一種白塞氏病檢測的生物標(biāo)志物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種白塞氏病檢測的生物標(biāo)志物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 白塞氏病（Behcet，s disease，BD)又稱貝赫切特綜合征（Behcet syndrome，BS)， 是一種病因不明、高發(fā)病率、復(fù)發(fā)性、大小血管炎并存的常見系統(tǒng)性自身免疫性疾病。1937 年Hulusi Behcet首次描述了口腔和生殖器潰瘍、前房積膿和葡萄膜炎復(fù)雜三聯(lián)癥狀的三 名患者。隨后的研宄表明該病是一種多系統(tǒng)受累，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變的系統(tǒng)性自身免疫病。 患者常常存在反復(fù)的口腔和生殖器潰瘍、關(guān)節(jié)炎、葡萄膜炎、皮膚病變、血栓性靜脈炎、以及 胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累。BD可見于全世界，而主要好發(fā)于位于北煒30度到45度之間 的中東和地中海國家，而少見與美洲大陸，大洋洲和非洲撒哈拉以南地區(qū)，因其分布與古老 的"絲綢之路"一致，故又稱為"絲綢之路疾病"，該疾病分布明顯的地域性表明該病與特定 的易感基因相關(guān)。
[0003] 白塞病好發(fā)年齡為16-50歲，以口腔潰瘍、生殖器潰瘍、眼炎，進(jìn)而引起感染、失 明、動脈瘤等嚴(yán)重后果主要特征。各國學(xué)者經(jīng)過多年的深入研宄，BD領(lǐng)域的研宄取得了許 多重要的成果，既往認(rèn)為BD是一種少見的自身免疫性疾病，近年來隨著自身免疫性疾病知 識普及、臨床醫(yī)生認(rèn)識能力的提高以及環(huán)境因素的惡化，診斷為BD的患者不斷增加。白塞 病的發(fā)病是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。調(diào)查研宄結(jié)果顯示BD在西方國家的發(fā) 病率遠(yuǎn)低于亞洲國家，如美國BD的發(fā)病率為8. 6/百萬、英國為0. 64/百萬、西班牙為6. 4/ 百萬、德國為4. 2/百萬、法國為7. 2/百萬。而在土耳其BD的發(fā)病率為20-421/百萬、伊朗 為80/百萬、以色列為120/百萬。遺傳因素中，HLA B51被認(rèn)為是與BD關(guān)系最為密切，而 且MHC I連鎖相關(guān)基因A (MIC-A)與HLA-B51存在顯著的連鎖不平衡。最新的研宄資料表 明BD患者HLA-B51/B5與臨床表現(xiàn)密切相關(guān)。研宄表明，我國白塞病患者有自身的遺傳特 點(diǎn)，BD在我國的發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)，為美洲地區(qū)發(fā)病率的14倍。BD的發(fā)病機(jī)制至今 仍沒有完全闡明。雖然該病具有遺傳易感性，但環(huán)境因素和免疫異常在發(fā)病中也起到關(guān)鍵 作用。在環(huán)境因素中，各種病原體感染等通過分子模擬機(jī)制使機(jī)體免疫耐受瓦解，導(dǎo)致抗原 特異性T細(xì)胞活化產(chǎn)生異常免疫反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體損傷，白塞病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)升高的Thl相關(guān) 細(xì)胞因子，如IFN-γ，IL-12以及腫瘤壞死因子（TNF)-a。
[0004] 白塞病最常見的臨床表現(xiàn)為反復(fù)的口腔潰瘍占，該臨床癥狀可出現(xiàn)在98 %的BD 患者，而且列入白塞病的診斷指南中。反復(fù)口腔潰瘍往往比其他臨床表現(xiàn)早出現(xiàn)，但是該癥 狀也可出現(xiàn)在其他疾病患者，而并非白塞病的特異性臨床癥狀。生殖器潰瘍也是BD的常見 癥狀，通常發(fā)生在男性陰囊，而龜頭上罕見。而且白塞病患者與Reiter綜合癥和性病患者 不同，BD患者并不伴隨尿道炎或排尿困難。對于女性患者，潰瘍往往同時發(fā)生在大小陰唇。 眼睛受累也是白塞病常見的臨床表現(xiàn)，發(fā)生率高達(dá)30% -70%，而且往往影響患者視力， 25%的患者甚至導(dǎo)致失明的嚴(yán)重后果。皮損在BD患者的發(fā)生率達(dá)到38-99%，神經(jīng)系統(tǒng)受 累為5-10%，受累患者往往死亡率較高。白塞病患者的血管受損常同時累計(jì)動靜脈，而且靜 脈受損更為常見。白塞病患者胃腸道受累發(fā)生率為3-26 %，包括厭食，嘔吐，消化不良，腹 瀉，腹痛。針刺反應(yīng)是臨床用于診斷BD病患者的一個常用試驗(yàn)，其實(shí)質(zhì)為皮膚非特異性過 敏反應(yīng)，即針刺后12-48h開始出現(xiàn)米粒大小的紅色斑丘瘆，繼而發(fā)展為水皰、膿皰和結(jié)痂， 約1-2周消退。針刺反應(yīng)在白塞病中的陽性率57. 9%-70%，高于正常人群，在男性明顯 高于女性。與病情活動有一定相關(guān)性，病情重時陽性率高，程度重。
[0005] 由于白塞病缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，各國學(xué)者近年來對白塞病血清標(biāo)志物的研宄 不斷深入。抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體是白塞病患者常見的自身抗體，其在BD患者的陽性率13 %，但 該抗體也可出現(xiàn)其他多種血管受損的自身免疫性疾病患者，在正常人其陽性率也可達(dá)5%。 抗內(nèi)皮細(xì)胞抗原陽性常與BD患者的肺動脈高壓存在一定聯(lián)系。隨著研宄的深入，研宄者不 斷在BD患者中鑒定出針對內(nèi)皮細(xì)胞上多種祀抗原的相關(guān)自身抗體。Lee等采用雙向凝膠 電泳和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對BD患者血清進(jìn)行研宄，在AECA陽性BD患者中鑒定出靶抗原為α 烯醇化酶。抗α烯醇化酶抗體在BD患者的陽性率為45%，在韋格納肉芽腫（Wegener's 8四皿1〇1^如8丨8，16)等其他免疫病患者也存在較高陽性率，16(100%)，狀（16.7%)。〇1〇 等對BD患者研宄，發(fā)現(xiàn)抗核不均一核蛋白A2/B1抗體（hnRNP-A2/Bl)，IgA型抗核不均一核 蛋白A2/B1抗體在BD患者的陽性率為83. 3 %，在SLE患者的陽性率為13. 3 %，在RA患者 的陽性率為26. 7%，TA患者的陽性率為30%，正常人中的陽性率為20%。因此，抗核不均 一核蛋白A2/B1抗體對BD的診斷價值有限，臨床意義不大。2007年，F(xiàn)ederica等在BD患 者中發(fā)現(xiàn)抗Sip-I抗體，其在BD患者中的陽性率，IgG型為20%，IgM型為41%，IgA型為 17%。該抗體在31^、55(：、180、葡萄膜炎患者中少見，但是在原發(fā)性血管炎患者181型陽性 率高達(dá)45%。抗Sip-I抗體是內(nèi)皮細(xì)胞活化和炎癥反應(yīng)的標(biāo)志，其在BD患者中的診斷價值 有限。Paola采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNA文庫技術(shù)在內(nèi)皮細(xì)胞抗體陽性BD患者血清中鑒 定出RLIP-76為BD患者靶抗原，其IgG型自身抗體的陽性率為30%，該抗體在在SS中的 陽性率為17%，在SLE中的陽性率為25%，該抗體的出現(xiàn)與內(nèi)皮細(xì)胞損傷有關(guān)。Yiping等 采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞裂解物進(jìn)行雙向凝膠電泳和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在BD患者中發(fā)現(xiàn)抑制素 (prohibitin)為BD的靶抗原。ELISA結(jié)果顯示抗抑制素抗體在BD患者的陽性率為28%， 在SLE患者的陽性率6 %。Peng采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞裂解物進(jìn)行雙向凝膠電泳和質(zhì)譜聯(lián) 用技術(shù)在BD患者中鑒定出BD靶抗原熱休克蛋白27 (HSP27)，抗原熱休克蛋白27抗體在BD 患者陽性率57%，SLE患者陽性率24%，RA患者陽性率72%，SS患者陽性率36%，其臨床 診斷價值較低。該研宄團(tuán)隊(duì)采用相似的研宄技術(shù)在BD患者中還發(fā)現(xiàn)了抗膜聯(lián)蛋白A2抗體， 在BD患者其陽性率為34%，在SLE患者為7%，SS患者為8%。由此可見，內(nèi)皮細(xì)胞抗體及 其相關(guān)靶抗原對應(yīng)的自身抗體并非BD患者特異性自身抗體，這類抗體的出現(xiàn)與患者的血 管損傷相關(guān)，可出現(xiàn)于各種血管受損的自身免疫病患者，如RA、SLE、SS、SSc等。
[0006] 除了內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)自身抗體外，各國研宄者采用各種不同的研宄技術(shù)在BD患者 中還發(fā)現(xiàn)了許多針對其他靶抗原的自身抗體。Okunuki等學(xué)者采用經(jīng)典的雙向凝聚電泳技 術(shù)對BD并發(fā)葡萄膜炎患者血清進(jìn)行血清標(biāo)志物研宄，經(jīng)質(zhì)譜鑒定后，在BD患者發(fā)現(xiàn)3種 BD相關(guān)自身抗體：抗α -烯醇酶S-抗原抗體，抗硒相關(guān)蛋白（SBP)抗體，其中抗SBP抗體 為新發(fā)現(xiàn)的血清標(biāo)志物，是一個視網(wǎng)膜自身抗原，其在BD患者的陽性率為16%。Yu Lu等 學(xué)者利用cDNA文庫篩選BD相關(guān)自身抗體，研宄發(fā)現(xiàn)抗kinectin抗體在BD患者的陽性率 高達(dá)23%。但隨后的研宄發(fā)現(xiàn)該抗體在其他自身免疫病pSS、SLE、MCTD、和RA患者中的陽 性率達(dá)到12. 5%到25%，除此之外，該抗體在腫瘤患者如肝細(xì)胞癌患者中存在較高的陽性 率。2014年，Morishima采用包含9000個人類基因編碼蛋白的蛋白芯片技術(shù)對BD患者血 清進(jìn)行篩查研宄，研宄結(jié)果顯示BD患者中存在抗緊密連接蛋白-1抗體，由于該研宄涉及的 研宄標(biāo)本量不足，尚不能明確該抗體在BD患者的陽性率及臨床應(yīng)用價值。
[0007] 血管損傷是BD患者重要的臨床表現(xiàn)，研宄發(fā)現(xiàn)在BD患者存在抗氧化修飾低密度 脂蛋白抗體。因此該抗體的的出現(xiàn)與血管內(nèi)皮細(xì)胞受損和功能障礙密切相關(guān)，參與了在BD 患者發(fā)生動脈粥樣硬化的病理過程，在BD患者血管受損過程中起到一定作用。雖然血管受 損是BD患者常見的臨床表現(xiàn)，但并非其特異性臨床表現(xiàn)，因此，抗氧化修飾低密度脂蛋白 抗體也廣泛出現(xiàn)于其他血管受損的SLE、SV患者，該抗體的出現(xiàn)僅是與特定臨床表現(xiàn)相關(guān)， 而并非BD的特異性自身抗體。Bassyouni采用ELISA法在BD患者中檢測抗Clq抗體，其陽 性率為18%，而且在血管損傷的BD患者其陽性率高達(dá)42%，遠(yuǎn)高于無血管損傷的BD患者。 血栓形成是BD患者常見的臨床癥狀，但Asian的研宄結(jié)果表明抗膜聯(lián)蛋白V抗體在BD并 發(fā)血栓形成組和單純BD患者組間并無顯著性差異，由此表明抗抗膜聯(lián)蛋白V抗體在BD患 者血栓形成中意義較小。
[0008] 除了研宄用于BD臨床診斷相關(guān)的自身抗體，還有學(xué)者對BD治療相關(guān)的自身抗體 進(jìn)行研宄。IFN-α 2a是治療BD患者的常用藥物，但是在使用該藥物治療的過程中約26. 6% 的患者會