。
[0165] 通過G-25凝膠柱純化。
[0166] 將純化好的連接產(chǎn)物用D2溶液對(duì)倍稀釋，即可。
[0167] (3) SA包被磁球，具體步驟如下：
[0168] 按照實(shí)施例1的方法配制A溶液。
[0169] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0170] 將磁珠加入與包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠的懸浮濃度為20mg/ ml，再加入CMC(濃度為10mg/ml)，加入純化的SA。
[0171] 將磁珠懸浮液放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速度： 260rpm)。
[0172] 以POOl:純化水=1:9體積比率配制ρΗ7· 4的PBS緩沖液500ml，加入2. 5g BSA 混勻溶解，即為磁珠清洗液。
[0173] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0174] 按照實(shí)施例1的方法制備C溶液。
[0175] 將清洗完畢后的磁珠懸浮在C溶液中，懸浮濃度為20mg/ml，即得到SA包被的磁球 懸浮液，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0176] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. lmg/ml的懸浮液，備用。
[0177] ⑷A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、高點(diǎn)校準(zhǔn)品的制備
[0178] 將A I抗原用50 %牛血清制品按不同比例稀釋成濃度為16. 668ng/ml及 I. 667ng/ml兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0179] (5)組裝
[0180] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲(chǔ)存于2~8°C。
[0181] 實(shí)施例6
[0182] (1)抗A I抗體生物素化，具體步驟如下：
[0183] 取100 μ g生物素及Img抗A I抗體用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液） 調(diào)整到lml。放入透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，37°C反應(yīng)2小時(shí)。
[0184] 通過G-25凝膠柱純化。
[0185] 配制D2溶液，純化好的連接產(chǎn)物用D2溶液對(duì)倍稀釋，即可。
[0186] (2) SA 的標(biāo)記
[0187] 取100 μ g SA用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入透析 液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化醋，37°C反應(yīng)2小時(shí)。
[0188] G-25凝膠柱純化。
[0189] 純化好的連接產(chǎn)物用D2溶液對(duì)倍稀釋，即可。
[0190] (3) A I抗原包被磁球，具體步驟如下：
[0191] 按照實(shí)施例1的方法配制好A溶液。
[0192] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0193] 將磁珠加入包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液，使磁珠的懸浮濃度為20mg/ml，再 加入CMC (濃度為10mg/ml)，加入純化的A I抗原
[0194] 將磁珠懸浮液放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0195] 以P001:純化水=1:9體積比率配制pH7. 4PBS緩沖液500ml，加入2. 5g BSA混勻 溶解，即為磁珠清洗液。
[0196] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0197] 按照實(shí)施例1的方法配制C溶液。
[0198] 將清洗完畢后的磁珠懸浮在C溶液中，懸浮濃度為20mg/ml，即得到抗A I抗體包 被的磁球懸浮液，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0199] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. lmg/ml的懸浮液，備用。
[0200] (4) A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、高點(diǎn)校準(zhǔn)品
[0201 ] 將A I抗原用50 %牛血清制品按不同比例稀釋成濃度為15. 386ng/ml及 I. 367ng/ml兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0202] (5)組裝
[0203] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲(chǔ)存于2~8°C。
[0204] 實(shí)施例7
[0205] (I)A I抗原-BSA的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0206] 透析液（F溶液）的配制：在5000ml容器中加入Na2CO3H. 31g和NaHC0326 . 46g，加 純化水稀釋至4500ml，將配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0207] 選用合適截留量（常用分子量14000)的透析袋，量取足夠容納F溶液的尺寸，潤 濕后扎緊一端，純化水試漏3次（需無漏液）。
[0208] 取100 μ g A I抗原-BSA蛋白連接物用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液） 調(diào)整到Iml。放入透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化 酯，37°C反應(yīng)2小時(shí)。
[0209] 通過G-25凝膠柱純化A I抗原-BSA蛋白連接物與ABEI的連接產(chǎn)物。
[0210] 仏溶液的配制：在2000ml燒杯中加入200ml的0. 5M磷酸鹽緩沖液（POOl溶液）、 20g BSA、8g NaN3、2g MgCl2 · 6H20、600ml 甘油，加純化水稀釋到 2000ml，過濾。
[0211] 將純化好的連接產(chǎn)物用D2溶液對(duì)倍稀釋，即得到標(biāo)記有ABEI的A I抗原-BSA蛋 白連接物。
[0212] (2)抗A I抗體包被磁球，具體步驟如下：
[0213] A溶液的配制：稱取2. 55g三水合乙酸鈉放入5000ml燒杯中，用量筒量取4500ml 純化水倒入燒杯，待溶解后再加入14ml乙酸混勻后，加純化水稀釋至5000ml (pH為3. 6)。
[0214] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0215] 將粒徑為1 μ m磁珠加入與包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠的懸浮濃 度為20mg/ml，再加入CMC (濃度為10mg/ml)，加入純化的抗A I抗體。
[0216] 將磁珠懸浮液放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0217] 以P001:純化水=1:9體積比率配制ρΗ7· 4磷酸鹽緩沖液（PBS) 500ml，加入2. 5g BSA溶解，混勻，即為磁珠清洗液。
[0218] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0219] 按照實(shí)施例1的方法制備C溶液。
[0220] 將清洗完畢后的磁珠懸浮于C溶液中，懸浮濃度為20mg/ml，即得到抗A I抗體包 被的磁球，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0221] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. lmg/ml的懸浮液，備用。
[0222] ⑶A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、尚點(diǎn)校準(zhǔn)品的制備
[0223] 將A I抗原用50 %牛血清制品按不同比例稀釋成濃度分別為14. 386ng/ml及 0. 667ng/ml的兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0224] (4)組裝
[0225] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲(chǔ)存于2~8°C。
[0226] 實(shí)施例8
[0227] (1)抗A I抗體的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0228] 透析液（F溶液）的配置：在5000ml燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加 水定容至4500ml.配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0229] 選用合適截留量（常用分子量14000)的透析袋，量取足夠容納F溶液的尺寸，潤 濕后扎緊一端，純化水試漏3次（需無漏液）。
[0230] 取Img抗A I抗體用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ μ g ABEI活化酯，37°C反應(yīng)2 小時(shí)。
[0231] 通過G-25凝膠柱純化抗A I抗體與ABEI的連接產(chǎn)物。
[0232] 按照實(shí)施例1的方法制備D2溶液。
[0233] 將純化好的連接產(chǎn)物用仏溶液對(duì)倍稀釋。
[0234] (2)羊抗FITC多克隆抗體包被磁球，具體步驟如下：
[0235] 按實(shí)施例1中方法配制好A溶液。
[0236] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0237] 將磁珠加入包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠懸浮濃度為20mg/ml，再 加入CMC (濃度為10mg/ml)，按一定比率加入純化的羊抗FITC多克隆抗體。
[0238] 將磁珠放入恒溫震蕩水浴箱中37 °C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0239] 以POOl:純化水=1:9體積比率配制pH7. 4PBS緩沖液500ml，加入2. 5g BSA混勻 混勻溶解，即為磁珠清洗液。
[0240] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0241] 按照實(shí)施例1的方法制備C溶液。
[0242] 將清洗完畢后的磁珠懸浮在C溶液中，懸浮濃度為20mg/ml，即得到羊抗FITC多克 隆抗體包被的磁球懸浮液，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0243] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. lmg/ml的懸浮液，備用。
[0244] (3) A I抗原-BSA蛋白連接物標(biāo)記，具體步驟如下：
[0245] 透析液（F溶液）的配