物質(zhì)測定傳感器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種物質(zhì)測定傳感器，更詳細來說，本發(fā)明涉及一種利用免疫反應(yīng)來 對測定對象物質(zhì)進行定量時所用的物質(zhì)測定傳感器。
【背景技術(shù)】
[0002] 以前，作為環(huán)境中的微量物質(zhì)等的檢測方法或定量方法，已提出了利用免疫反應(yīng) 的免疫學(xué)測定法（免疫測定（immunoassay))。作為該免疫測定的通常的測定方法，例如 已知酶聯(lián)免疫吸附測定法（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)或免疫色譜法 (immunochromatography)等。
[0003] 這些方法需要進行利用熒光物質(zhì)等對生物物質(zhì)進行標識的操作，因此正在研宄能 更簡易地制造的物質(zhì)測定傳感器。例如已提出了如下的生物傳感器，該生物傳感器含有：與 測定對象物質(zhì)特異地反應(yīng)的分子識別成分、因測定對象物質(zhì)與分子識別成分的反應(yīng)而體積 變化的刺激響應(yīng)性高分子、及因刺激響應(yīng)性高分子的體積變化而局部表面等離子體共振的 強度變化的平均粒徑為〇. 2nm~200nm的金屬粒子，并且金屬粒子及分子識別成分是固定 在刺激響應(yīng)性高分子上（例如參照專利文獻1)。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0005] 專利文獻
[0006] 專利文獻1 :日本專利特開2010-197046號公報

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] [發(fā)明所欲解決的問題]
[0008] 在利用免疫反應(yīng)的對象物質(zhì)的定量測定中，從實用化的方面來看，期望檢測感度 充分、操作容易的新穎的物質(zhì)測定傳感器。
[0009] 因此，本發(fā)明的目的在于提供一種新穎的物質(zhì)測定傳感器，其為使用熱響應(yīng)性高 分子的物質(zhì)測定傳感器，并且能以更高的感度來進行對象物質(zhì)的定量測定。
[0010] [解決問題的技術(shù)手段]
[0011] 為了解決所述問題，本發(fā)明人進行了努力研宄，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過由金屬粒子、熱響 應(yīng)性高分子、顯示出正或負的動電位的帶電物質(zhì)、及與測定對象物質(zhì)特異地反應(yīng)的標識粒 子來構(gòu)成復(fù)合體，可制成高感度的傳感器。
[0012] 即，本發(fā)明是通過下述（1)~（11)來達成。
[0013] (1) 一種物質(zhì)測定傳感器，含有：與測定對象物質(zhì)特異地反應(yīng)的標識粒子、熱響應(yīng) 性高分子、在溶液中顯示出正或負的動電位的帶電物質(zhì)、及金屬粒子，并且
[0014] 所述金屬粒子是由所述標識粒子與所述帶電物質(zhì)與所述熱響應(yīng)性高分子的共聚 物所被覆。
[0015] (2)根據(jù)所述（1)所記載的物質(zhì)測定傳感器，其中所述金屬粒子的平均粒徑為 10nm~50nm〇
[0016] (3)根據(jù)所述⑴或⑵所記載的物質(zhì)測定傳感器，其中所述金屬粒子為金（Au)、 銀（Ag)、鉑（Pt)及鈀（Pd)中的任一種。
[0017] (4)根據(jù)所述⑴至（3)中任一項所記載的物質(zhì)測定傳感器，其中所述熱響應(yīng)性高 分子為聚（N-異丙基丙烯酰胺）及聚（乙烯基甲基醚）中的至少一種。
[0018] (5)根據(jù)所述（1)至（3)中任一項所記載的物質(zhì)測定傳感器，其中所述標識粒 子為抗體、抗原、肽、單鏈脫氧核糖核酸Oeoxyribonucleicacid，DNA)、單鏈核糖核酸 (Ribonucleicacid，RNA)及這些物質(zhì)的衍生物中的任一種。
[0019] (6)根據(jù)所述⑴至（5)中任一項所記載的物質(zhì)測定傳感器，其中所述帶電物質(zhì)在 溶液中顯示出正的動電位。
[0020] (7)根據(jù)所述（6)所記載的物質(zhì)測定傳感器，其中所述熱響應(yīng)性高分子具有氨基， 所述帶電物質(zhì)為胺系化合物。
[0021] (8)根據(jù)所述⑴至（7)中任一項所記載的物質(zhì)測定傳感器，含有0. 1質(zhì)量％~ 0. 4質(zhì)量％的所述標識粒子。
[0022] (9) 一種物質(zhì)測定傳感器的制造方法，制造根據(jù)所述⑴至⑶中任一項所記載的 物質(zhì)測定傳感器，并且
[0023] 在含有用來形成熱響應(yīng)性高分子的單體的溶液中，添加與測定對象物質(zhì)特異地反 應(yīng)的標識粒子、及在溶液中顯示出正或負的動電位的帶電物質(zhì)，進行聚合而形成三元共聚 物，
[0024] 在含有所得的三元共聚物的溶液中添加含有金屬粒子的溶液后，進行加熱冷卻， 由所述三元共聚物來被覆所述金屬粒子。
[0025] (10) -種物質(zhì)測定傳感器的制造方法，制造根據(jù)所述（1)至（8)中任一項所記載 的物質(zhì)測定傳感器，并且
[0026] 在含有用來形成熱響應(yīng)性高分子的單體的溶液中，添加在溶液中顯示出正或負的 動電位的帶電物質(zhì)，進行聚合而形成共聚物，
[0027] 在所得的共聚物中添加金屬粒子，由所述共聚物來被覆所述金屬粒子，
[0028] 在被覆所述金屬粒子的共聚物中添加與測定對象物質(zhì)進行特異反應(yīng)的標識粒子 而進行復(fù)合化。
[0029] (11) 一種測定對象物質(zhì)的測定方法，在根據(jù)所述⑴至⑶中任一項所記載的物 質(zhì)測定傳感器中，在所述物質(zhì)測定傳感器的帶電物質(zhì)顯示出正的動電位的情況下，添加在 溶液中顯示出負的動電位并且與含有測定對象物質(zhì)特異地反應(yīng)的標識粒子的復(fù)合化化合 物，或者，在所述物質(zhì)測定傳感器的帶電物質(zhì)顯示出負的動電位的情況下，添加在溶液中顯 示出正的動電位并且含有與測定對象物質(zhì)特異地反應(yīng)的標識粒子的復(fù)合化化合物，
[0030] 在所述物質(zhì)測定傳感器的熱響應(yīng)性高分子為在下限臨界溶液溫度以上不溶解而 引起相分離的熱響應(yīng)性高分子的情況下，對所述物質(zhì)測定傳感器的熱響應(yīng)性高分子的相轉(zhuǎn) 變溫度以上的溫度下的透射率進行測定，或者，在所述物質(zhì)測定傳感器的熱響應(yīng)性高分子 為在上限臨界溶液溫度以下不溶解而引起相分離的熱響應(yīng)性高分子的情況下，對所述物質(zhì) 測定傳感器的熱響應(yīng)性高分子的相轉(zhuǎn)變溫度以下的溫度下的透射率進行測定。
[0031] [發(fā)明的效果]
[0032] 根據(jù)本發(fā)明，能以高感度對促甲狀腺素（ThyroidStimulatingHormone，TSH)、凝 血酶（thrombin)、外源凝集素（lectin)、伴刀豆球蛋白A(concanavalinA)、血小板源生長 因子（Platelet-DerivedGrowthFactor，roGF)等測定對象物質(zhì)簡單地進行計量。因此， 特別可以有效地用于利用免疫反應(yīng)的測定對象物質(zhì)的檢測。
【附圖說明】
[0033] 圖1的（a)為對本發(fā)明的物質(zhì)測定傳感器與測定對象物質(zhì)結(jié)合的狀態(tài)加以說明的 圖，圖1的（b)為對不存在測定對象物質(zhì)的情形的物質(zhì)測定傳感器的結(jié)合狀態(tài)進行說明的 圖。
[0034] 圖2的（a)為表示物質(zhì)測定傳感器1的抗生物素蛋白（avidin)濃度變化時的溫 度與透射率的關(guān)系的圖表，圖2的（b)為表示物質(zhì)測定傳感器2的抗生物素蛋白濃度變化 時的溫度與透射率的關(guān)系的圖表。
[0035] 圖3的（a)為表示物質(zhì)測定傳感器3的抗生物素蛋白濃度變化時的溫度與透射率 的關(guān)系的圖表，圖3的（b)為表示物質(zhì)測定傳感器4的抗生物素蛋白濃度變化時的溫度與 透射率的關(guān)系的圖表，圖3的（c)為表示物質(zhì)測定傳感器5的抗生物素蛋白濃度變化時的 溫度與透射率的關(guān)系的圖表。
[0036] 圖4的（a)為表示物質(zhì)測定傳感器6的抗生物素蛋白濃度變化時的溫度與透射率 的關(guān)系的圖表，圖4的（b)為表示物質(zhì)測定傳感器7的抗生物素蛋白濃度變化時的溫度與 透射率的關(guān)系的圖表，圖4的（c)為表示物質(zhì)測定傳感器8的抗生物素蛋白濃度變化時的 溫度與透射率的關(guān)系的圖表。