019] 二、附子鑒別方法及方法學(xué)驗證 1、固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈：0. 092%磷酸溶液（21 :79)為流動相，其中0. 092%磷酸溶液中含有0. 04%的三乙胺和 0. 02%的二正丁胺；檢測波長為232nm。理論板數(shù)按苯甲酰新烏頭原堿峰計算應(yīng)不低于 6000 〇
[0020] 對照品溶液的制備：取苯甲酰新烏頭原堿對照品、苯甲酰烏頭原堿對照品、苯甲酰 次烏頭原堿對照品適量，精密稱定，加乙腈制成每1ml分別含50 μ g、10 μ g、10 μ g的混合溶 液，作為對照品貯備液。精密量取對照品儲備液5ml，置25ml量瓶中，加0. 1%磷酸溶液稀釋 至刻度，搖勻，即得。
[0021] 固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗：精密量取對照品貯備液5ml，室溫減壓回收至干，精 密加入0. lmol/L鹽酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱（以混合型陽離子交 換反相吸附劑為填充劑，150mg，容量為6ml，預(yù)先依次用乙腈、水各6ml洗脫）上，依次以水 3ml、氨溶液（5- 100)、水、甲醇、乙腈各5ml洗脫，待洗脫液流盡后，放置5分鐘，繼用乙腈： 濃氨試液（90 :10)的混合溶液IOml洗脫，收集洗脫液，于40°C以下減壓回收溶劑至干，殘渣 精密加入乙腈：〇. 1%的磷酸溶液（20 :80)的混合溶液5ml使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為固相 萃取柱系統(tǒng)適用性試驗溶液。
[0022] 分別精密吸取上述系統(tǒng)適用性試驗溶液與對照品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀， 測定。
[0023] 表1固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果
【主權(quán)項】
1. 一種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：用高效液相色譜法鑒別附子，其色譜柱 以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的一種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：系統(tǒng)適用性試驗，流動 相以乙腈：〇. 05%-0. 2%的磷酸溶液比例為18 :82至25 :75,其中磷酸溶液含有0. 02%-0. 06% 三乙胺和0. 〇1%-〇. 03%二正丁胺，檢測波長為222-242nm，理論板數(shù)按苯甲酰新烏頭原堿峰 計算應(yīng)不低于6000 ; 對照品溶液的制備：取苯甲酰新烏頭原堿對照品、苯甲酰烏頭原堿對照品、苯甲酰次烏 頭原堿對照品適量，精密稱定，加乙腈制成每Iml分別含20-70yg、5-20yg、5-20yg的混 合溶液，作為對照品貯備液，精密量取對照品儲備液用〇. 〇5%-〇. 2%磷酸溶液稀釋2-10倍， 搖勻作為對照品溶液； 固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗：精密量取對照品貯備液5ml，室溫減壓回收至干，精密加 入0.lmol/L鹽酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱上，以混合型陽離子交換反 相吸附劑為填充劑，150_200mg，容量為4-10ml，預(yù)先依次用乙腈、水各6ml洗脫，依次以水 3ml、1. 25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脫，待洗脫液流盡后，放置5分鐘，繼用乙腈-濃 氨試液=90 :10的混合溶液IOml洗脫，收集洗脫液，于40°C以下減壓回收溶劑至干，殘渣精 密加入乙腈-0. 1%的磷酸溶液=20 :80的混合溶液5ml使溶解，濾過，取續(xù)濾液作為固相萃 取柱系統(tǒng)適用性試驗溶液； 分別精密吸取上述系統(tǒng)適用性試驗溶液與對照品溶液各10-30yl，注入液相色譜 儀，測定，計算系統(tǒng)適用性試驗溶液與對照品溶液中各相應(yīng)成分峰面積的比值，不得小于 0. 95 ； 供試品溶液的制備：取檢品，稱取〇. 2-2g，置具塞錐形瓶中，精密加入0.lmol/L鹽酸溶 液25ml，密塞，稱定重量，超聲處理10-50分鐘并時時振搖，放冷，再稱定重量，用0.lmol/L 鹽酸溶液補足減失的重量，搖勻，以每分鐘2000-6000轉(zhuǎn)離心10-40分鐘，濾過，精密量取續(xù) 濾液l〇ml，照固相萃取柱系統(tǒng)適用性試驗項下的方法，自"加在固相萃取柱上"起，依法操 作，制備供試品溶液； 鑒別：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10-30yl，注入液相色譜儀測定，供試品 色譜中呈現(xiàn)與苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿對照品色譜峰保留 時間相對應(yīng)的色譜峰，即確定制劑中含有附子，否則制劑中不含附子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的一種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：理論板數(shù)按苯甲酰新 烏頭原堿峰計算應(yīng)不低于6000。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2的一種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：制備供試品溶液時取 樣量是0. 5-lg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2的一種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：所用固相萃取柱填料 為混合型陽離子交換反相吸附劑，規(guī)格為100_200mg，容積為5-10ml，并預(yù)先依次用乙腈、 水各6ml洗脫處理。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2的一種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：供試品溶液的制備過 程中，固相萃取柱的洗脫過程依次為水3ml，1. 25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml，待洗脫液 流盡后，放置5分鐘，再用乙腈：濃氨試液=90 :10的混合溶液IOml洗脫，收集洗脫液。
7. -種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：用薄層色譜法鑒別麻黃：取檢品，稱取 0. 5-5g，加濃氨試液3-10滴，再加三氯甲烷10ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加 甲醇2ml充分振搖，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每 Iml含0. 5-2mg的溶液，作為對照品溶液；吸取上述兩種溶液各5-20W，分別點于同一硅膠 G薄層板上，以三氯甲烷：甲醇：濃氨試液=20 :5 :0. 5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三 酮試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同的紅色斑點，即確定是含有麻黃的制劑。
8.-種麻附甘藥物的鑒別方法，其特征在于：用薄層色譜法鑒別甘草：取檢品，稱取 0. 5-3g，加乙醚40ml，加熱回流1小時，濾過，棄去醚液，藥渣加甲醇30ml，加熱回流1小時， 濾過，濾液蒸干，殘渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水 洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草對 照藥材0. 5-1. 5g，同法制成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各3-10y1，分別點于同一用 1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正丁醇：濃氨試液：乙醇=5 :2 :1為展開劑，展 開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，置365nm紫外光燈下 檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，即確定是 含有甘草的制劑。
【專利摘要】本發(fā)明的一種麻附甘藥物制劑的鑒別方法，用高效液相色譜法鑒別附子，其色譜柱為以極性乙醚連接苯基鍵合硅膠為填充劑；用薄層色譜法鑒別麻黃；用薄層色譜法鑒別甘草；本發(fā)明能簡便準確，專屬性強，耐用性好的鑒別麻附甘藥物的真?zhèn)巍?br>【IPC分類】G01N30-90, G01N30-50, G01N30-88
【公開號】CN104792911
【申請?zhí)枴緾N201510241362
【發(fā)明人】劉金磊, 石紅艷, 李詩標, 張為勝, 劉圣梅
【申請人】濟南康眾醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年5月13日