一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量測(cè)定方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油 滴丸中薄荷腦含量的方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 薄荷素油滴丸中主要成分為薄荷素油，薄荷素油主要成份為薄荷腦（menthol)，因 此含量測(cè)定選擇以薄荷腦為測(cè)定指標(biāo)。通過(guò)對(duì)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的測(cè)定，能夠有 效的控制其質(zhì)量，保證臨床用藥的有效性和安全性。薄荷腦，是一種白色條狀或柱狀結(jié)晶， 為單萜類成分，沸點(diǎn)較低，易揮發(fā)，難溶于水，易溶于乙醇、酯等，制成水溶型制劑存在一 定的困難。
[0004] 檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量，常用檢測(cè)方法是使用內(nèi)標(biāo)法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè) 定，操作過(guò)程較復(fù)雜，并且還需要使用內(nèi)標(biāo)物，成本高。
[0005] 現(xiàn)在有人運(yùn)用氣相色譜儀來(lái)進(jìn)行原料成份的檢測(cè)與分析，氣相色譜儀是一種多組 份混合物的分離、分析工具，它是以氣體為流動(dòng)相，采用沖洗法的柱色譜技術(shù)。當(dāng)多組份的 分析物質(zhì)進(jìn)入到色譜柱時(shí)，由于各組分在色譜柱中的氣相和固定液液相間的分配系數(shù)不 同，因此各組份在色譜柱的運(yùn)行速度也就不同，經(jīng)過(guò)一定的柱長(zhǎng)后，順序離開(kāi)色譜柱進(jìn)入檢 測(cè)器，經(jīng)檢測(cè)后轉(zhuǎn)換為電信號(hào)送至數(shù)據(jù)處理工作站，從而完成了對(duì)被測(cè)物質(zhì)的定性定量分 析。
[0006] 但采用氣相色譜法建立含量測(cè)定方法，標(biāo)準(zhǔn)操作步驟不僅僅是儀器的開(kāi)機(jī)、關(guān)機(jī) 等簡(jiǎn)單的確操作步驟。不同原料種類具有不同的關(guān)鍵測(cè)定參數(shù)，不同的關(guān)鍵測(cè)定參數(shù)會(huì)得 到不同的檢測(cè)結(jié)果。
[0007] 目前還沒(méi)有關(guān)于用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的相關(guān)報(bào)道。因 此，是否可以用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量？如何在測(cè)定過(guò)程中選擇適合 薄荷腦含量的測(cè)定參數(shù)？并且如何使選取目標(biāo)峰的分離度、對(duì)稱性、理論塔板數(shù)均能都達(dá) 到藥典要求的條件？等等。這些問(wèn)題目前則是未知，需要去探索。
[0008]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 為了解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷 腦含量的方法，此方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性高，穩(wěn)定性好，檢測(cè)成本低。
[0010] 解決以上技術(shù)問(wèn)題的一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的方法， 其特征在于：包括以下步驟： (1)制備薄荷腦對(duì)照品溶液：制備薄荷腦對(duì)照品溶液：取薄荷腦對(duì)照品，稱定，加乙醇 制成；具體為取薄荷腦對(duì)照品，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0. 2-0. 52mg薄荷腦的溶 液，即得。
[0011] (2)制備供試品溶液：取供試品，稱定置量瓶中，加水和乙醇，過(guò)濾即得； 具體為取供試品，精密稱定，置量瓶中，加水，超聲處理使溶散，加入無(wú)水乙醇，超聲處 理4-5分鐘，放冷，加無(wú)水乙醇至所需刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； (3) 吸取不同體積的A、B、C、D和E薄荷腦對(duì)照品溶液，注入氣相色譜儀，測(cè)定峰面積， 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計(jì)算，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲 線回歸方程，Y=nX+4e-13, X為進(jìn)樣量，Y為峰面積，η為斜率，4E-13為4*10_13的科學(xué)計(jì)數(shù)； (4) 吸取供試品溶液，注入氣相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，用外標(biāo)法計(jì)算薄荷腦的含 量；或根據(jù)步驟（3)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出薄荷腦的含量； 其中，本發(fā)明的優(yōu)化方案中，所述氣相色譜儀中以聚乙二醇20000為固定相的毛細(xì)管 柱；分流進(jìn)樣，分流比10-20 :1 ;柱溫為程序升溫，初始溫度50-115°C，保持4-5分鐘，以每 分鐘1. 5-4°C的速率升溫至200°C，保持2-3分鐘；進(jìn)樣口溫度230°C ;檢測(cè)器溫度230°C ; 載氣流量l-2ml/min。
[0012] 還有優(yōu)化方案中，所述超聲處理中超聲功率200W，頻率40kHz。
[0013] 所述毛細(xì)管柱柱長(zhǎng)為30m，內(nèi)徑為0. 53mm，膜厚度為1 μ m。
[0014] 所述分流比為10 :1，分流比為10:1的色譜峰峰形最為對(duì)稱，分離度最好，塔板數(shù) 最尚。
[0015] 所述載氣流量2ml/min的色譜峰峰形最為對(duì)稱，分離度最好。
[0016] 所述柱溫為程序升溫：初始溫度80-115?，保持4-5分鐘，以每分鐘3-4°C的速率 升溫至200 °C，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度230 °C。
[0017] 進(jìn)一步優(yōu)化方案中，所述柱溫為程序升溫：初始溫度115°c，保持5分鐘，以每分鐘 4°C的速率升溫至200°C，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度230°C。
[0018] 所述檢測(cè)方法中按薄荷腦峰計(jì)算，理論板塔數(shù)不低于50000。
[0019] 本發(fā)明的檢測(cè)過(guò)程中每次吸取供試品溶液量為1 μ 1。
[0020] 為了簡(jiǎn)化操作流程，本發(fā)明中采用外標(biāo)法對(duì)薄荷素油滴丸進(jìn)行含量測(cè)定，通過(guò)對(duì) 薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的測(cè)定，有效的控制其質(zhì)量，保證臨床用藥的有效性和安全性。
[0021] 薄荷腦為單萜類成分，沸點(diǎn)較低，采用氣相色譜法建立含量測(cè)定方法。其中柱 溫、載氣流速、分流比為關(guān)鍵參數(shù)。柱溫，載氣流速不同出峰時(shí)間、目標(biāo)峰的對(duì)稱性、分離度、 理論塔板數(shù)不同；分流比不同，進(jìn)入儀器的樣品量不同，分流比大，進(jìn)入儀器的樣品量大，分 流比小，進(jìn)入儀器的樣品量小。
[0022] 氣相色譜儀要求進(jìn)行儀器的樣品各成分均具有揮發(fā)性，在選擇溶劑時(shí)優(yōu)先選擇具 有揮發(fā)性，毒性小的溶劑，經(jīng)過(guò)多種溶劑的對(duì)比，最終選擇無(wú)水乙醇作為提取溶劑。
[0023] 本發(fā)明中的檢測(cè)方法的理論板數(shù)為157833、分離度位1. 52、重復(fù)性為1%和拖尾因 子為1. 03,均達(dá)到《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D高效液相色譜法中的規(guī)定。
[0024]
【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1為本發(fā)明中實(shí)施例5的膽舒滴丸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 圖2-1，2-2, 2-3為本發(fā)明中專屬性考察色譜圖 圖中R是相關(guān)系數(shù)，X為進(jìn)樣量，Y為峰面積，η為斜率，4Ε-13為4*10-13的科學(xué)計(jì)數(shù)
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下通過(guò)實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，其中： 所用實(shí)驗(yàn)儀器為Agilent 78090B氣相色譜儀；色譜柱：HP-INN0WAX毛細(xì)管柱 (30m*0. 53mm*l μπι);萬(wàn)分之一天平(賽多利斯BS110S)、KQ - 250B型超聲清洗器（昆山超 聲電子有限公司）。
[0027] 所用試劑及試藥：水為超純水，無(wú)水乙醇為分析純。
[0028] 薄荷腦為中國(guó)藥品生物制品檢定所110728-200506 ; 膽舒滴丸：四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，批號(hào)為1312001,312002， 1312003,140501，140502,140503,150401，150402,150403。
[0029] 實(shí)施例1 一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的方法，包括以下步驟： (1)制備對(duì)照品溶液：取薄荷腦對(duì)照品，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0. 2mg的 溶液，即得。
[0030] (2)制備供試品溶液：取本品5丸，精密稱定，置50ml量瓶中，加水4ml，超聲處理 使溶散，加入無(wú)水乙醇30ml，超聲處理(功率200W，頻率40kHz) 5分鐘，放冷，加無(wú)水乙醇至 刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得； 膽舒滴丸的基質(zhì)為聚乙二醇6000,在水或乙醇中易溶，薄荷素油與乙醇、氯仿或乙醚 能任意混合，同時(shí)在測(cè)定過(guò)程當(dāng)中大量進(jìn)水樣對(duì)毛細(xì)管柱損傷比較大，因此確定本發(fā)明中 膽舒滴丸圖譜供試品溶液的制備方法。
[0031] (3)分別精密吸取薄荷腦對(duì)照品溶液（0· 52mg/ml)0. 2 μ 1、0· 5 μ 1、0· 8 μ 1、1 μ 1、 I. 5 μ 1，注入氣相色譜儀，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性 回歸計(jì)算，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，Y=nx+4e-13, X ( yg)為進(jìn)樣量，Y為峰 面積，η為斜率，4E-13為4*10_13的科學(xué)計(jì)數(shù)； 氣相色譜儀中以聚乙二醇20000為固定相的毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)為30m，內(nèi)徑為0. 53mm，膜 厚度為1 μ m);柱溫為程序升溫：初始溫度50°C，保持5分鐘，以每分鐘I. 5°C的速率升溫至 200°C，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度230°C ;檢測(cè)器溫度230°C ;分流進(jìn)樣，分流比10 :1 ;載氣流 量I. 5ml/min ;理論板數(shù)按薄荷腦峰計(jì)算應(yīng)不低于50 000。
[0032] (4)精密吸取供試品溶液各1 μ 1，注入氣相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，用外標(biāo)法計(jì) 算薄荷腦的含量；或根據(jù)步驟（3)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出薄荷腦的含量。
[0033] 實(shí)施例2 一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷腦含量的方法，其它內(nèi)容如實(shí)施例1，其 中： 制備對(duì)照品溶液：取薄荷腦對(duì)照品，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1ml含0. 52mg的溶 液，即得。
[0034] 氣相色譜儀中以聚乙二醇20000為固定相的毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)為30m，內(nèi)徑為 0. 53mm，膜厚度為1 μ m);柱溫為程序升溫：初始溫度60°C，保持4分鐘，以每分鐘3°C的速 率升溫至200°C，保持3分鐘；進(jìn)樣口溫度230°C ;檢測(cè)器溫度230°C ;分流進(jìn)樣，分流比20 : 1 ;載氣流量2ml/min ;理論板數(shù)按薄荷腦峰計(jì)算應(yīng)不低于50000。
[0035] 實(shí)施例3 一種用氣相色譜儀檢測(cè)薄荷素油滴丸中薄荷