施例3:
[0038]取鐵皮石斛干燥粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml使溶解，用乙酸乙酯洗滌2次，每次30ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。取夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷對照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗。用全自動點樣儀(Αμ tomatic TLC Sampler-4)帶狀點樣,分別取供試品溶液7 μ 1、對照藥材溶液7 μ I和對照品溶液I μ 1，點于同一 Merck高效HSGF254硅膠薄層板上。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:4:1:1)為展開劑，上行展開至7cm，取出，揮干溶劑。將薄層板均勻噴以5%三氯化鋁試液，放入105°C的烘箱中加熱3分鐘，置于紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色斑點，即為鐵皮石斛。
[0039]實施例4:
[0040]取樣品(鐵皮石斛、紫皮石斛)粉末lg，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15ml使溶解，用乙酸乙酯洗滌2次，每次30ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。取佛來心苷對照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗。用全自動點樣儀(AutomaticTLC Sampler-4)帶狀點樣，分別取供試品溶液5 μ I和對照品溶液I μ 1，點于同一國產(chǎn)高效HSGF254硅膠薄層板上。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4:3:1:1)為展開劑，上行展開至7cm，取出，揮干溶劑。將薄層板均勻噴以1%三氯化鋁試液，放入105°C的烘箱中加熱3分鐘，置于紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色斑點，即為鐵皮石斛，沒有斑點的即為紫皮石斛藥材。
[0041]實施例5:
[0042]取樣品鐵皮石斛對照藥材、紫皮石斛、串珠石斛(Dendrobi μ m faiconeri)、金欽石斛(Dendrobi μ m nobi Ie)、鼓植石斛(Dendrobi μ m chrysotox μ m)、疊鞘石斛(Dendrobi μ m a μ rantiac μ m)、束花石斛(Dendrobi μ m chrysanth μ m)、5? 唇石斛(Dendrobi μ m aphyll μ m)粉末各lg,加甲醇50ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干，殘洛加水15ml使溶解，用乙酸乙酯洗滌2次，每次30ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。取夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷對照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗。用全自動點樣儀(A μ tomatic TLC Sampler-4)帶狀點樣,分別取供試品溶液4 μ 1、對照藥材溶液和對照品溶液I μ I，點于同一麗高效HSGF254硅膠薄層板上。以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4:3:1:1)為展開劑，上行展開至6cm，取出，揮干溶劑。將薄層板均勻噴以I %三氯化鋁試液，放入105°C的烘箱中加熱3分鐘，置于紫外光燈(366nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色斑點，即為鐵皮石斛沒有斑點或有不同顏色斑點或不同時具備三種斑點的即為鐵皮石斛偽品。
[0043]以上實施例中，各種試劑均為分析純，夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷純度均彡 98%。
[0044]實施例6
[0045]不同展開劑考察，見圖2
[0046]1:鐵皮石斛，2:齒瓣石斛，3:紫皮楓斗
[0047]A:氯仿:甲醇冰:冰醋酸，
[0048]B:乙酸乙酯:甲醇:甲酸:水，
[0049]C:乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水(5:4:1.2:0.5)，
[0050]D:乙酸乙酯:丁酮:甲酸:7jC (5:3:1:1),
[0051]E:乙酸乙酯:丁酮:甲酸:7jC (6:5:1:1)，
[0052]F:乙酸乙酯:丁酮:甲酸:7jC (4:3:1:1),
[0053]實施例7
[0054]不同薄層板考察，見圖3
[0055]A1-A4:不同產(chǎn)地鐵皮石斛，
[0056]1:高效硅膠預制薄層板F254 (德國Merck)，
[0057]2:國產(chǎn)高效硅膠預制薄層板F254(煙臺市芝罘黃務硅膠開發(fā)試驗廠)，
[0058]3:高效硅膠預制薄層板(德國MN)，
[0059]4:國產(chǎn)高效硅膠預制薄層板(煙臺市化學工業(yè)研究所)，
[0060]5:娃膠預制薄層板F254 (德國Merck),
[0061]6:娃膠預制薄層板(德國MN),
[0062]7:硅膠預制薄層板F254 (德國MN)，
[0063]8:硅膠預制薄層板F254(煙臺市化學工業(yè)研究所)
[0064]實施例8
[0065]不同溫度考察，見圖4
[0066]A1-A4:不同產(chǎn)地鐵皮石斛
[0067]I:35°C 2:4°C
[0068]實施例9
[0069]不同濕度考察，見圖5
[0070]實施例10
[0071]不同點樣量考察,見圖6
[0072]I:1 μ 1,2:3 μ 1,3:5 μ 1,4:7 μ 1,5:9 μ 1,6:11 μ I
[0073]實施例11
[0074]不同產(chǎn)地鐵皮石斛薄層色譜圖，見圖7
[0075]R:對照品(自下而上:夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷)，
[0076]1:對照藥材，2:云南芒市(引種浙江)，3:云南芒市(引種浙江)，4:云南芒市(英茂)，5:云南芒市(引種四川)，6:福建連城，7:福建連城，8:福建連城，9:浙江，10:云南臨滄，11:浙江，12:云南紅河綠春縣，13:云南紅河綠春縣，14:云南西雙版納，15:云南西雙版納
[0077]實施例12
[0078]不同產(chǎn)地鐵皮石斛和紫皮石斛薄層色譜圖，見圖8
[0079]Rl:夏佛塔苷，R2:佛來心苷，R3:異佛來心苷
[0080]1:鐵皮石斛對照藥材，2-9:鐵皮石斛，10-17:紫皮石斛
[0081]實施例13
[0082]8種不同石斛的薄層色譜圖，見圖9
[0083]R:對照品(自下而上:夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷)
[0084]1-2:鐵皮石斛(Dendrobium off icinale),對照藥材 3-4:紫皮石斛(Dendrobiumdevonianum), 5-6:串珠石斛(Dendrobium faiconeri), 7-8:金欽石斛(Dendrobiumnobile) ,9-10:鼓植石斛(Dendrobium chrysotoxum), 11-12:疊鞘石斛(Dendrobiumaurantiacum),13-14:束花石斛(Dendrobium chrysanthum),15-16: 5? 唇石斛(Dendrobium aphyllum)。
【主權(quán)項】
1.一種鐵皮石斛的薄層鑒別方法，其特征在于: 以夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷為對照品，采用薄層色譜法進行定性鑒別，包括以下步驟: a、供試品溶液和對照藥材溶液的制備:取本品粉末lg，加甲醇45?55ml，超聲處理25?35分，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15?20ml使溶解，用乙酸乙酯洗滌2次，每次25?35ml，棄去洗液，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20?25ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取對照藥材lg，制成對照藥材溶液。 b、對照品溶液制備:取夏佛塔苷(Schaftoside)、佛來心苷(v1lanthin)、異佛來心苷(isov1lanthin)對照品，分別加甲醇制成每Iml含有0.1mg的溶液,作為對照品溶液。 C、薄層色譜法鑒別:取上述供試品溶液3-7 μ 1、對照品溶液I μ 1，分別點于同一高效娃膠G薄層板(HSGF254)上,使成條狀，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5?4:4?3:0.8?1.2:0.8?1.2)為展開劑，展開，取出，烘干，噴以三氯化鋁試液，在105°C烘2?3分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。 其中步驟a與b沒有先后順序。
2.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛藥材的鑒別方法，其特征在于:所述對照品夏佛塔苷、佛來心苷、異佛來心苷可以一起使用，或兩兩組合使用，或佛來心苷、異佛來心苷分別單獨使用，或上述分別加上鐵皮石斛對照藥材為參照用于鐵皮石斛與其他石斛屬藥材的鑒別。
3.如權(quán)利要求書I所述的一種鐵皮石斛藥材的鑒別方法，其特征在于:所述展開劑乙酸乙酯、丁酮、甲酸、水的體積比為:5?4:4?3:0.8?1.2:0.8?1.2。
4.如權(quán)利要求書I所述的一種鐵皮石斛藥材的鑒別方法，其特征在于:所述三氯化鋁試液的濃度為1%?5%。
5.如權(quán)利要求書I所述的一種鐵皮石斛藥材的鑒別方法，其特征在于:所述薄層板的加熱溫度為102?108°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛的薄層鑒別方法，屬于中藥技術領域。本發(fā)明對鐵皮石斛及其藥材薄層鑒別方法進行了提高、完善，與現(xiàn)有方法相比，增加了專屬性的指標性成分。鑒別方法是以夏佛塔苷(schaftoside)、佛來心苷(violanthin)、異佛來心苷(isoviolanthin)、鐵皮石斛對照藥材為對照，采用薄層色譜法進行定性鑒別，專屬性強、操作簡單、重現(xiàn)性好、成本低廉，能夠定性鑒別鐵皮石斛及其藥材。
【IPC分類】G01N30-90
【公開號】CN104713979
【申請?zhí)枴緾N201410489539
【發(fā)明人】徐紅, 葉子, 王崢濤, 何偉
【申請人】上海中醫(yī)藥大學
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2014年9月23日