一種高效液相色譜法測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，所 屬技術(shù)領(lǐng)域：二、生物與新醫(yī)藥技術(shù)（七）現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)4、農(nóng)產(chǎn)品精深加工與現(xiàn)代儲運(yùn)： 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評價(jià)、快速檢測、全程質(zhì)量控制等技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] HPLC是一項(xiàng)高壓、高效、高靈敏度的分離技術(shù)，可用于分離分析高沸點(diǎn)、相對分子 量大、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、化工、高分子、生物、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
[0003] 齊墩果酸、熊果酸主要存在于菜籽油及其油腳中，為五環(huán)三萜類化合物；性質(zhì)相 近，難以分離；是一種活性成分；有保肝、消炎、抗腫瘤、降血脂、增強(qiáng)免疫和抑制免疫（免疫 雙向調(diào)解作用）等作用。
[0004] 目前這2種物質(zhì)還只能從植物中提取，無法化學(xué)合成；檢測方法有分光光度法、薄 層掃描法和高效液相色譜法，前者通常采用顯色劑顯色后測定，由于他們性質(zhì)相近，分光光 度法通常測得其三萜類總量，方法缺乏專屬性；而普通的薄層色譜很難使OA和UA分離；相 比較而言，HPLC較容易實(shí)施兩者的分離，且紫外檢測相對于蒸發(fā)光散射檢測有較好的重現(xiàn) 性。在現(xiàn)有可查范圍內(nèi)，利用HPLC同時(shí)測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸未見報(bào)道，采用反相 高效液相色譜法二極管陣列檢測器測定了菜籽油中的齊墩果酸和熊果酸含量，旨在為評價(jià) 菜籽油的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種高效液相色譜法測定菜籽油中齊墩果 酸、熊果酸含量的方法，從而準(zhǔn)確測定其含量，方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] -種高效液相色譜法測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包 括以下步驟：
[0008] (1)對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品10. 20mg、熊果酸對照品8. 54mg， 分別置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得齊墩果酸、熊果酸對照品貯備 液。
[0009] (2)樣品溶液的處理：取菜籽油樣品約2. 0-3. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精 密加甲醇25ml，密塞，稱定重量，60-90°C水浴提取l_2h，超聲5-20min，再稱定重量，用甲醇 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0010] (3)將濾液過0. 40-0. 50ym微孔濾膜后，在實(shí)驗(yàn)色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜 法測定，得測定數(shù)值；所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為：色譜柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流動相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外檢測器的檢測波長：210nm;流動相流速為0. 6mL/ min，柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20yL;
[0011] ⑷按照外標(biāo)法計(jì)算菜籽油中齊墩果酸、熊果酸的含量。
[0012] 所述的高效液相色譜法測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在 于：所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為：色譜柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流動相：265%甲醇-35% 水-0. 1 %冰乙酸-0. 05%三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0. 05mL和三 乙胺0. 05mL配置；紫外檢測器的檢測波長：210nm;流動相流速為0. 6mL/min，柱溫20°C，進(jìn) 樣體積為20yL。
[0013] 本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明可準(zhǔn)確測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸的含量，方 法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好：1、利用超聲波輔助提取技術(shù)，大大節(jié)約了提取時(shí)間； 2、流動相中使用三乙胺，改善了目標(biāo)峰峰型，使峰拖尾情況大大改善；3、三萜分離檢測 靈敏度高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，在一定范圍內(nèi)，2種三萜類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好 (r2彡0. 999)，三種物質(zhì)保留時(shí)間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)均小于0. 06%，2種三萜含量測定相 對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)均小于0.4%，因此本發(fā)明的檢測結(jié)果準(zhǔn)確。。
【附圖說明】
[0014] 圖1本發(fā)明實(shí)施例2齊墩果酸對照品的線性圖。
[0015] 圖2本發(fā)明實(shí)施例2熊果酸對照品的線性圖。
[0016] 圖3本發(fā)明實(shí)施例2對照品中齊墩果酸、熊果酸的色譜圖，a齊墩果酸、b熊果酸。
[0017] 圖4本發(fā)明實(shí)施例2菜籽油中齊墩果酸、熊果酸的色譜圖，a齊墩果酸、b熊果酸。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1 :高效液相色譜法測定菜籽油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下 步驟：
[0019] (1)對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品10. 20mg、熊果酸對照品8. 54mg， 分別置l〇ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得齊墩果酸、熊果酸對照品貯備 液。
[0020] (2)樣品溶液的處理：取菜籽油樣品約0. 5-1. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精 密加甲醇25ml，密塞，稱定重量，60-90°C水浴提取l_2h，超聲5-20min，再稱定重量，用甲醇 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0021] (3)將濾液過0. 40-0. 50ym微孔濾膜后，在實(shí)驗(yàn)色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜 法測定，得測定數(shù)值；所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為：色譜柱：C18柱，250X4. 6mm，5ym;流動相： 265 %甲醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰 乙酸0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外檢測器的檢測波長：210nm;流動相流速為0. 6mL/ min，柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20yL;
[0022] (4)按照外標(biāo)法計(jì)算菜籽油中齊墩果酸、熊果酸的含量。
[0023]所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為：色譜柱：(：18柱，250\4.6111111，5錢；流動相 ：265 %甲 醇-35 %水-0. 1 %冰乙酸-0. 05 %三乙胺，其中，流動相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸 0. 05mL和三乙胺0. 05mL配置；紫外檢測器的檢測波長：210nm;流動相流速為0. 6mL/min， 柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20yL。
[0024] 實(shí)施例2 :本發(fā)明的具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：
[0025] 1儀器與試劑
[0026] 儀器：1100高效液相色譜儀（包括G1311A泵、G1322脫氣機(jī)、G1313AZ自動進(jìn)樣 器、G1313A柱溫箱、G1315DAD;Agilent1100ChemStation) ;BP221D電子天平（Sartorius 公司）；KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗