膠乳凝集抑制免疫測定的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及在膠乳池度免疫測定（latex turbidimetric immunoassay)中避免 由血液樣品中的某種組分引起的非特異反應的方法和在所述方法中使用的試劑（試藥， reagent)〇
【背景技術】
[0002] 膠乳濁度免疫測定（下文也稱為LTIA)是通過使用抗原或抗體被固定至其的膠乳 粒子（抗原或抗體固定化膠乳粒子（antigen-or antibody-immobilized latex particle， 固定抗原或抗體的膠乳粒子））來測量測試物質（被分析物（analyte))的方法，并且被廣 泛用于臨床檢查領域。通過LTIA測量作為被分析物的抗原（被分析物抗原）的方法大體上 被分類為通過抗被分析物抗體固定化膠乳粒子和被分析物抗原之間的反應而形成夾心型 免疫復合物，從而從與免疫復合物的形成相關的膠乳粒子的凝集水平來測量被分析物（抗 原）的方法（下文也稱為夾心LTIA)，和引起抗原固定化膠乳粒子和測試樣品中的抗原（被 分析物）彼此競爭以使免疫復合物的形成在所述膠乳粒子和抗體之間被抑制，從而從與免 疫復合物的形成的抑制相關的膠乳粒子的凝集抑制水平來測量被分析物（抗原）的方法 (下文也稱為凝集抑制LTIA)。
[0003] 在LTIA中，常見的是，即使被分析物不存在于測試樣品如血清中，但由于測試樣 品中的某種組分所致，不應該發(fā)生的抗原或抗體固定化膠乳粒子的凝集確實發(fā)生了，相反， 應該發(fā)生的凝集沒有發(fā)生也是常見的。這被稱為非特異反應并且已知引起多種測量誤差。
[0004] 用于避免非特異反應的一種已知方法是將多種物質加入到反應體系的技術。
[0005] 專利文件1描述了這樣的一種方法，其中將無機硼化合物與緩沖體系聯(lián)合加入樣 品溶液，作為用于在夾心LTIA中用于去除非特異濁度（與非特異凝集同義）的方法。然 而，該方法是去除使用抗體固定化膠乳粒子的測定中不應該發(fā)生的凝集發(fā)生的方法并且不 是能夠處理沒有在凝集抑制LTIA中應該發(fā)生的凝集的方法。
[0006] 在通過凝集抑制LTIA測量血液樣品的情況下，由于血液樣品中的某種組分的作 用，即使該血液樣品不含有被分析物，也僅在一些情況下獲得比在通過使用不含有血液組 分的緩沖溶液作為測試樣品進行測量時獲得的凝集程度更低的凝集程度。備選地，在一些 情況下，凝集的程度（吸光度）在用緩沖溶液和用含有血液組分的緩沖溶液稀釋用于測試 樣品中的被分析物的濃度較準的標準物質（下文也稱為濃度較準用標準物質）的情況之間 不一致和不相同。然而，如上所述，甚至在目前，尚未確立用于避免破壞在凝集抑制LTIA中 應該發(fā)生的凝集的非特異反應的方法，并且需要開發(fā)新的方法。
[0007] 引用列表
[0008] 專利文獻
[0009] 專利文件1 :日本未審公開的專利公開號64-044855
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 技術問題
[0012] 本發(fā)明的一個目的是提供一種能夠避免破壞在凝集抑制LTIA中應該發(fā)生的凝集 的非特異反應的方法。
[0013] 解決問題的方案
[0014] 作為深入研宄以解決凝集抑制LTIA中的問題的結果，本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，通 過向用于稀釋濃度較準用標準物質的緩沖液中初始加入一種或多種用于避免非特異反應 的化合物（避免非特異反應化合物），所述化合物選自由聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物 (下文也稱為POE-POP嵌段共聚物）、聚氧乙烯烷基醚（下文也稱為POE烷基醚）、聚氧乙烯 脂肪酸酯（下文也稱為POE脂肪酸酯）和多價季胺聚合物化合物組成的組，可以降低通過 對本身作為測試樣品的緩沖液進行測量獲得的凝集程度和通過對不含有被分析物的血液 樣品進行測量獲得的凝集程度之間的差異，從而完成本發(fā)明。
[0015] 本發(fā)明具有以下構成。
[0016] <1> 一種避免膠乳凝集抑制測試（latex agglutination inhibition test)中的 非特異反應的方法，所述方法包括在一種或多種選自由聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、 聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯和多價季胺聚合物化合物組成的組中的化合物存在下 進行膠乳凝集抑制測定。
[0017] 〈2>根據(jù)〈1>所述的方法，其中所述非特異反應是破壞當測試樣品中不存在被分 析物時應該發(fā)生的凝集的非特異反應。
[0018] 〈3>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物由式 (I)表示：
[0019] HO (C2H4O) a- (C3H6O) b- (C2H4O) CH (I)
[0020] (其中a、b和c表示任意整數(shù)并且a+c被確定為表示具有4至200個單元的平均 聚合度的環(huán)氧乙烷，而b被確定為表示具有5至100個單元的平均聚合度的環(huán)氧丙烷）。
[0021] 〈4>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述聚氧乙烯烷基醚由式（II)表示：
[0022] R1O(C2H4O)nH (II)
[0023] (其中Rl表示碳數(shù)為8至20的烷基基團（所述烷基基團可以是伯或仲烷基并且 可以在所述烷基基團中具有一個或多個雙鍵）并且η表示7至40的任意整數(shù)）。
[0024] 〈5>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述聚氧乙烯脂肪酸酯由式（III)表示：
[0025] R2COO (C2H4O)nR3 (III)
[0026] (其中R2表示碳數(shù)為16至18的烷基基團（所述烷基基團可以具有一個或多個雙 鍵）并且η表示170至180的任意整數(shù)，而R 3表示氫原子或R 2COO基團）。
[0027] 〈6>根據(jù)〈1>或〈2>所述的方法，其中所述多價季胺聚合物化合物是聚凝胺 (polybrene，（商）1，5-二甲基-1，5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物）（CAS號：CB1327317)。
[0028] 〈7> -種用于膠乳凝集抑制測試的試劑（reagent，試藥），其中一種或多種選自由 聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯和多價季胺聚合物 化合物組成的組中的化合物包含在以下（1)至（4)中的任意一種或多種中：
[0029] (1)濃度較準用標準物質（concentration calibration-standard substance)，
[0030] (2)含有抗被分析物抗體的溶液，
[0031] (3)含有抗原化膠乳粒子（antigen-immobilized latex particle)的溶液，和
[0032] (4)用于溶解或稀釋所述濃度較準用標準物質的溶液。
[0033] 〈8>根據(jù)〈7>所述的試劑，其用于測量人血液樣品中的替考拉寧（teicoplanin)。
[0034] 〈9> 一種用于在膠乳凝集抑制測試中避免非特異反應的化學劑（agent，化學試 劑），所述化學劑包含一種或多種選自由聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯烷基 醚、聚氧乙烯脂肪酸酯和多價季胺聚合物化合物組成的組中的化合物作為活性成分。
[0035] 發(fā)明的有益效果
[0036] 本發(fā)明提供一種避免破壞在凝集抑制LTIA中應該發(fā)生的凝集的非特異反應的方 法。本發(fā)明使得能夠通過凝集抑制LTIA精確地測量血液樣品中的被分析物。
[0037] 附圖簡述
[0038] [圖1]圖1示出了當濃度較準用標準物質通過不含有人血清組分的緩沖液稀釋時 的較準曲線（X)、當添加有被分析物的人血清通過不含有人血清組分的緩沖液稀釋時的較 準曲線（〇）和當添加有被分析物的人血清通過沒有添加被分析物的人血清稀釋時的較準 曲線（▲)。
[0039] [圖2]圖2是對含有本發(fā)明的避免非特異反應化合物的濃度較準用標準物質-稀 釋溶液的組成的研宄結果的示意圖。
[0040] [圖3]圖3示出了當濃度較準用標準