甲基氫氧化銨、三 甲基癸基氫氧化銨、四甲基氫氧化銨、四乙基氫氧化銨或具有龐大基團(tuán)（例如抗衡離子）的 任何其他氫氧化物，優(yōu)選四丁基氫氧化銨。
[0072] 在步驟b)中，可使用過渡金屬的金屬鹽或其組合。金屬鹽的非限制性實(shí)例是 過渡金屬的硝酸鹽、硫酸鹽、亞硫酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、磷酸鹽、氫氧化物、氰酸 鹽、羧酸鹽、硫代蘋果酸鹽、硫代葡萄糖酸鹽（thioglucoSate)。作為單金屬鹽使用或 與其他金屬鹽組合使用的這些金屬鹽的實(shí)例是AgN03、CH3C00Ag、Ag3As0 4、AgBr03、AgBr、 Ag2CO3' AgClO3' AgCl、AgCrO4' AgOCN、AgI03、AgI、Ag20、AgClO4' Ag3PO4' Ag2SOzp Ag2S、Ag2S03、 CuSO4^ CuCl2^ CuBr2^ CuI2^ Cu2S^ CuSCN^ CuCN^ CuCO3^ Cu2O^ Cu(OH)2^ Cu(NO3)2^ Cu(ClO4)2^ Cu(HCO2)2或Cu(C02CH3) 2。組合使用的金金屬鹽的非限制性實(shí)例是HAuC14、AuCl、AuC13、 HAuC14、HAuCl4 ·水溶液、KAuC14、LiAuCl4、（CH3)2SAuCU C3H9AuC1P、C6H15AuC1P、C 1sH15AuC1P、 CsH11AuClP' C5H5AuCl3N' (C4H9)3PAuCU C27H36AuClN2' C21H12AuClF9P' C20H27AuClP' C33H49AuClP' C42H63AuClO3P'C21H24AuC1N 2、C35H49AuF6NO4PS 2S (C20H15AuF6NO4PS2) · 2C7Hs。
[0073] 在用于使步驟c)中獲得的混合物還原的步驟c)中使用的還原體系或還原劑的非 限制實(shí)例可以是^^^14、〇184!1、1^41!14、隊(duì)!14或511(：1 2以及較溫和的還原劑例如次磷酸鈉、胺、 糖、有機(jī)酸、聚合物（例如聚乙烯吡咯烷酮）、UV-VIS輻射、超聲波和光還原。
[0074] 在本發(fā)明方法的步驟b)和c)之后，形成"包含AQC的納米微脂囊"。這些"包含 AQC的納米微脂囊"包含在其內(nèi)腔內(nèi)部的（即包囊化的）至少兩個(gè)不同尺寸的AQC( 即，Mn和 Μ' n'）。
[0075] 這些"包含AQC的納米微脂囊"的一個(gè)具體實(shí)例在Gaillard，C.，Journal of Colloid and Interface Science，2209, 337, 2,610-613 中進(jìn)行了描述，其描述了這些納米 系統(tǒng)內(nèi)部的金顆粒合成。
[0076] 分解納米微脂囊的步驟是此前合成的納米微脂囊的去穩(wěn)定過程。該步驟可通過不 同的機(jī)制來實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，破壞納米微脂囊或使其去穩(wěn)定的步驟通過超速 離心來實(shí)現(xiàn)，但是本領(lǐng)域中已知的用于破壞納米微脂囊的任何其他方式也是可用的，例如 熱處理或pH變化。電荷轉(zhuǎn)移機(jī)制發(fā)生在納米微脂囊的分解步驟過程中。因此，納米微囊體 被去穩(wěn)定并形成通式（I)的電荷轉(zhuǎn)移復(fù)合物。
[0077] 還可通過破壞除納米微脂囊之外的其他納米系統(tǒng)來獲得本發(fā)明中使用的電荷轉(zhuǎn) 移復(fù)合物，所述其他納米系統(tǒng)在其內(nèi)腔中包含至少兩個(gè)不同尺寸的AQC(即，MJP Μ' n，）。
[0078] 術(shù)語"納米系統(tǒng)"指通過一層或兩層兩親分子形成的球樣納米超分子結(jié)構(gòu)，其中所 述兩親分子在納米系統(tǒng)的內(nèi)部形成納米腔。具體地，納米系統(tǒng)的外徑為約等于或小于20nm， 優(yōu)選等于或小于18nm，并且更優(yōu)選等于或小于15nm。納米系統(tǒng)的內(nèi)部包含至少一個(gè)內(nèi)徑小 于或等于l〇nm，優(yōu)選小于或等于約5nm，更優(yōu)選0. 8nm至4nm的納米腔。在一個(gè)具體實(shí)施方 案中，納米腔的內(nèi)徑為約I. 5nm至I. 8nm。納米系統(tǒng)的非限制性實(shí)例是納米微脂囊，但還可 以是膠束、反膠束、納米乳劑或微乳劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，納米系統(tǒng)是納米微脂囊。
[0079] 表述"球樣"指其在形狀上具有與球形類似的立體幾何圖形。
[0080] 形成納米系統(tǒng)的兩親分子可以是相同的或不同的，優(yōu)選兩種不同類型的分子，并 且每種分子同時(shí)具備親水和親脂特性。
[0081] 親脂特性由一般是烴部分的基團(tuán)給予，例如形式CH3-(CH2)n-或-(CH 2)η-(30 > η > 2,優(yōu)選20 > η > 10)的脂肪鏈。
[0082] 親水特性由親水基團(tuán)給予。親水基團(tuán)可以是帶電基團(tuán)或極性不帶電基團(tuán)。帶電基 團(tuán)選自陰離子基團(tuán)，優(yōu)選選自由羧酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽和磷酸鹽形成的基團(tuán)。極性不帶電 基團(tuán)選自由-OH、-SH、-ΝΗ2、-ΝΗ-、-Cl、-PH3、-SR、-OR、-NR 2、-NHR 和-NR-形成的基團(tuán)，其中 R表示短烴鏈（C1-C4)有機(jī)烷基基團(tuán)，優(yōu)選甲基、乙基或丙基。
[0083] 兩親分子可具有一個(gè)脂肪族CH3-(CH2)n-鏈和一個(gè)與其結(jié)合的親水基團(tuán)或兩個(gè)分 別結(jié)合在脂肪族-(CH2) n_鏈的每個(gè)末端的親水基團(tuán)。
[0084] 術(shù)語"膠束"指兩親分子聚集體。在水性介質(zhì)中，分子聚集體的親脂結(jié)構(gòu)域定向于 膠束的內(nèi)部，而親水結(jié)構(gòu)域與介質(zhì)接觸。在"反膠束"中，分子是這樣組織的，使得親脂區(qū)暴 露于外部而親水區(qū)朝內(nèi)部。在現(xiàn)有技術(shù)中，也使用術(shù)語"微乳劑"來指代"反膠束"，即"微乳 劑"是"反膠束"的一個(gè)具體實(shí)施方案。術(shù)語"微乳劑"指由納米尺寸的液滴形成的具有至少 三種組分（水、一般稱為油-的有機(jī)溶劑和兩親化合物）的單相熱力學(xué)穩(wěn)定系統(tǒng)。盡管不是 限制性的，但是使用其中水滴分散在有機(jī)介質(zhì)中的油包水微乳劑是本發(fā)明特別關(guān)注的。在 這些油包水微乳劑中，使用涉及在水滴內(nèi)部包含丙烯酸單體（例如丙烯酰胺或1，6_己二醇 二丙烯酸酯）之微乳劑的聚合微乳劑由于其穩(wěn)定性而也特別引人感興趣，所述聚合微乳劑 通過導(dǎo)入一些引發(fā)劑（例如自由基光引發(fā)劑）進(jìn)行聚合。因此，微乳劑液滴可變得更具抗 性。
[0085] 術(shù)語"納米乳劑"指具有至少三種組分（水、有機(jī)溶劑和穩(wěn)定化合物）的兩相熱力 學(xué)不穩(wěn)定系統(tǒng)，但其通過化學(xué)或物理處理而暫時(shí)穩(wěn)定并且由納米液滴形成。納米液滴的形 成是區(qū)分納米乳劑與本領(lǐng)域中已知乳劑的唯一事件，因此術(shù)語"納米乳劑"一般指其中液滴 是納米尺寸的乳劑。
[0086] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，納米系統(tǒng)選自由納米微脂囊、膠束和反膠束形成的組，優(yōu) 選地，納米系統(tǒng)是納米微脂囊。
[0087] 在其中納米系統(tǒng)是反膠束的具體實(shí)施方案中，反膠束包含至少兩種不同的表面活 性劑，其中至少一種表面活性劑包含硫醇基或硫醚基作為其極性基團(tuán)。在一個(gè)更具體的實(shí) 施方案中，所述至少兩種表面活性劑是醇乙氧基化物和ω-巰基酸。
[0088] 納米系統(tǒng)的內(nèi)腔是封閉的。如上所述，所述內(nèi)腔的內(nèi)徑小于或等于10nm，優(yōu)選小于 或等于約5nm，并且更優(yōu)選地所述內(nèi)腔的內(nèi)徑為約0. 8nm至4nm。在一個(gè)具體實(shí)施方案中， 該納米內(nèi)腔的直徑是約I. 5nm至I. 8nm〇
[0089] 可通過凝膠模型（Jellium model)由近似值來確定簇激發(fā)和發(fā)射波長的近似估值 (參見例如 J. Calvo 等，Encyclopedia of Nanotechnology，由 B. Bhushan 編輯，Springer Verlag，2011)。該模型以相當(dāng)接近的方式預(yù)測簇的禁止能帶隙，并由此預(yù)測其發(fā)射帶隙的 位置?？紤]到特定尺寸的簇中的斯托克斯位移（Stokes shift)是約50nm至100nm，簇的激 發(fā)帶隙可繼而由發(fā)射帶隙預(yù)測。下表（表1)示出了根據(jù)該模式之針對Au或Ag的AQC的 理論數(shù)據(jù)，即已借助所述凝膠模型計(jì)算出Au或Ag的AQC的近似激發(fā)波長Xexc.和發(fā)射波 長λ em.，其中誤差為±50nm :Eem = EF/N1/3;其中Eem =發(fā)射能量；N = AQC中原子的數(shù)目； 并且EF =費(fèi)密能級（Fermi level)，金和銀的費(fèi)密能級同為約5. 5eV。
[0090]

[0091] 在實(shí)踐中，當(dāng)使納米系統(tǒng)對于將納米系統(tǒng)內(nèi)腔中的OH和SH基團(tuán)替換成其他配體 有反應(yīng)時(shí)，這些數(shù)值還可不同。在不受限制的情況下，待替換的配體可選自-nh2、-nh-、-ci、 -PH3、-SR、-OR、-NR2、-NHR、-NR-，其中R表示能夠形成納米微脂囊的短鏈有機(jī)基團(tuán)。
[0092] 換言之，用于獲得特定激發(fā)和發(fā)射波長的簇類型可由上表決定。因此，例如為了獲 得激發(fā)波長為300nm、發(fā)射波長為600nm并且斯托克斯位移為300nm的系統(tǒng)，應(yīng)選擇以下簇 尺寸：
[0093] -激發(fā)簇（"供體"，Mn) :M3/M5，
[0094] -發(fā)射簇（"受體"，Μ' n'）：M' 12/M' 20。
[0095] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，術(shù)語"過渡金屬的組合"指具有至少兩種不同過渡金屬原子的 AQC，也指單過渡金屬AQC的存在，在不同于第一過渡金屬AQC的另一過渡金屬AQC存在的 情況下使得至少兩個(gè)不同尺寸的AQC可以是具有相同過渡金屬的AQC、具有不同過渡金屬 的AQC或具有相同或不同雙金屬組合的AQC。
[0096] 術(shù)語"檢測"及其變化形式涵蓋定量測量以及定性測量。
[0097] 本文中使用的"熒光原位雜交"或"FISH"指用于通過使用標(biāo)記的核酸探針來檢測 或定位染色體上的特定DNA序列的方法，所述標(biāo)記的核酸探針與染色體上的特定DNA序列 雜交。
[0098] "固定化"指與例如裝置的表面直接或間接結(jié)合，包括通過共價(jià)結(jié)合或非共價(jià)結(jié)合 (例如，氫鍵、離子相互作用、范德華力或疏水相互作用）的連接。"翻譯后修飾"指在蛋白 質(zhì)翻譯后對其的化學(xué)修飾。這包括但不局限于添加官能團(tuán)（例如，磷酸化、糖基化、乙?；?、 烷基化、甲基化、甲酰化、氧化或生物素化）、添加蛋白質(zhì)或肽（例如，泛素化）、改變氨基酸 的化學(xué)性質(zhì)（例如，脫氨基或脫甲基化）和結(jié)構(gòu)改變（例如二硫橋或蛋白水解切割）。
[0099] 本文中使用的術(shù)語"免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC) "也稱為"免疫 細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry，ICC) "在應(yīng)用于細(xì)胞時(shí)指診斷病理學(xué)的工具，其中單克隆 抗體的組可用于差別診斷未分化的贅生物（例如，用于區(qū)分淋巴瘤、癌和肉瘤）以揭示對某 些腫瘤類型和其他疾病具有特異性的標(biāo)志物、診斷和分型惡性淋巴瘤以及證明病毒抗原、 腫瘤蛋白、激素受體和增殖相關(guān)核蛋白的存在。
[0100] 本文中使用的術(shù)語"試劑盒"指包含用于實(shí)施本發(fā)明之方法所必需的不同試劑的 產(chǎn)品，這些試劑是經(jīng)包裝的以允許其運(yùn)輸和儲存。適用于包裝試劑盒組分的材料包括晶體、 塑料（例如聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯）、瓶子、小瓶、紙或封套。
[0101] 字母"Π "和"η'"指每個(gè)AQC中的過渡金屬原子的數(shù)目。如上文所述，η小于η'（η < η'）。優(yōu)選地，η與η'之間的最小差異是5個(gè)金屬原子。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，η與 η'之間的差異是5至50個(gè)原子，在一個(gè)具體實(shí)施方案中，η與η'之間的差異為5至25個(gè) 原子，并且在另一個(gè)實(shí)施方案中，η與η'之間的差異是5至15。
[0102] 可與電荷轉(zhuǎn)移復(fù)合物連接的"有機(jī)配體"是至少兩種不同類型的有機(jī)配體，并且優(yōu) 選地所述至少兩種不同類型的有機(jī)配體選自ω-羥基酸（HO-(CH2)ni-COOH)配體和ω-巰基 酸（HS- (CH2) p-C00H)配體，其中m和ρ的值是2至30,優(yōu)選地m和ρ的值是10至20。在一 個(gè)具體實(shí)施方案中，m和p的值是15。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，m和p的值是11。
[0103] m和p的值可以是不同的或相同的。在m和p不同的情況下，它們之間的差異小 于6個(gè)碳，優(yōu)選地，m和p的差值是1至4。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，m和p是相同的。其中 所述至少兩種不同類型的有機(jī)配體選自ω-羥基酸（HO-(CH2)ni-COOH)配體和ω-巰基酸 (HS-(CH2)p-COOH)配體，酸基團(tuán)-COOH(或C00-，如果使用相應(yīng)酸的鹽的話）定向于納米化 合物的外表面，而-OH和-SH基團(tuán)定向于內(nèi)部，即朝向電離的AQC (Μη+和Μ' η，-)，與電離的 AQC相結(jié)合、連接或配位。
[0104] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，可與電荷轉(zhuǎn)移復(fù)合物連接的"有機(jī)配體"具有除羥基-OH或 巰基-SH 基團(tuán)之外的其他官能團(tuán)，例如-ΝΗ2、-ΝΗ-、-Cl、-PH3、-SR、-OR、-NR 2、-NHR、-NR-， 其中R表示能夠與AQC或電離的AQC(Mn+和Μ' n，_)結(jié)合、連接或配位的短烴鏈有機(jī)基團(tuán) (C「C4)。還可將ω-羥基酸（HO-(CH丄-C00H)配體和ω-巰基酸（HS-(CH2) p-COOH)配體的 羥基-OH或巰基-SH基團(tuán)替換成上文提及的也與AQC的金屬相互作用的這些其他基團(tuán)。
[0105] 本文中使用的"核酸探針"指識別染色體上的特定DNA序列并與其雜交的核酸（例 如 DNA、RNA、PNA 等）序列。
[0106] 術(shù)語"間隔基團(tuán)"或"間隔基"指將兩個(gè)或更多個(gè)亞結(jié)構(gòu)連接的化學(xué)結(jié)構(gòu)的一部分。 這些間隔基團(tuán)將會(huì)在本申請的下文中列舉。間隔基團(tuán)的原子和間隔基團(tuán)內(nèi)的鏈的原子自身 通過化學(xué)鍵連接。其中，優(yōu)選的間隔基團(tuán)是直鏈或支鏈的、飽和或不飽和的碳鏈。這些碳鏈 還可在鏈內(nèi)或者在鏈的末端包含一個(gè)或更多個(gè)雜原子。"雜原子"指除不同于碳的原子，其 選自氧、氮和硫。間隔基團(tuán)還可包含環(huán)狀基團(tuán)或芳香基團(tuán)作為鏈的一部分或者作為鏈中一 個(gè)原子的取代基。
[0107] 本文中使用的術(shù)語"多核苷酸"可與脫氧核糖核酸互換使用，指如本領(lǐng)域中所理解 的以其多種不同形式的脫氧核糖核酸，例如基因組DNA、cDNA、分離的核酸分子、載體DNA和 染色體DNA。"核酸"指任何形式的DNA或RNA。分離的核酸分子的實(shí)例包括，但不局限于， 包含在載體中的重組DNA分子、維持在異源宿主細(xì)胞中的重組DNA分子、部分或基本純化的 核酸分子和合成DNA分子。一般而言，"分離的"核酸不含在該核酸所來源于之生物體的基 因組DNA中天然位于該核酸側(cè)翼的序列（即，位于該核酸5'端和3'端的序列）。此外，"分 離的"核酸分子（例如cDNA分子）當(dāng)由重組技術(shù)產(chǎn)生時(shí)一般基本不含其他細(xì)胞物質(zhì)或培養(yǎng) 基或者當(dāng)化學(xué)合成時(shí)一般基本不含化學(xué)前體或其他化學(xué)物質(zhì)。
[0108] 術(shù)語"多肽"、"肽"和"蛋白質(zhì)"在本文中可互換使用，指任意長度的氨基酸聚合 物。所述聚合物可以是線性的、環(huán)狀的或分支的。所述聚合物可包含經(jīng)修飾的氨基酸，并 且其可被非氨基酸間斷（interrupted)。該術(shù)語還涵蓋已經(jīng)修飾的氨基酸聚合物，例如 經(jīng)由磺化、糖基化、脂質(zhì)化、乙?；?、磷酸化、碘化、甲基化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異 戊烯化、外消旋化、硒化、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA介導(dǎo)的蛋白質(zhì)氨基酸加成例如精氨?；?、泛素化或任何 其他操作，例如與標(biāo)記組分綴合。本文中使用的術(shù)語"氨基酸"指天然的和/或非天然的 或者合成的氨基酸，包括甘氨酸和D或L兩種光學(xué)異構(gòu)體，以及氨基酸類似物和肽模擬物 (peptidomimetic)〇
[0109] 本文中使用的術(shù)語"保護(hù)基團(tuán)"指當(dāng)與分子屏蔽物中的反應(yīng)基團(tuán)連接時(shí)降低或阻 止反應(yīng)性的原子組。
[0110] 本文中使用的術(shù)語"反應(yīng)基團(tuán)"指能夠與另一化學(xué)基團(tuán)反應(yīng)以形成共價(jià)鍵的基團(tuán)， 即在合適的反應(yīng)條件下共價(jià)反應(yīng)的基團(tuán)，并且一般表示針對另一物質(zhì)的連接點(diǎn)。反應(yīng)基團(tuán) 一般包括親核基團(tuán)、親電子基團(tuán)和光激活基團(tuán)。示例性的反應(yīng)基團(tuán)包括，但不局限于，烯烴、 乙炔、醇、酸、醚、氧化物、??化物、醛、酮、羧酸、酯、酰胺、氰酸鹽/酯、異氰酸鹽/酯、硫氰酸 鹽/酯、異硫氰酸鹽/酯、胺、肼、腙、酰肼、重氮、重鹽、硝石（nitre)、腈、硫醇、硫化物、二 硫化物、亞砜、砜、磺酸、硫酸、縮醛、縮酮、酐、硫酸鹽/酯、次磺酸異腈、脒、二酰亞胺、亞氨 酸鹽/酯、硝酮、羥胺、肟、異羥肟酸、硫代異羥肟酸、丙二烯、原酸酯、亞硫酸鹽/酯、烯胺、 炔胺、脲、假脲、氨基脲、碳二亞胺、氨基甲酸鹽/酯、亞胺、疊氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮 化合物和亞硝基化合物。反應(yīng)性官能團(tuán)還包括用于制備生物綴合物的那些，例如N-羥基 琥珀酰亞胺酯、馬來酰亞胺等。制備這些官能團(tuán)中的每一種的方法在本領(lǐng)域中是公知的并 且其出于特定目的的應(yīng)用或改變在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)（參見，例如，Sandier 和 Karo,編輯，Organic Functional Group Preparations. Academic Press，San Diego， 1989)〇
[0111] 本文中使用的術(shù)語"樣品"以其最廣泛的含義使用并且指包含待檢測的生物分子 的樣品。在一些實(shí)施方案中，樣品是環(huán)境樣品，例如土壤、水或空氣；或者來自工業(yè)來源，例 如取自污水流、水源、供應(yīng)線或生產(chǎn)批次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，樣品是生物樣品。
[0112] 本發(fā)明中使用的表達(dá)"特異性結(jié)合"指第一分子與第二分子能夠通過兩個(gè)分子的 三維結(jié)構(gòu)之間存在的互補(bǔ)性以相對于非特異性結(jié)合顯著更高的親和力特異性結(jié)合，使得所 述第一和第二分子之間的結(jié)合優(yōu)先發(fā)生在任意所述分子與反應(yīng)混合物中存在的其他分子 結(jié)合之前。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)由所述結(jié)合產(chǎn)生的復(fù)合物具有以下解離常數(shù)（KD)時(shí)，兩個(gè)分子的 結(jié)合中存在高親和力：小于10 6M、小于10 7M、小于10 SM、小于10 9M、小于10 WM、小于10 nM、 小于10 12M、小于10 13M、小于10 14M或小于10 15M。
[0113] 本文中使用的術(shù)語"鏈霉親和素"對應(yīng)于來自阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii)的蛋白質(zhì)（在GenBank中的登錄號CAA00084. 1)，以及以與親和素相同之方式定 義的鏈霉親和素的直向同源物（orthologue)、同源物和片段。
[0114] 本文中定義的"嚴(yán)格條件"或"高嚴(yán)格性條件"通常為：⑴采用低離子強(qiáng)度和高 溫進(jìn)行洗滌，例如〇. 015M氯化鈉/0. 0015M檸檬酸鈉/0. 1 %十二烷基硫酸鈉，50°C ; (2)在 雜交期間采用變性劑，例如甲酰胺，例如50% (v/v)甲酰胺與0.1%牛血清白蛋白/0.1% Ficoll/0. 1%聚乙烯吡咯烷酮/50mM pH 6. 5磷酸鈉緩沖液以及750mM氯化鈉、75mM檸檬酸 鈉，42°(：;或（3)采用50%甲酰胺、5\33(：(0.751恥(：1，0.0751檸檬酸鈉）、501111磷酸鈉（?!1 6. 8)、0. 1%焦磷酸鈉、5XDenhardt溶液、超聲波處理過的鮭精DNA(50μg/ml)、0. 1% SDS 和10%硫酸葡聚糖，42°C ;在0. 2XSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉）和50%甲酰胺中在42°C下洗 滌，之后在55°C下用由含有EDTA的0.1 X SSC組成的高嚴(yán)格性洗滌劑洗滌。中等嚴(yán)格條件 可按照 Sambrook 等，Molecular Cloning ：A Laboratory Manual, New York ：Cold Spring Harbor Press，1989所述進(jìn)行鑒定并且可包括使用嚴(yán)格性低于上文所述的那些的洗滌溶液 和雜交條件（例如，溫度、離子強(qiáng)度和％ SDS)。中等嚴(yán)格條件的一個(gè)實(shí)例是在包含以下的 溶液中在37°C下孵育過夜：20 %甲酰胺、5 X SSC (150mM NaCl，15mM檸檬酸三鈉）、50mM磷 酸鈉 （pH 7. 6)、5XDenhardt溶液、10%硫酸葡聚糖和20mg/ml變性的剪切鮭精DNA，之后 在IXSSC中在約37°C至50°C下洗滌濾液。技術(shù)人員將知道如何根據(jù)需要調(diào)節(jié)溫度、離子 強(qiáng)度等以適應(yīng)諸如探針長度等因素。在一些實(shí)施方案中，用作用于檢測生物分子的結(jié)合伴 侶的核苷酸可為任意長度，