康腎口服液質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制領(lǐng)域，具體涉及一種康腎口服液的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性腎炎（CGN)在我國的發(fā)生率有增高的趨勢，故早期防治慢性腎炎并延緩其發(fā) 展為慢性腎衰竭日益受到人們的重視。腎臟病多數(shù)屬"水腫、腰痛"等病范疇。病因多端， 是由于風(fēng)邪外襲，或飲食所傷，或勞逸失衡，久居濕地等所致。不論外感或內(nèi)傷，均為肺脾腎 三臟水液代謝失常所致，尤以脾腎所傷為主，治療宜益氣溫陽，固本澀精，活血通絡(luò)。
[0003] 慢性腎小球腎炎是以血尿、蛋白尿、高血壓和水腫為主要臨床表現(xiàn)的一組原發(fā)性 腎小球疾病，簡稱慢性腎炎，其病程長，病情迀延不愈，病理改變各種各樣，可有腎功能進(jìn)行 性減退，嚴(yán)重者可能出現(xiàn)尿毒癥，預(yù)后差異很大，是我國終末期腎病的首位病因，目前尚無 特殊有效的治療方法。慢性腎炎的病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，有很多因素參與，如感染、自身免 疫、藥物、遺傳、環(huán)境等，其中免疫損傷是多數(shù)慢性腎炎發(fā)生過程中的共同環(huán)節(jié)，幾乎所有慢 性腎炎的發(fā)病進(jìn)程都有免疫學(xué)機(jī)制的參與。中醫(yī)學(xué)將慢性腎炎歸屬于"水腫、腰痛、尿血和 虛勞"范疇，其病變涉及肺脾腎三臟，重在脾腎，其病理機(jī)制為病延日久，脾腎虛損，兼夾淤 血。蓋脾虛則生化乏源，統(tǒng)攝無權(quán)，腎虛則封藏失職，下之失其固攝而蛋白之外精徽外泄于 尿，如此反復(fù)不已，終成頑疾。
[0004] 康腎口服液方中以人參、黃芪為君藥，兩藥為辛、溫之品，入脾腎二經(jīng)，補(bǔ)腎健脾， 固本澀精；懷山藥、白術(shù)等健脾生精化源為臣藥，重在補(bǔ)后天之本，以助先天之本；淫羊藿、 芡實、金櫻子溫陽固本升清，澀精，以不致精微外泄；地龍、紅花化瘀血通經(jīng)絡(luò)，共為佐藥，使 脾腎之絡(luò)氣通暢，又能升輕而降濁；甘草調(diào)和諸藥，又能緩和諸藥陽熱過甚，兼有氣血雙補(bǔ) 之功；以上諸藥密切配合，重點旨在補(bǔ)腎健脾，兼而活血，使正氣自復(fù)，淤血自除，腎病得愈。 現(xiàn)代藥理研宄表明：生黃芪、人參等有增強(qiáng)人體免疫功能，抑制過度自身免疫，清除免疫復(fù) 合物的作用；而紅花、地龍等又有抗凝血、抗血小板聚集及抗血栓形成的功能；黃芪、白術(shù) 等還有利尿消腫的功效；甘草有類糖皮質(zhì)激素樣作用，具備抗炎、抗免疫和組織修復(fù)等多重 功效。
[0005] 為保證制劑的穩(wěn)定性及療效，對康腎口服液制定了全面的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，人參皂苷 Rgl、Re為本品中的有效成分，以高效液相色譜精密定量測定制劑中人參皂苷Rgl、Re的含 量，以薄層色譜分別對人參、黃芪、淫羊藿、甘草定性鑒別。對制劑進(jìn)行了長期穩(wěn)定性試驗， 結(jié)果表明在24個月內(nèi)制劑的質(zhì)量無明顯的變化，為制定制劑的有效期提供了有力的證據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一是為提供一種康腎口服液的質(zhì)量控制方法，該方法能夠快速、 準(zhǔn)確的鑒別康腎口服液中的黃芪、淫羊藿、甘草，并通過高效液相色譜法測定康腎口服液中 人參皂苷Rgl、Re的含量。
[0007] 本發(fā)明提供一種康腎口服液質(zhì)量控制方法，包括黃芩鑒別方法、淫羊藿鑒別方法、 甘草鑒別方法和人參皂苷含量測定方法。
[0008] 進(jìn)一步的，所述人參皂苷含量測定方法為采用高效液相色譜法測定：
[0009] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比 20:80的乙腈-0. 05 %磷酸為流動相，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C，檢測波長為203nm，理 論板數(shù)按人參皂苷Rgl計算應(yīng)多3000 ;
[0010] 對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rgl對照品和人參皂苷Re對照品，加甲醇 制成每毫升含人參皂苷Rgl〇. 5mg、含人參皂苷Re 0. 4mg的混合對照品溶液；
[0011] 供試品溶液的制備，精密量取康腎口服液20ml，置分液漏斗中，加乙醚振搖提取3 次，每次15ml，棄去乙醚液，水液加水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇 液，加氨試液20ml洗滌兩次，棄去氨液，正丁醇液用正丁醇飽和水洗滌3次，棄去水層，正丁 醇層蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0. 45 y m微孔濾 膜濾過，即得；
[0012] 測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 y 1，注入液相色譜儀，測 定，計算即得，本品每毫升含人參以人參皂苷Rgl和Re的總量合計，不得少于0. 20mg。
[0013] 進(jìn)一步的，所述黃芩鑒別方法為薄層色譜法：取康腎口服液5ml，水飽和正丁醇提 取3次，每次20ml，合并提取液，氨試液洗滌2次，每次30ml，合并氨試液洗滌液，用20ml水 飽和正丁醇提取一次，合并正丁醇提取液，蒸干，用10ml甲醇溶解殘渣，移至25ml容量瓶 中，甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液；
[0014] 另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作為對照品溶液；
[0015] 另取不含黃芪的陰性對照樣品，同法制備陰性對照樣品溶液；
[0016] 照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以體積比為13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下層溶液為展開劑，展開，取出晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；
[0017] 觀察硅膠G薄層板，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，在日光下應(yīng)顯 相同的棕褐色斑點，陰性對照樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，應(yīng)未見對應(yīng)的斑 點。
[0018] 進(jìn)一步的，所述淫羊藿鑒別方法為薄層色譜法：取康腎口服液10ml，加乙醚10ml 振搖提取，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸 干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液；
[0019] 另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；
[0020] 另取不含淫羊藿的陰性對照樣品，同法制備陰性對照樣品溶液；
[0021] 照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以 體積比為13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水于10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出 晾干，噴以三氯化鋁試液，l〇5°C加熱2分鐘，置紫外燈365nm下檢視；
[0022] 觀察硅膠G薄層板，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色 的熒光斑點，陰性對照樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，應(yīng)未見對應(yīng)的斑點。
[0023] 進(jìn)一步的，所述甘草鑒別方法為薄層色譜法：取康腎口服液20ml，乙醚提取2次， 每次30ml，棄去乙醚液，水液用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣 加甲醇lml溶解，作為供試品溶液；
[0024] 另取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；
[0025] 另取不含甘草的陰性對照樣品，同法制備陰性對照樣品溶液；
[0026] 照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以體積比為15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；
[0027] 觀察硅膠G薄層板，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng) 的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上， 應(yīng)未見對應(yīng)的斑點。
[0028] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的康腎口服液質(zhì)量控制方法，提供了鑒別藥物中 黃芪、淫羊藿和甘草的方法，并提供了高效液相色譜法測定藥物中，人參皂苷Rgl、Re成分 的含量，該質(zhì)量控制方法能更好地控制藥品的質(zhì)量，具有較強(qiáng)的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真 正體現(xiàn)藥品安全有效、質(zhì)量可控。
【附圖說明】
[0029] 圖1所示為本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的黃芪鑒別薄層色譜圖；
[0030] 圖2所示為本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的淫羊藿鑒別薄層色譜圖（紫外燈 365nm)；
[0031] 圖3所示為本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的甘草鑒別薄層色譜圖（紫外燈 365nm)；
[0032] 圖4所示為本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的人參皂苷Rgl和Re含量測定對照 品高效液相色譜圖；
[0033] 圖5所示為本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的人參皂苷Rgl和Re含量測定供試 品高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0034] 下文將結(jié)合具體附圖詳細(xì)描述本發(fā)明具體實施例。應(yīng)當(dāng)注意的是，下述實施例中 描述的技術(shù)特征或者技術(shù)特征的組合不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是孤立的，它們可以被相互組合從而達(dá) 到更好的技術(shù)效果。
[0035] 本發(fā)明的康腎口服液質(zhì)量控制方法，包括黃芩鑒別方法、淫羊藿鑒別方法、甘草鑒 別方法和人參皂苷含量測定方法。
[0036] 實施例1，黃芪的鑒別
[0037] 取康腎口服液5ml，水飽和正丁醇提取3次，每次20ml，合并提取液，氨試液洗滌2 次，每次30ml，合并氨試液洗滌液，用20ml水飽和正丁醇提取一次，合并正丁醇提取液，蒸 干，用l〇ml甲醇溶解殘澄，移至25ml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液；
[0038] 另取不含黃芪的陰性對照樣品，同法制備陰性對照樣品溶液；
[0039] 另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作為對照品溶液；
[0040] 照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以體積比為13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下層溶液為展開劑，展開，取出晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；
[0041] 結(jié)果如圖1本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的黃芪鑒別薄層色譜圖所示，圖中1 為黃芩甲苷對照品，2-4為供試品，5為陰性對照樣品。圖中供試品色譜中，在與對照品色譜 相應(yīng)的位置上，在日光下顯相同的棕褐色斑點。陰性對照樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng) 位置上，未見對應(yīng)的斑點。表明腎康口服液中含有黃芪。
[0042] 實施例2,淫羊藿的鑒別
[0043] 取康腎口服液10ml，加乙醚10ml振搖提取，棄去乙醚液，水層用水飽和的正丁醇 振搖提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液； [0044] 另取不含淫羊藿的陰性對照樣品，同法制備陰性對照樣品溶液；
[0045] 另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；
[0046] 照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2 y 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以 體積比為13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水于10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出 晾干，噴以三氯化鋁試液，l〇5°C加熱2分鐘，置紫外燈365nm下檢視；
[0047] 結(jié)果如圖2本發(fā)明康腎口服液質(zhì)量控制方法的淫羊藿鑒別薄層色譜圖（紫外燈 365nm)所示，圖中1為淫羊藿苷對照品，2-4為供試品，5為陰性對照樣品。圖中供試品色譜 中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相