一種基于納米金核酸適配體比色檢測氯霉素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)和分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及一種檢測樣品中氯霉素濃度 的方法，特別設(shè)及一種基于納米金核酸適配體比色檢測氯霉素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氯霉素是一種白色針狀的結(jié)晶粉末，在水溶液中比較穩(wěn)定難W分解，作為一種廣 譜抗菌素，它可W與核糖體結(jié)合，達(dá)到抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成的作用。因其效高價(jià)廉，在畜牧 業(yè)中得到廣泛的應(yīng)用。但是氯霉素具有較強(qiáng)的副作用和毒性，長期接觸容易導(dǎo)致再生障礙 性貧血和粒細(xì)胞缺乏癥，此外，長期微量攝入氯霉素，也可使大腸桿菌、沙口氏菌等產(chǎn)生耐 藥性，引起機(jī)體正常菌落的失調(diào)，是人們易感染各種疾病。氯霉素可在食用動物中殘留，可 通過食物鏈傳給人類，對人類的健康造成危害。世界上許多國家禁止此藥用于生產(chǎn)食品動 物，并規(guī)定了其在畜產(chǎn)品中最高殘留限量。發(fā)達(dá)國家對檢出限的要求越來越嚴(yán)格，其檢測限 問題已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。目前氯霉素的檢測方法分為微生物法、免疫分析方法、色譜 法和其他方法。
[0003] 核酸適配體是通過指數(shù)富集配體的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（SELE幻篩選而來的，選擇性 地綁定到各種具有高親和力的目標(biāo)物如小分子、蛋白質(zhì)和藥物等。與傳統(tǒng)的分子識別系統(tǒng) 相比，核酸適配體由于易合成而有很大的優(yōu)勢，而且其容易被標(biāo)記，可W長期穩(wěn)定存儲，具 有優(yōu)良的穩(wěn)定性，、廣泛的適用性W及高敏感特性。因此，它們的優(yōu)異屬性使其在醫(yī)學(xué)診 斷、環(huán)境監(jiān)測、生物分析方面的應(yīng)用有很大潛力。金納米粒子具有獨(dú)特的光學(xué)特性和較好的 生物相容性，已在共振散射光譜，紫外吸收光譜等分析中得到應(yīng)用，已有研究基于核酸適配 體修飾的納米金與共振瑞利散射光譜，實(shí)現(xiàn)了對祀分子、等的高靈敏度高選擇性的檢測?；?于氯金酸制備得到的納米金溶液呈現(xiàn)出酒紅色，少量的電解質(zhì)存在時(shí)能誘導(dǎo)金納米顆粒團(tuán) 聚，相對應(yīng)的溶液的顏色會從酒紅色逐漸變?yōu)樗{(lán)紫色。所W在金納米溶液中加入適量的陽 離子聚合物時(shí)會引起溶液吸光度的變化。
[0004] 基于氯霉素與其對應(yīng)核酸適配體的特異作用，陽離子聚合物性質(zhì)和金納米特性分 析可知：陽離子聚合物與核酸適配體能夠形成穩(wěn)定的復(fù)合物，不能引起金納米顆粒的聚集。 但在氯霉素存在下，核酸適配體優(yōu)先與氯霉素結(jié)合形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，從而不能結(jié)合陽離子聚 合物。溶液中多余的陽離子聚合物會引起金納米顆粒的聚集，導(dǎo)致體系的紫外吸收值發(fā)生 變化。因此，結(jié)合體系產(chǎn)生吸光信號的強(qiáng)度與氯霉素濃度的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)合W上原理 設(shè)計(jì)一種測定氯霉素的生物比色傳感新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種基于納米金核酸適配體比色檢測氯霉素的方法，用W實(shí) 現(xiàn)溶液中氯霉素的簡單、快速、高靈敏檢測。
[0006] 本發(fā)明通過W下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)；一種基于納米金核酸適配體比色檢測氯霉素的 方法，包括： (1) 將金納米顆粒、能夠?qū)β让顾靥禺愋宰R別的核酸適配體和陽離子聚合物混合，陽離 子聚合物和核酸適配體形成穩(wěn)定的復(fù)合物； (2) 將待測樣品和上述混合物混合，待測樣品中的氯霉素與核酸適配體形成穩(wěn)定的發(fā) 夾結(jié)構(gòu)，釋放出陽離子聚合物； (3) 金納米顆粒在陽離子聚合物的作用下團(tuán)聚成較大顆粒，導(dǎo)致不同波長處的紫外吸 收峰強(qiáng)度減弱或增強(qiáng)W及相對應(yīng)的顏色變化； (4) 基于步驟（3)中顏色的變化，確定所述樣品中的氯霉素濃度。
[0007] 進(jìn)一步的，所述的能夠?qū)β让顾靥禺愋宰R別的核酸適配體的DNA序列具有如SEQ IDNO;1所示的核巧酸序列。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方法進(jìn)行氯霉素濃度檢測 的效率和靈敏度。
[000引進(jìn)一步的，所述的核酸適配體的濃度為15nM。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方 法進(jìn)行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0009] 進(jìn)一步的，所述的陽離子聚合物選用PDDA。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方法 進(jìn)行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0010] 進(jìn)一步的，所述的P孤A的濃度為15nM。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方法進(jìn) 行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0011] 進(jìn)一步的，所述的氯霉素濃度為0-10000nM。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方 法進(jìn)行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0012] 進(jìn)一步的，所述的氯霉素濃度為50-4000nM。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方 法進(jìn)行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0013] 進(jìn)一步的，基于下列線性方程，確定所述樣品中氯霉素的濃度： Y=0. 305化0G(C)-0. 1282， (Y=Aew/Ag2。）為不同氯霉素濃度下紫外吸收值比率，C為相應(yīng)氯霉素的濃度。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā)明方法進(jìn)行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，基于體系的顏色變化，確定所述樣品中的氯霉素濃度是通 過將所述體系的紫外可見吸收光譜與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較而完成的，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是 基于已知氯霉素濃度分別為 0nM、10nM、50nM、100nM、500nMUOOOnM、2000nM、4000 nM、6000nMUOOOOnM的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)而建立的。由此，可W進(jìn)一步提高利用本發(fā) 明方法進(jìn)行氯霉素濃度檢測的效率和靈敏度。
[0015] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【附圖說明】
[0016]圖1是利用不同氯霉素濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測的吸收光譜圖； 圖2是利用不同氯霉素濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖； 圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的特異性分析圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的 限制： 實(shí)施例1設(shè)計(jì)與合成相應(yīng)的寡核巧酸片段 通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)一段能夠?qū)β让顾靥禺愋宰R別的DNA片段，序列通過DNA合成 儀制備。
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