粒徑為15 nm的Au納米粒子溶液。將120 mL、0.25 mmol/L的HAuCl4溶液加熱至沸騰，劇烈攪拌條件下加入0.5 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸鈉溶液，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，向溶液加入3 mL、38.8 mmol/L檸檬酸鈉溶液穩(wěn)定劑，保持沸騰30 min，即得到粒徑為40 nm的Au納米粒子。
[0019](2)Au@Ti02核殼納米材料的制備:將30mL、40 nm的Au納米粒子溶液與4 mL、40mmol/L TiF4溶液混合，攪拌30 min，將溶液用超純水稀釋至80 mL后轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中加熱，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
[0020]實(shí)施例5 AuOT12的制備方法
(I) Au納米粒子的制備:將5 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸三鈉溶液迅速加入到保持沸騰的50 mL、I mmol/L的HAuCl4S液中，劇烈攪拌，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，停止加熱，冷卻至室溫，得到粒徑為15 nm的Au納米粒子溶液。將125 mL、0.25 mmol/L的HAuCl4溶液加熱至沸騰，劇烈攪拌條件下加入1.125 mL、15 nm的Au納米粒子溶液與0.56 mL、38.8mmol/L的檸檬酸鈉溶液，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，向溶液加入5 mL、38.8 mmol/L檸檬酸鈉溶液穩(wěn)定劑，保持沸騰30 min，即得到粒徑為40 nm的Au納米粒子。
[0021](2)Au@Ti02核殼納米材料的制備:將36 mL、40 nm的Au納米粒子溶液與4.5 mL、40 mmol/L TiF4S液混合，攪拌30 min，將溶液用超純水稀釋至80 mL后轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中加熱，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
[0022]實(shí)施例6 AuOT12的制備方法
(I)Au納米粒子的制備:將7 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸三鈉溶液迅速加入到保持沸騰的60 mL、I mmol/L的HAuCl4S液中，劇烈攪拌，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，停止加熱，冷卻至室溫，得到粒徑為15 nm的Au納米粒子溶液。將130 mL、0.25 mmol/L的HAuCl4溶液加熱至沸騰，劇烈攪拌條件下加入2.5 mL、15 nm的Au納米粒子溶液與0.6 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸鈉溶液，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，向溶液加入7 mL、38.8 mmol/L檸檬酸鈉溶液穩(wěn)定劑，保持沸騰30 min,即得到粒徑為40 nm的Au納米粒子。
[0023](2) AuOT12核殼納米材料的制備:將40 mL、40 nm的Au納米粒子溶液與5 mL、40 mmol/L TiF4S液混合，攪拌30 min，將溶液用超純水稀釋至80 mL后轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中加熱，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
[0024]實(shí)施例7 Bi2S3的制備方法
將0.00375 mol Bi(NO3)3.5H 20加入到20 mL的乙二醇水溶液中，攪拌20 min，得到溶液A。將0.005625 mol Na2S加入到20 mL超純水中，攪拌10 min，得到溶液B。將溶液B緩慢滴加至溶液A中，加入0.03 mol尿素和20 mL超純水并轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
[0025]實(shí)施例8 Bi2S3的制備方法
將0.00375 mol Bi(NO3)3.5H 20加入到25 mL的乙二醇水溶液中，攪拌20 min，得到溶液A。將0.005625 mol Na2S加入到30 mL超純水中，攪拌10 min，得到溶液B。將溶液B緩慢滴加至溶液A中，加入0.032 mol尿素和20 mL超純水并轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
[0026]實(shí)施例9 Bi2S3的制備方法
將0.00375 mol Bi(NO3)3.5H 20加入到30 mL的乙二醇水溶液中，攪拌20 min，得到溶液A。將0.005625 mol Na2S加入到40 mL超純水中，攪拌10 min，得到溶液B。將溶液B緩慢滴加至溶液A中，加入0.035 mol尿素和20 mL超純水并轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
[0027]實(shí)施例10乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的檢測方法
(I)采用三電極體系進(jìn)行測定，如權(quán)利要求1所制備的光電化學(xué)傳感器為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為對電極，利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測，光電檢測采用1-t測試手段，偏壓設(shè)置為0.1 V，光源為450nm (每隔10 s進(jìn)行開關(guān)燈)。
[0028](2)在15 mL、pH 7.4的含0.1 mo I/L抗壞血酸的PBS緩沖溶液中，通過光電化學(xué)工作站檢測0.01 ng/mL ~ 50 ng/mL—系列不同濃度的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過記錄開關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同光電流信號，繪制工作曲線；
(3)將待測樣品溶液代替CA15-3標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，檢測的結(jié)果可通過工作曲線的查得。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種基于Au@Ti02/Bi2S3修飾電極的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的光電化學(xué)傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)Au@Ti02/Bi2S3修飾電極的制備，將ITO導(dǎo)電玻璃切割至2cm X 0.5 cm大小，依次用洗潔精、丙酮、乙醇和超純水超聲清洗30 min，用氮?dú)獯蹈桑粚? μ?、3 mg/mL的AuOT12溶液滴加到電極表面，室溫條件下自然晾干，將6 μ?、3~5 mg/mL的Bi2S3溶液滴加到電極表面，室溫條件下晾干； (2)滴加6μ?、8~12 Pg/mL的CA15-3捕獲抗體Ab1于電極表面，4°C冰箱中晾干，超純水沖洗； (3)滴加3PL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 -2.0 %的BS溶液A于電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點(diǎn)，4°C冰箱中晾干； (4)用超純水清洗，晾至濕潤狀態(tài)，將6UL,0.01 ng/mL ~ 50 ng/mL不同濃度的CA15-3溶液滴涂于電極表面，使其與CA15-3捕獲抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，4°C冰箱中孵化I h，用超純水沖洗以除去未結(jié)合的CA15-3，室溫下晾干，制得一種基于Au@Ti02/Bi2S3修飾電極的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的光電化學(xué)傳感器。
2.一種基于Au@Ti02/Bi2S3修飾電極的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的光電化學(xué)傳感器的制備方法，所述的八11@1102的制備，其特征在于，步驟如下: (1)Au納米粒子的制備 將3~7 mL、38.8 mmol/L的檸檬酸三鈉溶液迅速加入到保持沸騰的40~60 mL、l mmol/L的HAuCl4溶液中，劇烈攪拌，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，停止加熱，冷卻至室溫，得到粒徑為15 nm的Au納米粒子溶液；將120-130 mL、0.25 mmol/L的HAuCl4S液加熱至沸騰，劇烈攪拌條件下加入0~2.5 mL、15 nm的Au納米粒子溶液與0.5~0.6 mL、38.8 mmol/L的梓檬酸鈉溶液，當(dāng)溶液顏色變?yōu)樯罴t色，向溶液加入3~7 mL、38.8 mmol/L檸檬酸鈉溶液穩(wěn)定劑，保持沸騰30 min,即得到粒徑為40 nm的Au納米粒子； (2)AuOT12核殼納米材料的制備 將30~40 mL、40 nm的Au納米粒子溶液與4~5 mL、40 mmol/L的TiF4S液混合，攪拌30 min，將溶液用超純水稀釋至80 mL后轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中加熱，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
3.如權(quán)利要求1所述的一種基于AuOT12/Bi2S3修飾電極的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的光電化學(xué)傳感器的制備方法，所述的Bi2S3的制備，其特征在于，步驟如下: 將0.00375 mol的Bi (NO3) 3.5H20加入到20~30 mL的乙二醇水溶液中，攪拌20 min,得到溶液A ;將0.005625 mol Na2S加入到20-40 mL超純水中，攪拌10 min,得到溶液B ；將溶液B緩慢滴加至溶液A中，加入0.030-0.035 mol的尿素和20 mL的超純水并轉(zhuǎn)移至100 mL的聚四氟乙烯反應(yīng)釜中，180°C條件下保持24 h，冷卻至室溫，用超純水洗滌至數(shù)次，真空條件下干燥。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種基于AuOT12/Bi2S3修飾電極的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的光電化學(xué)傳感器用于乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的檢測方法，其特征在于，步驟如下: (I)采用三電極體系進(jìn)行測定，如權(quán)利要求1所制備的光電化學(xué)傳感器為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為對電極，利用光電化學(xué)工作站進(jìn)行檢測，光電檢測采用1-t測試手段，偏壓設(shè)置為0.1 V，光源為450nm，每隔10 s進(jìn)行開關(guān)燈； (2)在15mL、pH 7.4的含0.1 mo I/L抗壞血酸的PBS緩沖溶液中，通過光電化學(xué)工作站檢測0.01 ng/mL ~ 50 ng/mL—系列不同濃度的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過記錄開關(guān)燈前后產(chǎn)生的不同光電流信號，繪制工作曲線； (3)將待測樣品溶液代替CA15-3標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，檢測的結(jié)果可通過工作曲線的查得。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于AuTiO2/Bi2S3修飾電極的乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的光電化學(xué)傳感器的制備方法及應(yīng)用，屬于新型功能材料、生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明具體是在電極上將具有光電催化活性的AuTiO2核殼納米材料與Bi2S3納米棒復(fù)合，制備無標(biāo)記型光電化學(xué)傳感器，實(shí)現(xiàn)對乳腺癌標(biāo)志物CA15-3的快速、超靈敏檢測。該方法對乳腺癌的早期診斷及愈后判斷具有重要的意義。
【IPC分類】G01N27-26
【公開號】CN104865300
【申請?zhí)枴緾N201510249674
【發(fā)明人】柳懿芯, 魏琴, 馬洪敏, 王曉東, 吳丹, 胡麗華, 范大偉, 顏兆慶, 王超, 劉振
【申請人】濟(jì)南大學(xué)
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年5月17日