施例并不對(duì)本技術(shù)做任何形式的 限定。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。
[0029] 本發(fā)明中采用的儀器和試劑信息如下： AFS-920雙道原子熒光光譜儀(北京吉天公司）;⑶-420數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海一恒科技 有限公司）；AnkeKA-1000型臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠）；精密酸度計(jì)(上海虹益儀 器儀表有限公司）；GRANTXB70制冰機(jī)。
[0030] 所用試劑均為優(yōu)級(jí)純或分析純，實(shí)驗(yàn)用水為三次蒸餾水，實(shí)驗(yàn)儀器均用5%硝酸溶 液浸泡過(guò)夜后，洗凈再使用。
[0031] 實(shí)施例1: 樣品消解： 準(zhǔn)確稱取〇. 5g樣品于50ml的三角錐形瓶中，加入15mlHN03-HC104(4:1)混和酸進(jìn)行 濕消化，當(dāng)溶液變?yōu)榍辶翢o(wú)色并伴有白煙時(shí)，再繼續(xù)加熱至燒干。待冷卻后，加入5mL6mol/ L的HCL，于電熱爐上加熱趕酸至約lmL，轉(zhuǎn)移到50ml帶塞離心管中，加三蒸水稀釋。
[0032] 雙濁點(diǎn)萃取操作富集硒： 取上述處理后的樣品溶液于50ml帶塞離心管中，依次加pH4. 0的HCl-NaAc緩沖溶 液lml、lg/LAPDC1. 2ml和5%TritonX-114溶液1.lml，用三蒸水定容至50ml，搖勻，置 于51°C恒溫水浴中，加熱15min，取出并趁熱離心lOmin(3500r/min)，再于冰水浴中冷卻 lOmin，棄去水相，加入16%HC1+ 20%H202 ( 1:1，V/V)混合溶液3ml，搖勻，再置于51°C恒溫水 浴中，加熱15min，取出并趁熱離心lOmin(3500r/min)，再于冰水浴中冷卻lOmin后取上層 溶液，按如下儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。
[0033] 儀器工作條件如下： 燈電流30mA，光電倍增管負(fù)高壓260V，原子化器高度9mm，載氣流量400mL/min，屏蔽氣 流量800mL/min，讀數(shù)方式為峰面積，進(jìn)樣體積：1.OmL。
[0034] 實(shí)施例2 參照實(shí)施例1的方法，不同的是S22中加入的HCl-NaAc緩沖溶液的pH為1. 0,用量為lml，lg/L的APDC0? 6ml和 5% (m/v)TritonX-114 溶液 0? 8ml，水浴溫度為 40°C。
[0035] 實(shí)施例3 參照實(shí)施例1的方法，不同的是S22中加入的HCl-NaAc緩沖溶液的pH為5. 0,用量為 3ml，lg/LAPDC1.4ml和 5%TritonX-114 溶液 1.21111，水浴溫度為70°(：。
[0036] 對(duì)比例1 參照實(shí)施例1的方法，不同的S22中加入的反萃取劑為16% (v/v)HCL溶液3ml。
[0037] 下表1為實(shí)施例1~3和對(duì)比例1樣品中所測(cè)定的硒的熒光響應(yīng)值： 表1不同條件測(cè)定樣品中硒的熒光強(qiáng)度
實(shí)施例4:方法線性范圍、精密度、檢出限考察 于實(shí)施例1選定的工作條件下，對(duì)50mL溶液進(jìn)行雙濁點(diǎn)萃取富集，同時(shí)采用傳統(tǒng)濁點(diǎn) 萃取法進(jìn)行比對(duì)，所述傳統(tǒng)濁點(diǎn)萃取法為：按照d-CPE過(guò)程中的第一次萃取過(guò)程，獲得膠體 富集相，加入antiform204 + 5%鹽酸混合溶液（l:l，v/v)200ML，用5%HCl(v/v)溶液定至 3.OmL，搖勾，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。按照d-CPE和CPE得到的分析特征參數(shù)如表2所 示。方法檢出限定義為硒空白溶液萃取后重復(fù)測(cè)定10次的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍與工作曲線斜率 的比值（3s/k);精密度試驗(yàn)：對(duì)6. 0yg/L硒標(biāo)準(zhǔn)溶液富集后分別平行測(cè)定6次計(jì)算相對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏差；富集倍數(shù)：富集后得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率與未富集時(shí)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值。
[0038] 從表2可知，雙濁點(diǎn)萃取可獲得較好的分析特征參數(shù)，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)的濁點(diǎn)萃取， 檢出限可達(dá)0. 023yg/L，富集倍數(shù)為11. 8。
[0039] 表2分析特性
實(shí)施例5:樣品測(cè)定及回收率實(shí)驗(yàn) 以所建立的方法測(cè)定了螺旋藻、海帶和茶葉中硒的含量，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。從表3 可知，三種物質(zhì)均有較滿意的加標(biāo)回收率，該方法可很好的應(yīng)用于食品中硒的測(cè)定。
[0040]表3樣品測(cè)定及加標(biāo)回收率（n=3)
本文建立了雙濁點(diǎn)萃取-原子熒光聯(lián)用測(cè)定食品中硒的新方法。與傳統(tǒng)的CPE比較，d-CPE克服了表面活性劑在氫化物發(fā)生過(guò)程帶來(lái)的負(fù)面影響，同時(shí)將Se-APDC螯合物轉(zhuǎn)變 為游離Se(IV)，極大地提高氫化物發(fā)生效率，首次實(shí)現(xiàn)d-CPE與HG-AFS的聯(lián)用。根據(jù)本發(fā) 明提供的方法，檢出限為〇. 16yg/L，RSD為4. 04%，方法準(zhǔn)確性和精密度高，檢測(cè)限低，尤其 適用于螺旋藻、海帶和茶葉等食品中痕量硒的測(cè)定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的硒的方法，其特征在于， 包括如下步驟：51. 濕法消解樣品；52. 將Sl步驟中所得消解物先進(jìn)行一次濁點(diǎn)萃取后，再采用HCl和H2O2的混合溶液 作為反萃取劑，進(jìn)行二次萃取富集硒；53. 采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定樣品中硒的含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中 的硒的方法，其特征在于，所述S2中為加入（8~24%) HCl和（5~25%)氏02的混合溶液，混合 體積比為1:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的 硒的方法，其特征在于，所述S2中為加入16%HC1和20%H 202的混合溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的 硒的方法，其特征在于，所述S2包括如下步驟：521. 取Sl步驟中所得消解樣品溶液于離心管中，依次加入pH為1.0~5.0的 HCL-NaAc緩沖溶液l~3ml、濃度為lg/L的吡咯啶二硫代氨基甲酸銨0. 6~1. 4ml和質(zhì)量體積 濃度為5%的Triton X-114溶液0. 8~1. 2 ml，用水定容，搖勻，加熱并趁熱離心，再于冰水 浴中冷卻，棄去水相，得萃取物；522. 將S21中所得萃取物加入HCl和氏02的混合溶液，搖勻，加熱，趁熱離心后，再于 冰水浴中冷卻后取上層溶液，得反萃取物； 所述S21中定容體積與樣品質(zhì)量比為100:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中 的硒的方法，其特征在于，所述S21中HCl-NaAc緩沖溶液的pH為4. 0，濃度為lg/L APDC L 2 ml和質(zhì)量體積濃度為5%Triton X-114溶液I. I ml。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的 硒的方法，其特征在于， 所述S21和S22中加熱溫度為30~70°C。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的 硒的方法，其特征在于，所述S21和S22中加熱溫度為51°C。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中 的硒的方法，其特征在于，所述S21和S22中加熱時(shí)間為15min，離心時(shí)間為lOmin，轉(zhuǎn)速為 3500r/min。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的 硒的方法，其特征在于，所述Sl包括如下步驟：511. 稱取樣品，加入混酸進(jìn)行消解，當(dāng)溶液變?yōu)榍辶翢o(wú)色并伴有白煙時(shí)，再繼續(xù)加熱 至燒干；512. 將Sll中所得消解物冷卻后，加入濃鹽酸繼續(xù)消解，趕酸至Iml時(shí)，停止消解；513. 待S12中消解物冷卻后，轉(zhuǎn)移到離心管中，并加水進(jìn)行稀釋； 所述Sll中樣品與混酸的固液比g/ml為1:30~40 ; 所述S12中濃鹽酸濃度為6mol/L，樣品與濃鹽酸的質(zhì)量體積比為1:10~15。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中 的硒的方法，其特征在于，所述S3中儀器參數(shù)如下： 燈電流30mA，光電倍增管負(fù)高壓260V，原子化器高度9mm，載氣流量400mL/min，屏蔽氣 流量800mL/min，讀數(shù)方式為峰面積，進(jìn)樣體積：1. OmL。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種雙濁點(diǎn)萃取-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定食品中的硒的方法，包括如下步驟：S1.濕法消解樣品；S2.將S1步驟中所得消解物先進(jìn)行一次濁點(diǎn)萃取后，再采用HCl和H2O2的混合溶液作為反萃取劑，進(jìn)行二次萃取富集硒；S3.采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定樣品中硒的含量。本發(fā)明首次實(shí)現(xiàn)雙濁點(diǎn)萃取與HG-AFS的聯(lián)用應(yīng)用于食品中硒的檢測(cè)，根據(jù)本發(fā)明提供的方法，檢出限為0.16μg/L，RSD為4.04%，方法準(zhǔn)確性和精密度高，檢測(cè)限低，尤其適用于螺旋藻、海帶和茶葉等食品中痕量硒的測(cè)定。
【IPC分類】G01N21/64, G01N33/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105021781
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510479778
【發(fā)明人】王梅, 楊冰儀, 鐘怡洲, 王美霞, 張澤華
【申請(qǐng)人】廣東藥學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2015年8月7日