中藥覆盆子中指標(biāo)成分含量的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及中藥覆盆子中指標(biāo)成分含量的測定方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥覆盆子為薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子（RubuschingiiHu)的干燥果實(shí)。 夏初果實(shí)由綠變綠黃時采收，除去梗、葉，置沸水中略燙或略蒸，取出，干燥，即得中藥覆盆 子。中藥覆盆子具有益腎固精縮尿、養(yǎng)肝明目之功效，臨床用于治療遺精滑精、遺尿尿頻、陽 瘺早泄、目暗昏花等?，F(xiàn)代藥理研宄表明覆盆子具有抗氧化、抗炎、抗血栓、抗癌等活性，其 化學(xué)成分主要有黃酮類、萜類、留體類、酚酸類等。
[0003] 《中國藥典》2010年版一部收錄了中藥覆盆子性狀和粉末鑒別，未收錄薄層鑒別和 含量測定項(xiàng)。但是，只通過性狀和粉末的鑒別難以科學(xué)評價(jià)和控制中藥覆盆子的品質(zhì)質(zhì)量。 只有進(jìn)一步的測定中藥覆盆子中指標(biāo)成分的含量，才能從根本上保證中藥覆盆子的藥效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了更好地評價(jià)和控制中藥覆盆子的品質(zhì)，本發(fā)明實(shí)施例公開了中藥覆盆子中指 標(biāo)成分含量的測定方法。技術(shù)方案如下：
[0005] 中藥覆盆子中指標(biāo)成分含量的測定方法，包括以下步驟：
[0006] (1)制備供試品溶液
[0007] 將質(zhì)量為M的中藥覆盆子與V體積0~100%甲醇混合，得到二者混合液，在確定 混合液的重量乂后，對其進(jìn)行提取操作，然后用0~100 %甲醇將所述混合液的重量補(bǔ)足至 Mi，取上清液，即得供試品溶液；
[0008] (2)制備混合對照品溶液
[0009] 分別稱取中藥覆盆子中N種指標(biāo)成分的對照品，分別用0~100%甲醇溶解，定容， 得到具有已知濃度的各指標(biāo)成分的對照品溶液；
[0010] 再分別量取各指標(biāo)成分的對照品溶液，混合，用〇~100%甲醇定容，得到混合對 照品儲備液，所述混合對照品儲備液中各指標(biāo)成分具有已知濃度；
[0011] 將對照品混合儲備液用0~100%甲醇逐級稀釋成一系列分別具有不同已知濃度 的混合對照品洛液；
[0012] (3)超高效液相色譜檢測
[0013] 色譜條件包括：固定相：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱；流動相：A相為乙 腈，B相為0.1%甲酸，A相：B相為（3~70): (97~30);流速為0.2~l.OmL/min，柱溫為 30~50°C，PDA檢測器，檢測波長為253~344nm;
[0014] 在所述色譜條件下，將％體積的供試品溶液及各濃度的混合對照品溶液分別注入 超高效液相色譜儀中，獲得供試品溶液的超高效液相色譜圖及各濃度混合對照品溶液的超 高效液相色譜圖；
[0015] (4)建立N種指標(biāo)成分各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0016] 以各混合對照品溶液的超高效液相色譜圖中各指標(biāo)成分的色譜峰峰面積為縱坐 標(biāo)或橫坐標(biāo)，以混合對照品溶液中各指標(biāo)成分的濃度為橫坐標(biāo)或縱坐標(biāo)，分別建立各指標(biāo) 成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0017] (5)確定N種指標(biāo)成分在供試品中各自的含量
[0018] 根據(jù)供試品溶液超高效液相色譜圖中N種指標(biāo)成分各自的色譜峰峰面積，及已建 立的各指標(biāo)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算出N種指標(biāo)成分各自的濃度，并按照下列公式分 別計(jì)算出供試品中N種指標(biāo)成分各自的含量：
[0019] 含量=C濃 *V/M。
[0020] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述提取為超聲提取。
[0021] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，在將所述混合液的重量補(bǔ)足至札后，離心，再取 上清液。
[0022] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述0~100%甲醇為70~85%甲醇。
[0023] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述流速為0. 4mL/min。
[0024] 在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述流動相：A相為乙腈，B相為0. 1%甲酸，A 相：B相為18:82。
[0025] 在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的指標(biāo)成分為鞣花酸，即N= 1時，所述 色譜條件包括：固定相：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱；流動相：A相為乙腈，B相為 0. 1%甲酸，A相：B相為18:82 ;流速0. 4mL/min;柱溫40°C;PDA檢測器；檢測波長為253nm。
[0026] 在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施方式中，所述指標(biāo)成分為鞣花酸和山柰酚-3-0-蕓香 糖苷，即N= 2時，所述色譜條件包括：固定相：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱；流動 相：A相為乙腈，B相為0. 1%甲酸，A相：B相為18:82 ;流速0. 4mL/min;柱溫40°C;PDA檢 測器；檢測波長為253nm和265nm。
[0027] 在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施方式中，所述指標(biāo)成分為腺苷、沒食子酸、短葉蘇木 酚酸、沒食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-0-蕓香糖苷、山柰酚-3-0-葡萄糖苷、椴樹苷，即 N= 8時，所述色譜條件包括：固定相：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱；流動相：乙 腈：0? 1% 甲酸比為 0 ~2min，3:97 ~5:95 ;2 ~8min，5:95 ~11. 5:88. 5 ;8 ~13. 5min， 11. 5:88. 5 ~15. 5:84. 5 ;13. 5 ~15min，15. 5:84. 5 ~18:82 ;15 ~18min，18:82 ~20:80 ; 18 ~23min，20:80 ~38:62 ;23 ~25min，38:62 ~70:30 ;柱溫為 30°C;PDA檢測器；檢測 波長為 256nm、265nm、271nm和 344nm。
[0028] 本發(fā)明構(gòu)建的中藥覆盆子中指標(biāo)成分含量的測定方法，準(zhǔn)確高效，可用于對中藥 覆盆子的質(zhì)量控制，并且該方法可同時檢測中藥覆盆子中多種指標(biāo)成分，相對于針對不同 指標(biāo)成分分別檢測的方法，縮短檢測總時間，節(jié)省試劑成本。并且檢測結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高， 重復(fù)性好，穩(wěn)定性高，專屬性強(qiáng)。
[0029] 當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品或方法并不一定需要同時達(dá)到以上所述的所有優(yōu) 點(diǎn)。
【附圖說明】
[0030] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以 根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0031] 圖1A為253nm波長下鞣花酸對照品溶液超高效液相色譜圖；
[0032] 圖1B為253nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液的色譜圖；
[0033] 圖2A為253nm波長下鞣花酸和山柰酚-3-0-蕓香糖苷混合對照品溶液色譜圖；
[0034] 圖2B為265nm波長下鞣花酸和山柰酚-3-0-蕓香糖苷混合對照品溶液色譜圖；
[0035] 圖2C為253nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液色譜圖；
[0036] 圖2D為265nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液色譜圖；
[0037] 圖3A為256nm波長下8種混合對照品溶液色譜圖；
[0038] 圖3B為265nm波長下8種混合對照品溶液色譜圖；
[0039] 圖3C為271nm波長下8種混合對照品溶液色譜圖；
[0040] 圖3D為344nm波長下8種混合對照品溶液色譜圖；
[0041] 圖3E為256nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液的色譜圖；
[0042] 圖3F為265nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液的色譜圖；
[0043] 圖3G為271nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液的色譜圖；
[0044] 圖3H為344nm波長下中藥覆盆子（浙江）供試品溶液的色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0045] 《中國藥典》2010年版一部收錄了中藥覆盆子性狀和粉末鑒別，未收錄薄層鑒別和 含量測定項(xiàng)。目前已知中藥覆盆子成分中腺苷、沒食子酸、短葉蘇木酚酸、沒食子酸乙酯、鞣 花酸、山柰酚-3-0-蕓香糖苷、山柰酚-3-0-葡萄糖苷和椴樹苷的含量對評定中藥覆盆子藥 性很重要。
[0046] 本發(fā)明建立了一種中藥覆盆子中指標(biāo)成分含量的測定方法。該方法可以根據(jù)本領(lǐng) 域技術(shù)人員的需要，將中藥覆盆子成分中的1種或多種作為指標(biāo)成分，進(jìn)行含量測定，在此 發(fā)明人對指標(biāo)成分的種類不做具體限定。
[0047] 在本發(fā)明的技術(shù)方案中，制備供試品溶液的步驟中將中藥覆盆子與0~100%甲 醇混合后，稱重，提取完畢后，再稱重，用相同體積分?jǐn)?shù)的甲醇補(bǔ)足失重，再取上清，上述步 驟可達(dá)到兩個目的：充分提取和定容。此定容方法相對于取盡上清再用提取溶劑定容的 方法，可以消除實(shí)驗(yàn)操作過程中的人為不能將上清悉數(shù)取盡所產(chǎn)生的誤差，獲得的結(jié)果更 接近理論真實(shí)值。此定容方法是對傳統(tǒng)的定容方法的改良。用此方法定容后，取部分上清 液，能夠滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求即可，簡化了定容的實(shí)驗(yàn)步驟。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到〇~ 100%甲醇都可以實(shí)現(xiàn)將中藥覆盆子中的指標(biāo)成分提取的目的，但為了提高提取效率，優(yōu)選 70~85%甲醇作為提取溶劑，更優(yōu)選體積分?jǐn)?shù)為70%甲醇進(jìn)行提?。粸榱舜_保在取上清 時，不會取到藥渣，影響后續(xù)的檢測結(jié)果，優(yōu)選離心后取上清。
[0048] 本發(fā)明的技術(shù)方案，在制備對照品溶液過程中，先將指標(biāo)成分對照品分別溶解定 容，制成具有已知濃度的對照品儲備液；再分別精密吸取適量的對照品儲備液，混合，用 0~100%甲醇定容，得到具有已知濃度的各指標(biāo)成分的混合對照品溶液；最后，逐級稀釋 成一系列分別具有不同已知濃度的混合對照品溶液。這樣可以實(shí)現(xiàn)同時檢測幾種對照品溶 液的目的，省去對于每個對照品分別進(jìn)樣的繁瑣步驟，節(jié)省時間。在本領(lǐng)域中，通常稀釋5-8 個濃度梯度，這樣處理在建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時，線性關(guān)系好，可以正確評定供試品溶液中指標(biāo)成 分的濃度。
[0049] 本發(fā)明技術(shù)方案