蜂蜜中木薯糖漿摻假的鑒別方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種蜂蜜是否滲有木馨糖漿的鑒別方法。
【背景技術】
[0002] 蜂蜜是一種具有悠久食用歷史的天然食品，深受廣大消費者的喜愛。按照現行的 食品安全國家標準GB14963-2011，蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜/分泌物或蜜露，與自身分 泌物結合后，經充分釀造而成的天然甜物質。然而，為了謀取不正當利益，一些商販和企業(yè) 等制造滲假蜂蜜，將價格低廉的糖或糖漿滲入到純蜂蜜中。蜂蜜滲假的存在嚴重損害了消 費者的權益，也給守法經營的蜂農和蜂蜜企業(yè)造成了嚴重的沖擊。
[0003] 隨著一系列蜂蜜相關檢測標準的頒布，應用穩(wěn)定同位素質譜、薄層色譜、高效液相 色譜等滲假鑒別技術，可W鑒別蜂蜜中庶糖、玉米糖漿等滲假的行為。但現在出現了的木 馨糖漿等C3植物的轉化糖漿，其碳同位素值與蜂蜜的碳同位素值在同一范圍內，使用的制 作工藝也可W除去大部分的寡糖和多糖類物質，致使現有方法很難鑒別滲入木馨糖漿的蜂 蜜。因此，為解決蜂蜜生產中出現的滲假問題，建立靈敏度高、檢測周期短、適應新滲假手段 的蜂蜜中木馨糖漿滲假的鑒別技術就顯得十分重要和緊迫。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對目前用于蜂蜜滲假的木馨糖漿，找到一種靈敏度高、檢測 周期短的蜂蜜中木馨糖漿滲假的鑒別方法。
[0005]本發(fā)明提供了一種蜂蜜中木馨糖漿滲假的鑒別方法，其W亞麻仁苦巧為木馨糖漿 特征標志物，對蜂蜜進行檢測，檢測出亞麻仁苦巧的蜂蜜即為木馨糖漿滲假蜂蜜。
[0006] 進一步地，該方法W液相色譜-質譜法進行檢測。
[0007] 進一步地，其中液相色譜-質譜為線性離子阱-靜電場軌道阱組合質譜 (LTQ-〇rbitrap)。
[000引進一步地，其中液相色譜的分離條件為；色譜柱選用T3色譜柱；柱溫為40°C;流 動相為A. 0. 1 %甲酸一B.甲醇，流速為0. 2mL/min;采用梯度洗脫的方式，W體積百分比 計，0. 0 ~1.Omin，A;99%、B;1% ;1. 0 ~9.Omin，A;99%~50%;B;1%~50% ;9. 1 ~ 18.0min，A;99%、B;1%，液相分離采用在線閥切換技術。
[0009] 進一步地，其中質譜檢測條件為；采用電噴霧離子源；正離子模式掃描；在銷氣 (馬）流量35arb;輔助氣（馬）流量5arb;噴霧電壓4.OOkV;毛細管溫度320°C;毛細管電壓 25V;Tubelens電壓95V的條件下；質譜分辨率設定為30000。
[0010] 進一步地，在進行液相色譜-質譜法之前，還包括前處理步驟。
[0011] 進一步地，前處理步驟為溶解法；準確稱取蜂蜜樣品于具塞刻度離屯、管中，加入超 純水，震蕩至溶解，用0. 2ym濾膜過濾。
[0012] 進一步地，前處理步驟為己膳提取法：準確稱取蜂蜜樣品，加入超純水，禍旋溶解， 再加入己膳，震蕩提取10.Omin，1000化pm高速離屯、3.Omin，取上層清液，氮氣吹干后用超 純水定容，用0. 2ym濾膜過濾。
[0013] 進一步地，檢測出質荷比為265. 1394及270. 0948的亞麻仁苦巧的蜂蜜為木馨糖 漿滲假蜂蜜，未檢測出質荷比為265. 1394及270. 0948的蜂蜜為不包含亞麻仁苦巧的蜂蜜。
[0014] 本發(fā)明公開了一種蜂蜜中木馨糖漿滲假的檢測方法，包括樣品樣品前處理、液相 色譜分離、質譜檢測=個步驟。該方法是W質荷比為265. 1394及270. 0948的亞麻仁苦巧 為木馨糖漿的特征標志物的液相色譜-質譜檢測法。通過液相色譜-質譜法的譜圖比對， 發(fā)現純蜂蜜和木馨糖漿的差異性物質，即木馨糖漿的特征標志物。經過結構鑒定，木馨糖漿 的特征標志物是亞麻仁苦巧（CwHijNOe)。最終確定質荷比為265. 1394及270. 0948的亞麻 仁苦巧為木馨糖漿的特征標志物。
[0015] 所述的樣品前處理方法為；（1)溶解法。準確稱取2.0 (±0.05)g蜂蜜樣品于lOmL 具塞刻度離屯、管中，加入20.0血超純水，震蕩至溶解，用0.2ym濾膜過濾；（2)己膳提取 法。準確稱取2. 0 (±0. 05)g蜂蜜樣品，加入1. 0血超純水，禍旋溶解，再加入5. 0血己膳， 震蕩提取10.Omin，1000化pm高速離屯、3.Omin，取上層清液2. 0血，氮氣吹干后用超純水定 容至1. 0血，用0. 2ym濾膜過濾。
[0016] 所述的液相分離條件為；色譜柱選用T3色譜柱；柱溫為40°C;流動相為A. 0. 1% 甲酸一B.甲醇，流速為0. 2血/min;采用梯度洗脫的方式，W體積百分比計，0. 0~1.Omin， A;99%、B;1% ;1.0 ~9.Omin，A;99%~50%;B;1%~50% ;9. 1 ~18.Omin，A;99%、B; 1% ;液相分離采用在線閥切換技術，保留時間4.Omin之前的糖類等流出物切換至廢液瓶， 不進入質譜，W免其影響結果的可靠性。
[0017] 所述的質譜檢測條件為：使用線性離子阱-靜電軌道阱質譜儀（LTQ-化bitrap); 采用電噴霧離子源；正離子模式掃描；在銷氣（馬）流量35arb;輔助氣（馬）流量5arb;噴霧 電壓4.OOkV;毛細管溫度320°C;毛細管電壓25V;Tubelens電壓95V的條件下；質譜分辨 率設定為30000。由于LTQ-化bitrap具有高質量精度和高分辨率的特性，確保了目標物的 定性可靠和檢測的準確性。
[001引本發(fā)明的方法操作簡單、準確率高、用樣量低、檢測限低，極大地提高了木馨糖漿 滲假蜂蜜檢測的效率和準確性。
【附圖說明】
[0019] 圖la為實施例1中質荷比為265. 1394離子的二級質譜圖；
[0020] 圖化為實施例1中質荷比為270. 0948離子的二級質譜圖；
[0021] 圖2a為實施例1中亞麻仁苦巧的二級質譜圖（質荷比為265. 1394離子）；
[0022] 圖化為實施例1中亞麻仁苦巧的二級質譜圖（質荷比為270. 0948離子）；
[0023] 圖3a為實施例3中真實蜂蜜樣品的液相色譜-質譜譜圖；
[0024]圖3b為實施例3中木馨糖漿樣品的液相色譜-質譜譜圖；
[0025] 圖3c為實施例3中含5%木馨糖漿的蜂蜜樣品的液相色譜-質譜譜圖。
【具體實施方式】
[0026]W下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0027] 實施例1木馨糖漿特征標志物的確定和鑒定
[0028] 第一步，典型木馨糖漿和典型純蜂蜜的收集
[0029] 收集不同廠家和來源的木馨糖漿，共收集到目前常用的12種木馨糖漿；購買3種 不同來源的木馨淀粉，制作木馨糖漿。收集國內不同產地和蜜源的蜂蜜，產地包括迂寧、北 京、河北、河南、山東、湖北、安徽等26個省市，蜜源包括洋槐、油菜、荊條、要花、慕枝、極樹、 葵花、龍眼、紫云英、蘋果、野桂花、芝麻等12種。
[0030] 第二步，木馨糖漿特征峰的確定
[0031] 對收集和制作的木馨糖漿，W及收集的純蜂蜜，使用LTQ-化bitrap進行檢測。通 過譜圖比對，發(fā)現所有被檢測木馨糖漿中均大量含有質荷比為265. 1394和270. 0948的離 子，而所有純蜂蜜中均不含有該兩種離子。因此確認該兩種離子是木馨糖漿顯著區(qū)別于純 蜂蜜的特征性差異物質，可W使用該兩種離子作為木馨糖漿的特征標志物。
[0032] 第=步，木馨糖漿特征標志物的結構鑒定
[0033] 使用LTQ-化bitrap的多級質譜功能，對木馨糖漿中質荷比為265. 1394及 270. 0948的該兩種離子進行二級質譜檢測，見圖la和圖化。由離子的精確質量數和二級 質譜中離子的各個碎片的精確質量數推斷，該兩種物質都是亞麻仁苦巧（Ci"Hi,N〇e)，其中質 荷比為265. 1394的離子是亞麻仁苦巧的[M+N&r加合離子，而質荷比為270. 0948的離子 是亞麻仁苦巧的[M+Na]+加合離子。購買亞麻仁苦巧標準品，經過LTQ-化bitr