生產(chǎn)）。
[0049] 采用本發(fā)明提供的試劑盒，能夠以超高靈敏度測(cè)定cTnl濃度；檢測(cè)靈敏度例如達(dá) 至Ij lpg/mL，功能靈敏度例如達(dá)到2. 5pg/mL。配合化學(xué)發(fā)光免疫分析儀使用，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)、 快速、靈敏、定量地檢測(cè)樣本中cTnl濃度結(jié)果。本發(fā)明所能實(shí)現(xiàn)的檢測(cè)靈敏度高于現(xiàn)有技 術(shù)5至200倍，因而能夠更加靈敏地檢測(cè)出樣本中的cTnl含量，進(jìn)而為AMI的早期診斷提 供更加準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，提高AMI早期診斷的敏感性，從而能夠及早準(zhǔn)確診斷出AMI，為AMI 的治療提供更充足的時(shí)間。
【附圖說明】
[0050] 圖1是使用本發(fā)明提供的cTnl檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣本中的cTnl含量的原理示意 圖；其中，圖中各標(biāo)記意義如下：
[0051] _ 一CTnI抗原；著一磁性微球；?一樣本中的其他成分；Y-針對(duì)CTnI的抗 體； < 一標(biāo)記有ABEI的cTnl抗體；-包被磁性微球的cTnl抗體； 一光信號(hào)。
[0052] 圖2顯示了實(shí)施例8和實(shí)施例9的線性測(cè)試結(jié)果對(duì)比。
[0053] 圖3顯示了實(shí)施例10和實(shí)施例11的線性測(cè)試結(jié)果對(duì)比。
【具體實(shí)施方式】
[0054] 下面將通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地說明，應(yīng)理解，本發(fā)明的范圍并不限 于此。
[0055] 制備1 :包被cTnl的單抗或多抗的磁性微球懸浮液的制備
[0056] 此制備步驟使用的免疫磁性微球選擇Merck公司生產(chǎn)的濃度為100mg/mL，羥基為 95mg KOH/g的納米磁性微球懸浮液。
[0057] A溶液的配制（pH3. 6醋酸緩沖液）：稱取2. 55g三水合乙酸鈉，用4500mL純化水 溶解，再加入HmL乙酸，混勻后，用純化水定容至5000mL(pH3. 6)。
[0058] 將磁性微球中懸浮于5倍于包被體積的上述pH3. 6醋酸緩沖液，使磁球濃度為 20mg/mL ;再加入1-環(huán)已基-2-嗎啉乙基碳二亞胺對(duì)甲苯磺酸鹽（CMC)，使其濃度為IOmg/ mL ;按所得溶液與cTnl單抗或多抗的重量比為Img :12 μ g的比例加入純化的cTnl單抗或 多抗，放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)。
[0059] 以0· lmol/1的PBS緩沖液：純化水=1:9的體積比配制pH為7. 4的PBS緩沖液 500mL，加入2. 5g BSA混勻溶解，即為磁珠清洗液。將溫浴好的磁性微球倒入燒杯中，然后 置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍體積的磁性微球清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵 上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗步驟四次。
[0060] 磁性微球的懸浮：將清洗后的磁性微球加入包被體積的BSA水溶液（5g/L，含Ig/ L疊氮鈉），得到磁性微球懸浮液中，懸浮濃度為20mg/mL，此懸浮液體積即為此制備步驟所 述的包被體積。
[0061] 制備2 :包被有鏈霉親和素的磁性微球懸浮液的制備
[0062] 此制備步驟使用的免疫磁性微球選擇Merck公司生產(chǎn)的濃度為100mg/mL，羥基為 95mg ΚΟΗ/g的納米磁性微球懸浮液。
[0063] A溶液的配制（pH3. 6醋酸緩沖液）：稱取2. 55g三水合乙酸鈉，用4500mL純化水 溶解，再加入HmL乙酸，混勻后，用純化水定容至5000mL(pH3. 6)。
[0064] 將磁性微球加入與包被體積等量的上述pH3. 6醋酸緩沖液懸浮，使磁性微球濃度 為20mg/mL，再加入CMC (使其濃度為10mg/mL)，按所得溶液與鏈霉親和素的重量比為Img : 12 μ g的比例加入鏈霉親和素，放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)
[0065] 磁性微球清洗液的配制：以0. lmol/1的PBS緩沖液：純化水=1:9的體積比配制 pH為7. 4的PBS緩沖液500mL，加入2. 5g BSA混勻溶解，即為磁珠清洗液。
[0066] 將溫浴好的磁性微球倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍體 積的磁性微球清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清 洗步驟四次。
[0067] 磁性微球的懸?。簩⑶逑春蟮拇判晕⑶蚣尤氚惑w積的BSA水溶液（5g/L，含Ig/ L疊氮鈉），得到磁性微球懸浮液中，懸浮濃度為20mg/mL，即為包被有鏈霉親和素的磁球的 懸溶液。
[0068] 制備3 :包被有FITC單抗或多抗的磁性微球懸浮液的制備
[0069] 此制備步驟使用的免疫磁性微球選擇Merck公司生產(chǎn)的濃度為lOOmg/mL，羥基數(shù) 為95mg KOH/g的納米磁性微球懸浮液。
[0070] A溶液的配制（pH3. 6醋酸緩沖液）：稱取2. 55g三水合乙酸鈉，用4500mL純化水 溶解，再加入HmL乙酸，混勻后，用純化水定容至5000mL(pH3. 6)。
[0071] 將磁性微球加入與包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液懸浮，使磁性微球濃度為 20mg/mL，再加入CMC，使其濃度為10mg/mL，按所得溶液與FITC單抗或多抗的重量比為Img : 12 μ g的比例加入FITC單抗或多抗，放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)
[0072] 磁性微球清洗液的配制：以0. lmol/1的PBS緩沖液：純化水=1:9的體積比配制 pH為7. 4的PBS緩沖液500mL，加入2. 5g BSA混勻溶解，即為磁珠清洗液。
[0073] 將溫浴好的磁性微球倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍體 積的磁性微球清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清 洗步驟四次。
[0074] 磁性微球的懸?。簩⑶逑春蟮拇判晕⑶蚣尤氚惑w積的BSA水溶液（5g/L，含lg/L 疊氮鈉），得到磁性微球懸浮液，懸浮濃度為20mg/mL，即為包被有FITC單抗或多抗的磁球 的懸溶液。
[0075] 制備4 :標(biāo)記有ABEI的cTnl單抗或多抗溶液的制備
[0076] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。選用截留量為14000的透析袋， 量取合適的尺寸，取Img cTnl單抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整 至Ij lmL，放入透析液中，透析2小時(shí)，攪拌速度400rpm。將透析好的溶液裝入小白瓶中（每 瓶ImL)，加入300 μ g ABEI-半琥珀酰胺酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯，37°C反應(yīng)2小時(shí)，得到標(biāo) 記ABEI的cTnl抗體溶液。
[0077] 安裝好G-25凝膠柱，用純化水洗脫干凈后，再用pH值7. 4的PBS緩沖液對(duì)反應(yīng)溶 液進(jìn)行平衡洗脫。
[0078] 凝膠柱平衡洗脫完畢后，將標(biāo)記好ABEI的cTnl抗體溶液過柱純化，然后收集出現(xiàn) 峰值的溶液。
[0079] 將收集好的蛋白溶液，加入等體積的含0. 5g/mL的BSA的保護(hù)液，既得。
[0080] 制備5 :cTnI單抗或多抗標(biāo)記的生物素溶液的制備
[0081] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。選用截留量為14000的透析袋， 量取合適的尺寸，取ImgcTnI單抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整 至Ij ImL,倒入透析袋中，扎緊透析袋另一端，放入透析液中，透析2小時(shí)，攪拌速度400rpm。
[0082] 將活化的生物素溶于DMF中，按照生物素與cTnl單抗或多抗的摩爾比為20:1的 比例將二者混合反應(yīng)2h。
[0083] 將反應(yīng)后的液體用0. lmol/L PBS于4°C透析24小時(shí)，即制成cTnl單抗或多抗的 生物素溶液。
[0084] 制備6 :標(biāo)記cTnl單抗或多抗的FITC溶液的制備
[0085] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。選用截留量為14000的透析袋，量 取合適的尺寸，取Img的cTnl單抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整 到 lmL，倒入透析袋中，扎緊透析袋另一端，放入透析液中，透析2小時(shí)（攪拌速度400rpm)。
[0086] 透析好的溶液裝入小白瓶中（每瓶ImL)，加入100 μ g FITC，室溫反應(yīng)2. 5小時(shí)， 得到標(biāo)記cTnl單抗或多抗的FITC溶液。
[0087] 配制pH7. 4PBS緩沖液作為層析柱的平衡液；層析柱用純化水沖洗24小時(shí)后，連接 平衡液與層析柱平衡30分鐘；放干上表面液體，加入上述標(biāo)記cTnl單抗或多抗的FITC溶 液，再次放干表面液體。加入適量平衡液，連通上下管道，下方連接核酸蛋白檢測(cè)儀（純化 前預(yù)熱2小時(shí)）調(diào)整光亮和精確度。調(diào)零，收集峰值時(shí)間段的液體，即為所需要的標(biāo)記cTnl 單抗或多抗的FITC溶液。
[0088] 制備7 :cTnI單抗或多抗標(biāo)記的鏈霉親和素溶液的制備
[0089] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加 水定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。選用截留量為14000的透析 袋，量取合適的尺寸備用。取Img cTnl單抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶 液）調(diào)整到lmL，倒入透析袋中，扎緊透析袋另一端，放入透析液中，透析2小時(shí)（攪拌速度 400rpm)
[0090] 透析好的溶液裝入小白瓶中（每瓶ImL)，加入50 μ g鏈霉親和素，37°C反應(yīng)2小 時(shí)，得到標(biāo)記cTnl抗體的鏈霉親和素溶液。
[0091] 安裝好G-25凝膠柱，用純化水洗脫干凈后，在用pH值7. 4的PBS緩沖液進(jìn)行平衡 洗脫。
[0092] 凝膠柱平衡洗脫完畢后，將標(biāo)記好cTnl抗體的鏈霉親和素過柱純化，然后收集出 現(xiàn)峰值的溶液。
[0093] 將收集好的蛋白溶液，加入等體積的含0. 5g/mL的BSA保護(hù)液，即得。
[0094] 制備8 :cTnI單抗或多抗標(biāo)記的FITC單抗或多抗溶液的制備
[0095] 透析液（F溶液）的配制：在5000mL燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500mL。配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。選用截留量為14000的透析袋， 量取合適的尺寸備用。取Img cTnl單抗或多抗用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液） 調(diào)整到ImL,倒入透析袋中，扎緊另一端，放入透析液中，透析2小時(shí)（攪拌速度400rpm)。
[0096] 透析好的溶液裝入小白瓶中（每瓶ImL)，加入50 μ gFITC單抗或多抗，37°C反應(yīng)2 小時(shí)，得到標(biāo)記cTnl抗體的FITC單抗或多抗溶液。
[0097] 安裝好G-25凝膠柱，用純化