乳品中短鏈脂肪酸的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及乳品的質(zhì)量控制，特別涉及一種乳品中短鏈脂肪酸的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳品中含有蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖、礦物質(zhì)、維生素，營(yíng)養(yǎng)豐富、易被人體消化吸收，在 人類(lèi)的膳食結(jié)構(gòu)中占有十分重要的地位。為了向大眾提供安全、優(yōu)質(zhì)的乳品，需要對(duì)其進(jìn)行 嚴(yán)格的質(zhì)量控制。目前，乳品的質(zhì)量控制主要包括衛(wèi)生檢測(cè)和營(yíng)養(yǎng)檢測(cè)。其中，衛(wèi)生檢測(cè)包 括致病性微生物、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、重金屬以及其他危害人體健康物質(zhì)的限量；營(yíng)養(yǎng)檢 測(cè)包括蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素、礦物質(zhì)含量。
[0003] 乳品中還含有短鏈脂肪酸。短鏈脂肪酸不僅能夠降低結(jié)腸內(nèi)pH值，抑制致病菌的 繁殖，營(yíng)養(yǎng)結(jié)腸上皮細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝，維持益生菌代謝，保持腸道菌群穩(wěn)態(tài)；還能 抑制促炎因子產(chǎn)生，減少炎癥反應(yīng)，降低腸道病變，抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增值、分化和轉(zhuǎn)移，促 進(jìn)癌細(xì)胞凋亡及控制原癌基因表達(dá)。并且，短鏈脂肪酸還為嬰幼兒提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)嬰幼兒生 長(zhǎng)發(fā)育；刺激嬰幼兒腸道益生菌的生長(zhǎng)、減少有害菌的定植；刺激嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育，增 強(qiáng)免疫系統(tǒng)識(shí)別和抗感染能力。
[0004] 可見(jiàn)，短鏈脂肪酸不但對(duì)維系人體健康十分重要，而且對(duì)于促進(jìn)嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育 尤為重要。因此，需要建立一種測(cè)定乳品中短鏈脂肪酸的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種乳品中短鏈脂肪酸的檢測(cè)方法。技術(shù) 方案如下：
[0006] 乳品中短鏈脂肪酸的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0007] (1)對(duì)照品溶液及標(biāo)樣儲(chǔ)備液的制備
[0008] 分別稱(chēng)取8種短鏈脂肪酸對(duì)照品，所述8種短鏈脂肪酸分別為：甲酸、乙酸、丙酸、 異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸和己酸，將所述8種短鏈脂肪酸分別加入無(wú)水乙醇溶解定容，即 得具有已知濃度的各種短鏈脂肪酸對(duì)照品溶液；
[0009] 稱(chēng)取2-乙基丁酸，加入無(wú)水乙醇溶解定容，即得具有已知濃度的標(biāo)樣2-乙基丁酸 儲(chǔ)備液；
[0010] ⑵乳品溶液的制備
[0011] 當(dāng)乳品為液體樣品時(shí)，吸取體積V1的乳品，加入體積V 2的沉淀劑，提取，離心，取上 清液，過(guò)濾，即得液體樣品的乳品溶液；
[0012] 當(dāng)乳品為固體樣品時(shí)，稱(chēng)取質(zhì)量M的乳品，加入體積％的沉淀劑，提取，離心，取上 清液，過(guò)濾，即得固體樣品的乳品溶液；
[0013] 所述沉淀劑為含HCl的乙醇溶液，并含有體積V4的標(biāo)樣2-乙基丁酸儲(chǔ)備液；
[0014] (3) GC-MS 檢測(cè)
[0015] 氣相條件包括：色譜柱：以硝基對(duì)苯二酸改性的聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱； 升溫程序：初始溫度50°C保持lmin，之后以10°C /min升至180°C，再以70°C /min升至 250°C保持3min ;進(jìn)樣口溫度：200~250°C ;載氣：高純氦；流速：0. 5~I. 5mL/min ;分流 比：1:1~50:1 ;進(jìn)樣體積：0. 5~8yL ;
[0016] 質(zhì)譜條件包括：EI電子轟擊離子源；離子源溫度：200~250°C ;接口溫度：200~ 250°C，溶劑延遲4min ;采用SM掃描方式；
[0017] 在所述檢測(cè)條件下，將體積％的各對(duì)照品溶液和乳品溶液分別注入GC-MS中，記 錄各對(duì)照品溶液和乳品溶液的色譜圖；獲得各對(duì)照品的保留時(shí)間及質(zhì)譜數(shù)據(jù)；
[0018] (4)根據(jù)對(duì)照品和乳品溶液的GC-MS檢測(cè)結(jié)果，確定乳品中所含有的短鏈脂肪酸 的種類(lèi)；
[0019] (5)計(jì)算短鏈脂肪酸的相對(duì)峰面積
[0020] 按照下列公式計(jì)算乳品溶液中短鏈脂肪酸的相對(duì)峰面積：
[0021] 短鏈脂肪酸的相對(duì)峰面積=相應(yīng)的短鏈脂肪酸峰面積/2-乙基丁酸峰面積。
[0022] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述氣相條件具體包括：色譜柱 DB-FFAP(30mX0. 25mmX0. 25μπι);升溫程序：初始溫度 50°C 保持 lmin，以 10°C /min 升 至180°C，再以70°C /min升至250°C保持3min ;進(jìn)樣口溫度：250°C ;載氣為高純氦；流速： 1.0 mL/min ;分流比為10:1 ;進(jìn)樣體積：5 μ L ;
[0023] 所述質(zhì)譜條件具體包括：EI電子轟擊離子源；離子源溫度：250°C ;接口溫度： 250°C ;溶劑延遲：4min ;采用SM掃描方式。
[0024] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述加入體積V2的沉淀劑為體積V i液體樣品的 1~5倍。
[0025] 在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施方式中，所述加入沉淀劑的體積V2為體積V ^液體樣品 的2~4倍。
[0026] 在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施方式中，所述加入沉淀劑的體積V2為體積V ^液體樣品 的3倍。
[0027] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述沉淀劑為含0. 5% HCl的乙醇溶液。
[0028] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述提取方法為超聲提取。
[0029] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述離心條件為14000rpm，8~12min。
[0030] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述過(guò)濾方法為采用0. 22 μ m濾膜過(guò)濾。
[0031] 本發(fā)明所構(gòu)建的乳品中短鏈脂肪酸的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)單靈敏、快速準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性強(qiáng)、 重復(fù)性好，可用于乳品中短鏈脂肪酸的質(zhì)量控制研宄。
[0032] 當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品或方法必不一定需要同時(shí)達(dá)到以上所述的所有優(yōu) 點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0033] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以 根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0034] 圖1為己酸的質(zhì)譜圖；
[0035] 圖2為MR-I樣品的GC-MS色譜圖；
[0036] 圖3為MR-2樣品的GC-MS色譜圖；
[0037] 圖4為MR-3樣品的GC-MS色譜圖；
[0038] 圖5為MR-4樣品的GC-MS色譜圖；
[0039] 圖6為MR-5樣品的GC-MS色譜圖；
[0040] 圖7為CNN-I樣品的GC-MS色譜圖；
[0041] 圖8為CNN-2樣品的GC-MS色譜圖；
[0042] 圖9為CNN-3樣品的GC-MS色譜圖；
[0043] 圖10為CNN-4樣品的GC-MS色譜圖；
[0044] 圖11為CNN-5樣品的GC-MS色譜圖；
[0045] 圖12為SNN-I樣品的GC-MS色譜圖；
[0046] 圖13為SNN-2樣品的GC-MS色譜圖；
[0047] 圖14為SNN-3樣品的GC-MS色譜圖；
[0048] 圖15為SNN-4樣品的GC-MS色譜圖；
[0049] 圖16為SNN-5樣品的GC-MS色譜圖；
[0050] 圖17為NF-I樣品的GC-MS色譜圖；
[0051] 圖18為NF-2樣品的GC-MS色譜圖；
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