一種高效液相色譜法測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，所屬技術(shù)領(lǐng)域:二、生物與新醫(yī)藥技術(shù)(七)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)4、農(nóng)產(chǎn)品精深加工與現(xiàn)代儲運:農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評價、快速檢測、全程質(zhì)量控制等技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]HPLC是一項高壓、高效、高靈敏度的分離技術(shù)，可用于分離分析高沸點、相對分子量大、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、化工、高分子、生物、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
[0003]齊墩果酸、熊果酸主要存在于大豆油及其油腳中，為五環(huán)三萜類化合物；性質(zhì)相近，難以分離；是一種活性成分；有保肝、消炎、抗腫瘤、降血脂、增強(qiáng)免疫和抑制免疫(免疫雙向調(diào)解作用)等作用。
[0004]目前這2種物質(zhì)還只能從植物中提取，無法化學(xué)合成；檢測方法有分光光度法、薄層掃描法和高效液相色譜法，前者通常采用顯色劑顯色后測定，由于他們性質(zhì)相近，分光光度法通常測得其三萜類總量，方法缺乏專屬性；而普通的薄層色譜很難使OA和UA分離；相比較而言，HPLC較容易實施兩者的分離，且紫外檢測相對于蒸發(fā)光散射檢測有較好的重現(xiàn)性。在現(xiàn)有可查范圍內(nèi)，利用HPLC同時測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸未見報道，采用反相高效液相色譜法二極管陣列檢測器測定了大豆油中的齊墩果酸和熊果酸含量，旨在為評價大豆油的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種高效液相色譜法測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，從而準(zhǔn)確測定其含量，方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]一種高效液相色譜法測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟:
[0008](I)對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品10.20mg、熊果酸對照品8.54mg，分別置1ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得齊墩果酸、熊果酸對照品貯備液。
[0009](2)樣品溶液的處理:取大豆油樣品約1.0-2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加無水乙醇25ml，密塞，稱定重量，60-90°C水浴提取l_4h，浸漬0.5_2h，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0010](3)將濾液過0.40-0.50 μ m微孔濾膜后，在實驗色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜法測定，得測定數(shù)值；所述的實驗色譜條件為:色譜柱:C18柱，250X4.6mm，5ym;流動相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測器的檢測波長:210nm ;流動相流速為0.6mL/min,柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L ;
[0011](4)按照外標(biāo)法計算大豆油中齊墩果酸、熊果酸的含量。
[0012]所述的高效液相色譜法測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于:所述的實驗色譜條件為:色譜柱:Cj±，250X4.6mm，5ym;流動相:265%甲醇-35%水-0.1%冰乙酸-0.05%三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測器的檢測波長:210nm ;流動相流速為0.6mL/min，柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L。
[0013]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明可準(zhǔn)確測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸的含量，方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好:1、使用無水乙醇為提取液，安全環(huán)保，價格低廉，提取率較好；2、流動相使用冰乙酸和三乙胺，改善了目標(biāo)峰峰型，使峰拖尾情況大大改善；3、三萜分離檢測靈敏度高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，在一定范圍內(nèi)，2種三萜類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(r2彡0.999)，三種物質(zhì)保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于0.06%，2種三萜含量測定相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于0.4%，因此本發(fā)明的檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
【附圖說明】
[0014]圖1本發(fā)明實施例2對照品中齊墩果酸、熊果酸的色譜圖，a齊墩果酸、b熊果酸。
[0015]圖2本發(fā)明實施例2大豆油中齊墩果酸、熊果酸的色譜圖，a齊墩果酸、b熊果酸。
【具體實施方式】
[0016]實施例1:高效液相色譜法測定大豆油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下步驟:
[0017](I)對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品10.20mg、熊果酸對照品8.54mg，分別置1ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得齊墩果酸、熊果酸對照品貯備液。
[0018](2)樣品溶液的處理:取大豆油樣品約0.5-1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加無水乙醇25ml，密塞，稱定重量，60-90°C水浴提取l_4h，浸漬0.5_2h，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0019](3)將濾液過0.40-0.50 μπι微孔濾膜后，在實驗色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜法測定，得測定數(shù)值；所述的實驗色譜條件為:色譜柱:C18柱，250X4.6臟，5_;流動相:265 %無水乙醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測器的檢測波長:210nm ;流動相流速為0.6mL/min，柱溫20 °C，進(jìn)樣體積為20 μ L ;
[0020](4)按照外標(biāo)法計算大豆油中齊墩果酸、熊果酸的含量。
[0021]所述的實驗色譜條件為:色譜柱:C18柱，250X4.6mm，5ym;流動相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸
0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測器的檢測波長:210nm ;流動相流速為0.6mL/min，柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L。
[0022]實施例2:本發(fā)明的具體實驗數(shù)據(jù):
[0023]I儀器與試劑
[0024]儀器:1100高效液相色譜儀(包括G1311A泵、G1322脫氣機(jī)、G1313AZ自動進(jìn)樣器、G1313A柱溫箱、G1315 DAD ;Agilent 1100 ChemStat1n) ;BP221D 電子天平(Sartorius公司)；KQ-250D