血漿用于區(qū)分肝癌與肺癌的生物標(biāo)記物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于區(qū)分肝癌與肺癌的新生物標(biāo)記物，所述生物標(biāo)記物對(duì)不同癌癥中 病理學(xué)改變較敏感,特別是在疾病或損傷早期階段。
【背景技術(shù)】
[0002] 代謝組學(xué)（1116丨3130110111；[08/1116丨313010111；[08)是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)之 后提出的一門新的學(xué)科，是系統(tǒng)生物學(xué)中的一個(gè)重要組成部分。生物機(jī)體在受到外界病源 或環(huán)境改變的刺激時(shí)，會(huì)產(chǎn)生多層次、多器官和多組織的應(yīng)答反應(yīng)，這些應(yīng)答反應(yīng)最終將影 響到終端代謝水平的變化正是研究這種機(jī)體在受到內(nèi)因、外因的刺激時(shí)，機(jī)體內(nèi)的終端小 分子代謝物(通常指分子量小于1000 Da)的變化規(guī)律的科學(xué)，從整體上動(dòng)態(tài)地闡述生理或病 理狀態(tài)下機(jī)體對(duì)外界刺激的應(yīng)答和動(dòng)態(tài)系統(tǒng)性的變化過(guò)程，為全面理解多因素影響下的癌 癥的發(fā)生機(jī)制研究將提供一個(gè)新的視角。同時(shí)，從整體上考察人體的生理狀態(tài)，能得到更多 的疾病相關(guān)信息，有利于癌癥的早期診斷。另外，代謝組學(xué)技術(shù)分析的樣本主要是尿液和血 液，其采集過(guò)程對(duì)人體無(wú)傷害或是有極小的傷害，因此代謝組學(xué)的方法將有利于癌癥的大 規(guī)模篩查。
[0003] 癌癥是一大類惡性腫瘤的統(tǒng)稱。癌細(xì)胞的特點(diǎn)是無(wú)限制、無(wú)止境地增生，使患者體 內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗；癌細(xì)胞釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀；癌細(xì)胞還可 轉(zhuǎn)移到全身各處生長(zhǎng)繁殖，導(dǎo)致人體消瘦、無(wú)力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴(yán)重的臟器功能 受損等等，繼而破壞組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能，引起壞死出血合并感染，患者最終由于器官 功能衰竭而死亡。
[0004] 肺癌是最常見(jiàn)的肺原發(fā)性惡性腫瘤，無(wú)論是在全世界還是國(guó)內(nèi)上來(lái)看，肺癌均占 腫瘤之首，其發(fā)病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位。肺癌的發(fā) 病率和死亡率在逐年上升，世界年患病人數(shù)在90萬(wàn)左右，我國(guó)近10年內(nèi)惡性腫瘤發(fā)病率及 死亡率以肺癌增長(zhǎng)最為迅速，肺癌已成為我國(guó)第一大癌癥。肺癌是復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高的腫瘤，即 使進(jìn)行根治性切除，也多因術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移而死亡。肺癌的病發(fā)與不良的生活習(xí)慣，環(huán)境因 素與大氣污染等密切相關(guān)。肺癌生長(zhǎng)速度緩慢，病程較長(zhǎng)的早期診斷與治療可以在很大程 度上給患者帶來(lái)治愈的機(jī)會(huì)，肺癌的診斷中腫瘤標(biāo)記物的檢測(cè)就顯得十分重要。
[0005] 據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界每年新發(fā)肝癌患者約六十萬(wàn)，居惡性腫瘤的第五位。原發(fā)性肝癌按 細(xì)胞分型可分為肝細(xì)胞型肝癌、膽管細(xì)胞型肝癌及混合型肝癌。按腫瘤的形態(tài)可分為結(jié)節(jié) 型、巨塊型和彌漫型。原發(fā)性肝癌在我國(guó)屬于高發(fā)病，一般男性多于女性。中國(guó)是乙肝大 國(guó)，我國(guó)的肝癌多在乙肝肝硬化的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)，丙肝病人也在逐漸增加，乙肝后也會(huì)發(fā) 展為肝癌。目前我國(guó)發(fā)病人數(shù)約占全球的半數(shù)以上，占全球肝癌病人的55%，已經(jīng)成為嚴(yán)重 威脅我國(guó)人民健康和生命的一大殺手。因其惡性度高、病情進(jìn)展快，病人早期一般沒(méi)有什么 不適，一旦出現(xiàn)癥狀就診，往往已屬中晚期。故治療難度大、療效差，發(fā)病后生存時(shí)間短。在 我國(guó)，每年有11萬(wàn)人死于肝癌，其中男性8萬(wàn)，女性3萬(wàn)，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%。作 為最常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，肝癌死亡率僅居高，全國(guó)每年至少有12萬(wàn)人被肝癌奪去生命。
[0006] 肝癌起病隱匿，超過(guò)60%的肝癌患者在初次就診時(shí)已經(jīng)進(jìn)入中晚期，從而失去根 治性治療的機(jī)會(huì)，總體5年生存率只有7%左右。目前，臨床上常用的肝癌診斷標(biāo)記物為甲 胎蛋白，簡(jiǎn)稱AFP。然而，甲胎蛋白診斷肝癌的敏感度和特異度并不十分理想，在妊娠婦女、 急慢性肝炎、生殖腺腫瘤和胃腸道腫瘤等人群中也可能升高。而且，臨床上有40%的肝癌患 者甲胎蛋白并不升高，呈現(xiàn)陰性。因此，尋找特異性和敏感性均高的診斷肝癌、特別是早期 肝癌的分子標(biāo)記物，成為臨床研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。
[0007] 目前臨床上以大分子癌癥標(biāo)記物的單一或聯(lián)合使用作為癌癥診斷手段的研究較 多，而對(duì)于小分子類癌癥標(biāo)記物缺乏系統(tǒng)深入的研究。現(xiàn)代研究表明，內(nèi)源性小分子物質(zhì)多 胺類化合物與癌癥的發(fā)生密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)外研究均表明癌癥患者體內(nèi)多胺水平高于正常人 群及非腫瘤患者體內(nèi)多胺水平。多胺在生物體內(nèi)多是水溶性的，通常在體液pH環(huán)境下完全 質(zhì)子化，以多陽(yáng)離子形式存在，常與RNA，DNA等多陰離子復(fù)合體結(jié)合在一起，并處于動(dòng)態(tài)平 衡之中。多胺能直接參與生物體內(nèi)的多種生理活動(dòng)，如核酸的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯，蛋白質(zhì)的 合成和膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定等，它是生物體生長(zhǎng)和細(xì)胞代謝所必須的內(nèi)源性微量活性物質(zhì)。一般 在RNA，DNA及蛋白質(zhì)合成增高之前，多胺含量急劇上升，如在癌癥組織中多胺水平明顯升 高，而多胺的過(guò)度積累還會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡及轉(zhuǎn)變，使癌癥進(jìn)一步惡化。多胺包括1，3-丙 二胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺、?；摺Ⅴ；返取６喟钒?，3-丙二胺、腐胺、尸胺、精 脒、精胺、酰化精脒、?；返?。目前研究未能證實(shí)何種多胺為癌癥的生物標(biāo)記物，也沒(méi)有 發(fā)現(xiàn)區(qū)分不同癌癥的特異性生物標(biāo)記物。這大大影響了多胺作為癌癥輔助診斷、預(yù)后和療 效評(píng)價(jià)指標(biāo)等方面的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供用于肝癌與肺癌分型的特異性多胺生物標(biāo)記物，該標(biāo)記物為 人血漿中的腐胺與精脒，更確切地說(shuō)是兩者的乘積。
[0009] 本發(fā)明采用UHPLC-MS/MS法分別檢測(cè)肺癌患者與肝癌患者血漿樣本中1，3-丙 二胺（DAP)，腐胺（PUT)，尸胺（CAD)，精脒（SH))，精胺（SPM)，胍丁胺（AGM)，鳥(niǎo)氨酸 (0RN)，賴氨酸（LYS)，精氨酸（ARG)，S-腺苷蛋氨酸（SAM)，?；罚∟PUT)，?；?(NSPM)，?；撸∟SPD)與Y-氨基丁酸（GABA)等14種與多胺合成與分解代謝密切 相關(guān)的物質(zhì)° (詳見(jiàn) Determination of polyamine metabolome in plasma and urine by ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method:Application to identify potential markers for human hepatic cancer. Anal Chim Acta. 2013;791:36-45)對(duì)于得到的檢測(cè)數(shù)據(jù)，首先對(duì)所測(cè)得的血漿多胺類物質(zhì)的數(shù) 據(jù)進(jìn)行異常值檢測(cè)，去掉由于樣本收集或者測(cè)定誤差等導(dǎo)致的異常樣本。進(jìn)而