試劑R1的組分為：
[0049] CAPS (3 -(環(huán)己氨基）一1 -丙磺酸）緩沖液50mmol/L，
[0050] L-乳酸裡 1. 3mmol/L,
[0051] 過氯酸鈉 2mol/L，
[0052] 羥基乙叉二膦酸lml/L
[0053] 十八烷基三甲基溴化銨0? lg/L，
[0054] EMULGEN-707 0. lml/L,
[0055] 抗壞血酸氧化酶1KU/L，
[0056] 膽紅素氧化酶1KU/L，
[0057] PC_300(防腐劑）0.5ml/L;
[0058] 試劑R2的組分為：
[0059] 酒石酸緩沖液100mmol/L，
[0060] NAD+ 10mmol/L,
[0061] 明膠 lg/L，
[0062] PC-300 (防腐劑）0.5ml/L;
[0063] (3)配方3 :試劑R1的組分為：
[0064] CAPS(3 -(環(huán)己氨基）一1 -丙磺酸）緩沖液100mmol/L，
[0065] L-乳酸鋰 1. 3mmol/L，
[0066] 過氯酸鈉 2mol/L，
[0067] 羥基乙叉二膦酸5ml/L
[0068] 十八烷基三甲基溴化銨lg/L，
[0069] EMULGEN-707 lml/L，
[0070] 抗壞血酸氧化酶5KU/L，
[0071] 膽紅素氧化酶3KU/L，
[0072] PC_300(防腐劑）3ml/L;
[0073] 試劑R2的組分為：
[0074] 酒石酸緩沖液100mmol/L，
[0075] NAD+ 10mmol/L,
[0076] 明膠 5g/L，
[0077] PC-300 (防腐劑）0.5ml/L;
[0078] (4)檢測方法：
[0079] 在使用時采用具有雙試劑功能的全自動生化分析儀，本檢測試驗采用日立7180 全自動分析儀，利用終點法進行測定，檢測主波長為340nm，利用速率法進行測定，分別將 R1和R2按照5:1的比例放置到對應(yīng)的試劑位上，在樣品盤的對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標準 品和樣本，操作步驟如表1 :
[0080] 表 1
[0082] 計算方法：乳酸脫氫酶同工酶1含量（U/L) = (AA測定+AA標準）XC標準。
[0083] (5)干擾性試驗：
[0084] 取新鮮混合血清，分成2等份，然后將每等份再分成5等份，加入不同的干擾物質(zhì)， 使其在血清中的濃度達到表2的要求，然后分別用配方2和配方3的試劑，同時對比測定血 清中乳酸脫氫酶同工酶1的含量，加入不同干擾物質(zhì)后各組的測定結(jié)果見表2,相對偏差 (%)=(干擾樣本的測定均值一無干擾物質(zhì)的樣本的測定均值）/無干擾物質(zhì)的測定均 值 X100%。
[0085] 由表2可以看出，抗壞血酸、膽紅素、血紅蛋白和甘油三酯對配方2和配方3的測 試結(jié)果沒有明顯干擾，說明本檢測試劑具有較強的抗干擾能力。
[0086]表 2
[0088] (6)相關(guān)性實驗：
[0089] 取20個臨床血清樣本，樣本號分別為1、2、3-20,每個樣本混合均勻，均分為4 份，分別通過配方1、配方2、配方3的速率法與電泳法共4種方法，檢測血清乳酸脫氫酶同 工酶1的含量，檢測結(jié)果如表3所示。并獲得了用配方2和配方3兩種試劑分別與電泳法 檢測結(jié)果的相關(guān)性曲線（如圖1和圖2所示），通過檢測結(jié)果顯示，通過配方2試劑和配方 3試劑的檢測結(jié)果與電泳法檢測血清乳酸脫氫酶同工酶1的結(jié)果的相關(guān)系數(shù)分別為0. 9993 和0. 9977,說明本乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑具有極高的準確性。
[0090] 表 3
[0091]
[0092] R2。
【主權(quán)項】
1. 一種乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，包括試劑Rl和試劑R2,其特征在于，所述試 劑Rl包含：生物緩沖液其中溶質(zhì)在試劑Rl中的濃度為50-150mmol/L， L-乳酸鋰I. 0-1. 5mmol/L， 過氯酸鈉I. 5-2. 5mol/L， 羥基乙叉二膦酸1-5ml/L， 十八烷基三甲基溴化銨〇. 1-lg/L， 聚氧乙烯烷基醚 0. 1-1ml/L， 防腐劑 0. 5-5ml/L; 所述試劑R2包含：緩沖液其中溶質(zhì)在試劑Rl中的濃度為50-150mmol/L， NAD+ 8-12mmol/L, 防腐劑 0. 5-5ml/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，其特征在于，所述試劑Rl 中還包括：抗壞血酸氧化酶 1-5KU/L， 和/或膽紅素氧化酶1-3KU/L。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，其特征在于，所述試劑R2 中還包括：明膠1-5g/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，其特征在于，所述 試劑Rl中生物緩沖液為CAPS緩沖液，其溶質(zhì)在試劑Rl中的濃度為lOOmmol/L的，在25°C 時，CAPS緩沖液的PH為9. 7。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，其特征在于，所述試劑R2 中緩沖液為酒石酸緩沖液，其溶質(zhì)在試劑Rl中的濃度為100mm〇l/L，在25°C時，酒石酸緩沖 液的pH為3. 5。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，其特征在于，所述防腐劑為 Proclin系列 300 型。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑，其特征在于，所述試劑Rl 與試劑R2的體積比為5:1。8. -種權(quán)利要求7所述的乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑用于檢測乳酸脫氫酶同工酶 1的檢測方法，其特征在于，包含如下步驟： (1) 量取試劑Rl和試劑R2; (2) 將待測血清與試劑Rl混合，測得波長為340nm時的吸光度Al; (3) 將試劑R2加入步驟（2)的混合溶液內(nèi)，3-8min后，測得波長為340nm時的吸光度 A2。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，步驟（3)中的反應(yīng)時間為5min。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用化學(xué)抑制法來檢測乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑。本試劑包括試劑R1和試劑R2，其特征在于，所述試劑R1包含：生物緩沖液其中溶質(zhì)在試劑R1中的濃度為50-150mmol/L，L-乳酸鋰1.0-1.5mmol/L，過氯酸鈉1.5-2.5mol/L，羥基乙叉二膦酸1-5 ml/L，十八烷基三甲基溴化銨 0.1-1g/L，聚氧乙烯烷基醚 0.1-1 ml/L，防腐劑 0.5-5ml/L；所述試劑R2包含：緩沖液 其中溶質(zhì)在試劑R1中的濃度為50-150mmol/L，NAD+ 8-12mmol/L，防腐劑 0.5-5 ml/L。本乳酸脫氫酶同工酶1的檢測試劑具有準確度高、價格低廉的優(yōu)點。
【IPC分類】G01N21/33
【公開號】CN104931448
【申請?zhí)枴緾N201510337664
【發(fā)明人】陳錫良, 張學(xué)德, 羅維曉, 譚柏清
【申請人】陳錫良
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年6月17日