（2)中的操作步驟，使用BeckmanDxl800胰島素化學(xué)發(fā)光免疫分析試 劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)BeckmanDxl800免疫分析系統(tǒng)，然后用該系統(tǒng)測(cè)定標(biāo)稱濃度分別為 143. 4pmol/L、15.lpmol/L、44. 7pmol/L、75. 2pmol/L、105.Opmol/L、134. 5pmol/L膜島素國(guó) 家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將測(cè)定結(jié)果平均值和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行線性擬合，計(jì)算線性相關(guān)系數(shù) 為 0? 992 ; (10)按照步驟（2)中的操作步驟，使用BeckmanDxl800胰島素化學(xué)發(fā)光免疫分析試 劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)BeckmanDxl800免疫分析系統(tǒng)，然后用該系統(tǒng)測(cè)定標(biāo)稱濃度分別為 143. 4pmol/L、15.lpmol/L、44. 7pmol/L、75. 2pmol/L、105.Opmol/L、134. 5pmol/L膜島素國(guó) 家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將測(cè)定結(jié)果平均值和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行Deming回歸，回歸直線的斜率 在95%置信水平下的置信區(qū)間為[0.4858, 1.4612]，截距在95%置信水平下的置信區(qū)間為 [-36. 6198, 27. 3289]，因此證明試劑盒校準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)之間具有互換性。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的商品化定量檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)方法，其特征在于：所述方法還 包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選取： 進(jìn)行商品化定量檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)選用國(guó)家計(jì)量行政部門批準(zhǔn)的與檢測(cè)項(xiàng)目、基 質(zhì)效應(yīng)一致的的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)； 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度、精密度或不確定度的預(yù)期要求，選擇合適的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行 試劑盒評(píng)價(jià)，所選標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度應(yīng)當(dāng)確保在最終檢測(cè)結(jié)果不確定度分量中，由標(biāo)準(zhǔn) 物質(zhì)不確定度引入的分量占檢測(cè)結(jié)果合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的1/3至1/10 ; 當(dāng)滿足要求的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不可獲得時(shí)，選用其它來源的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、參考物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn) 品，并在檢驗(yàn)報(bào)告中進(jìn)行說明。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種商品化定量檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)方法，所述方法為采用評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)樣品進(jìn)行評(píng)價(jià)，所評(píng)價(jià)指標(biāo)包括準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)、精密度評(píng)價(jià)、重復(fù)性評(píng)價(jià)、檢出限評(píng)價(jià)、定量限評(píng)價(jià)、線性或范圍評(píng)價(jià)、特異性評(píng)價(jià)、基質(zhì)效應(yīng)與互通性評(píng)價(jià)。本發(fā)明建立了一種準(zhǔn)確可靠、可被廣大生產(chǎn)企業(yè)及科研工作者接受的商品化定量檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)方法。
【IPC分類】G01N33-00
【公開號(hào)】CN104569314
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510024683
【發(fā)明人】武利慶, 金有訓(xùn), 楊彬, 李佳樂, 李?yuàn)W欣
【申請(qǐng)人】中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月19日