一種用液相色譜法分離鹽酸洛拉曲克及有關(guān)物質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)的分離方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸洛拉曲克是一種新的胸苷酸合成酶抑制劑（thymidylate synthase Inhibitor, TSI)，又名鹽酸諾拉曲塞，最早由美國的Agouron制藥公司開發(fā)，是全新的非經(jīng) 典型的胸苷酸合成酶抑制劑。國外尚未上市。
[0003] 作為國家一類抗癌新藥--注射用鹽酸洛拉曲克，是新一代抗腫瘤藥物，為非經(jīng) 典型結(jié)構(gòu)葉酸類胸苷酸合成酶抑制劑，屬于細胞毒類抗腫瘤藥，能夠干擾腫瘤細胞DNA合 成，阻止細胞分裂增殖而發(fā)揮抗癌作用。該藥具有水溶性好，在體內(nèi)不易蓄積，不易導(dǎo)致腎 毒性，毒副反應(yīng)輕且恢復(fù)快，不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點。
[0004] 鹽酸洛拉曲克的化學(xué)名稱為：2_氨基-3, 4-二氫-6-甲基-4-酮-5-(4-吡啶巰 基）-喹唑啉二鹽酸鹽；分子式為=C14H12N 4OS · 2HC1 ;結(jié)構(gòu)式為：
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[0006] 在藥物的制備和丨；_'|丁<1^_/丨'土丁，[?3^/''」1=|;<^丄^^^」13!1;工^'」雜質(zhì)和降解雜質(zhì)進打 監(jiān)測。由于這類雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)一般與活性成分類似或具淵源關(guān)系，故又稱為有關(guān)物質(zhì)。因 此，實現(xiàn)鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)的分離，在鹽酸洛拉曲克的合成和制劑過程的質(zhì)量控 制方面具有重要的現(xiàn)實意義。
[0007] 專利文獻CN200510084232. 0公開了鹽酸洛拉曲克的合成工藝。通過對鹽酸洛拉 曲克的合成路線進行分析可知，需控制的雜質(zhì)體系包括：合成路線的起始物料、中間體、原 料藥生產(chǎn)過程中可能產(chǎn)生的工藝副產(chǎn)物雜質(zhì)及其降解雜質(zhì)，共計12個雜質(zhì)。相應(yīng)雜質(zhì)命名 為雜質(zhì)I -雜質(zhì)XL結(jié)構(gòu)式分別為：
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[0009] 鹽酸洛拉曲克及其制劑目前暫無國家標準，通過文獻檢索，對于鹽酸洛拉曲克有 關(guān)物質(zhì)檢測的藥物分析方法目前也暫無報道，僅有一篇文獻（Shihong Li等，Journal of Pharmaceutical Science&Technology, 1997)中，提及了檢測鹽酸洛拉曲克降解產(chǎn)物的一 個液相色譜分析方法，但是對該方法進行檢測，發(fā)現(xiàn)無法將鹽酸洛拉曲克與雜質(zhì)有效分離， 導(dǎo)致最終產(chǎn)品純度低。
[0010] 而有關(guān)物質(zhì)是藥品質(zhì)量控制的重要指標，關(guān)系到藥物可能產(chǎn)生的不良反應(yīng)。因此， 發(fā)明一種科學(xué)、有效的鹽酸洛拉曲克及其制劑的檢測方法勢在必行。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)的分離方法。
[0012] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種鹽酸洛拉曲克原料藥或其制劑的純度鑒定方法， 以實現(xiàn)鹽酸洛拉曲克原料藥或其制劑的質(zhì)量控制。
[0013] 本發(fā)明提供了 一種用液相色譜法分離鹽酸洛拉曲克及有關(guān)物質(zhì)的方法，所述液相 色譜法為高效液相色譜法。
[0014] 所述高效液相色譜法包括以下色譜條件：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠； 流動相為酸性水相-有機相；流動相洗脫方式為線性梯度洗脫；檢測方法為紫外分光光度 法；檢測器為紫外檢測器。
[0015] 具體的，所述高效液相色譜法包括以下色譜條件：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵 合硅膠；流動相為酸性水相-有機相；流動相洗脫方式為線性洗脫；流動相流速為1.0 ml/ min ;進樣體積為20 μ 1 ;柱溫為30°C ;檢測方法為紫外分光光度法；檢測器為紫外檢測器。
[0016] 上述方法中：
[0017] 所述鹽酸洛拉曲克為洛拉曲克堿、鹽酸洛拉曲克、鹽酸洛拉曲克水合物、鹽酸洛拉 曲克中間體、原料藥或制劑；所述有關(guān)物質(zhì)為雜質(zhì)I~雜質(zhì)ΧΠ 。
[0018] 所述酸性水相中的酸選用磷酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸，優(yōu)選為甲酸或三氟乙酸， 濃度為0. 05~0. 5%，優(yōu)選為0. 1%。
[0019] 所述有機相選用甲醇、異丙醇或乙腈，優(yōu)選為乙腈。
[0020] 所述流動相線性梯度洗脫條件為：洗脫時間為25-50min，酸性水相與有機相的起 始體積比為90:10-97:3,酸性水相與有機相的終止體積比為20:80-50:50。
[0021] 優(yōu)選地，流動相線性梯度洗脫條件為：洗脫時間為30min，酸性水相與有機相的起 始體積比為95:5,酸性水相與有機相的終止體積比為40:60。
[0022] 所述紫外檢測器的檢測波長為220-270nm，優(yōu)選為254nm。
[0023] 上述高效液相色譜法還包括空白對照溶液、定位對照溶液、混合樣品溶液以及供 試品溶液的配制方法，其中：
[0024] 空白對照溶液的配制方法為：將流動相A與流動相B按照流動相線性洗脫的起始 體積組成混合物，作為空白對照溶液；
[0025] 定位對照溶液的配制方法為：稱取鹽酸洛拉曲克標準品20mg及各相關(guān)物質(zhì)標準 品各5mg，分別置于50ml容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定位對照溶液；
[0026] 混合樣品溶液的配制方法為：量取各定位對照溶液1ml，混合，搖勻，作為混合樣 品?谷液；
[0027] 供試品溶液的配制方法為：取樣品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成含鹽酸 洛拉曲克〇. 5mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液；
[0028] 上述溶液配制中所用溶劑為流動相A與流動相B按照高效液相色譜法檢測時流動 相線性洗脫的起始體積比配制的混合液。
[0029] 本發(fā)明提供的用液相色譜法分離鹽酸洛拉曲克及有關(guān)物質(zhì)的方法，具體地，包括 以下步驟：
[0030] 1)按照以下參數(shù)設(shè)置色譜條件：
[0031] 色譜柱：色譜柱填料為粒徑5μπι的十八烷基硅烷鍵合硅膠，色譜柱規(guī)格為 150mmX4. 6mm ；
[0032] 流動相：流動相A為0.1 %三氟乙酸水溶液，流動相B為乙腈，按以下梯度進行線 性洗脫：
[0033]
[0034] 流動相流速：1.0ml/min ;
[0035] 進樣體積：20μ1;
[0036] 柱溫：30°C ;
[0037] 檢測器：紫外檢測器；
[0038] 檢測波長：254nm。
[0039] 2)各種溶液的配制：
[0040] 按照流動相A :流動相B的體積比為95 :5組成的混合物，制備成溶劑，備用；
[0041] 空白對照溶液的配制：量取上述溶劑，作為空白對照溶液；
[0042] 標準品溶液的配制：稱取鹽酸洛拉曲克標準品20mg及各相關(guān)物質(zhì)標準品各5mg， 分別置于50ml容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為定位對照溶液；
[0043] 供試品溶液的配制：取樣品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成含鹽酸洛拉曲 克0. 5mg/ml的溶液，搖勻，作為供試品溶液，所述樣品為原料或制劑；
[0044] 3)檢測：將上述空白對照溶液、標準品溶液以及供試品溶液，分別注入液相色譜 儀，按步驟1)設(shè)置的色譜條件進行分離，記錄色譜圖，讀取各組分保留時間，并計算各相關(guān) 參數(shù)。
[0045] 鹽酸洛拉曲克及有關(guān)物質(zhì)的分離效果判定標準為：各有關(guān)物質(zhì)與鹽酸洛拉曲克的 分離度應(yīng)不低于1. 5,鹽酸洛拉曲克峰拖尾因子應(yīng)不大于2. 5,理論板數(shù)按鹽酸洛拉曲克峰 計算應(yīng)不小于3000。
[0046] 鹽酸洛拉曲克供試品的質(zhì)量控制標準為：已知單雜質(zhì)含量不得大于0. 1%，未知 單雜質(zhì)含量不得大于〇. 1 %，雜質(zhì)總含量不得大于〇. 5 %。
[0047] 本發(fā)明提供的鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)的分離方法具有以下優(yōu)點：
[0048] 1、本發(fā)明提供的方法可應(yīng)用于鹽酸洛拉曲克各有關(guān)物質(zhì)個體純度的檢測。由于鹽 酸洛拉曲克的各有關(guān)物質(zhì)具有與鹽酸洛拉曲克相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)母核，結(jié)構(gòu)非常相似，各有 關(guān)物質(zhì)的檢測方法與酸洛拉曲克的檢測方法相同。
[0049] 2、本發(fā)明提供的方法，可以完成針對鹽酸洛拉曲克及其12個有關(guān)物質(zhì)的有效分 離，可以對鹽酸洛拉曲克可能存在的有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)進行全面的檢測及控制，也可用于鹽酸 洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)的準確定量。采用現(xiàn)有技術(shù)的方法，鹽酸洛拉曲克的共12個有關(guān)物 質(zhì)中僅有6個可以出峰，且雜質(zhì)VIII的色譜峰與鹽酸洛拉曲克的色譜峰重合，無法分離， 即在現(xiàn)有技術(shù)的方法下，無法實現(xiàn)對鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)的全面檢測，并且對鹽酸 洛拉曲克的定量也將是不準確的。
[0050] 3、本發(fā)明所述的分離方法，采用通用型色譜柱，方法簡單，準確，方便操作。
【附圖說明】
[0051] 圖1為實驗例1所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0052] 圖2為實施例1所得空白溶劑的高效液相色譜圖；
[0053] 圖3為實施例1所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0054] 圖4為實施例2所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0055] 圖5為實施例3所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0056] 圖6為實施例4所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0057] 圖7為實施例5所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0058] 圖8為實施例6所得鹽酸洛拉曲克及其有關(guān)物質(zhì)混合溶液的高效液相色譜圖；
[0059] 圖9-1、9-2、9_3為實施例7所得三個批次的鹽酸洛拉曲克原料藥的高效液相色譜 圖；
[0060] 圖10-1、10-2、10-3為實施例8所得三個批次的注射用鹽酸洛拉曲克的高效液相 色譜圖；
[0061] 上述圖中，所述橫坐標的單位為min，縱坐標的單位為mV