備方法：稱取本品約0. 5g,精密稱定，精密加入流動 相溶液50mL，稱定重量，水浴加熱（70°C ) 20min，冷卻，補重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試 品，即得。
[0055] 4.陰性樣品溶液的制備
[0056] 取不含甲硝唑的陰性樣品，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性供試品溶液。
[0057] 5.線性關(guān)系考察
[0058] 分別精密吸取甲硝唑?qū)φ掌啡芤海?14. 8 μ g · mL 1W. 1、0. 2、0. 5、0. 7、1、1. 2mL、分 置于IOmL量瓶中，加流動相溶液至刻度，搖勾，得到不同濃度的甲硝唑?qū)φ掌啡芤骸７謩e取 IOuL進樣，測定峰面積。
[0059] 以峰面積（A)為縱坐標，濃度（C)為橫坐標進行線性回歸，得到回歸方程：A = 27366C-6545. 3, r = 0· 9995,表明甲硝唑在 3. 148 μ g · mL 1 ~37. 776 μ g · mL 1 范圍內(nèi)線 性關(guān)系良好。結(jié)果見圖1-圖2.
[0060] 6.精密度實驗
[0061] 精密吸取甲硝唑?qū)φ掌啡芤海?1. 48 μ g ·ιΛ-1) IOuL,連續(xù)進樣6次，按上述色譜 條件測定峰面積，結(jié)果峰面積值基本穩(wěn)定，甲硝唑的RSD = 1.68%，說明精密度良好。結(jié) 果見表5,和圖5。
[0062] 表5甲硝唑精密度實驗結(jié)果表
[0063]
[0064]
[0065] 7.穩(wěn)定性實驗
[0066] 在0, 1，2, 4, 6, 8, IOh分別對同一樣品進樣10uL，測定甲硝唑峰面積，結(jié)果RSD = 0. 93%，表明樣品在IOh穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表6和圖3。
[0067] 表6甲硝唑穩(wěn)定性實驗結(jié)果表
[0068]
[0069] 8.重復(fù)性實驗
[0070] 精密稱取樣品6份，按上述供試液方法制備和色譜條件測定峰面積，計算甲硝唑 含量，結(jié)果甲硝唑平均含量為2. 2635%，RSD = 1. 68%，表明重復(fù)性良好。結(jié)果見表7， 圖4。
[0071] 表7甲硝唑重復(fù)性實驗結(jié)果表
[0072]
[0073] 9.加樣回收實驗
[0074] 稱取已知含量的樣品（批號：2014111901)約0· 25g置于IOOmL錐形瓶中，分別精 密加入低、中、高濃度的甲硝唑?qū)φ掌?，按供試品方法制備供試品溶液，精密吸?0uL，注 入液相色譜儀，計算加樣回收率。結(jié)果，其平均回收率為：％。RSD =%。說明該方法可行。 加樣回收率試驗結(jié)果見表結(jié)果見表8和圖6-圖8。
[0075] 表8加樣回收率試驗結(jié)果（η = 9)
[0076]
[0077] 11.耐用性
[0078] 11. 1檢測波長的考察
[0079] 色譜柱：DIKMA Diamonsil C18 柱（250X4. 6mm, 5 μ m)，流動相：甲醇-水 (20:80)，流速：1.0 mL. min-1，柱溫：30°C，精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10uL，分別 進樣，測定甲硝唑含量，結(jié)果見表9和圖9-圖13。
[0080] 表9不同檢測波長耐用性實驗結(jié)果
[0081]
[0082] 結(jié)果表明，含量測定在吸收波長320nm上下浮動，在吸收波長316~324nm范圍 內(nèi)，RDS = 4. 81%。主要是在324nm處偏差較大。316~322nm范圍內(nèi)，RDS =1.28%，無 顯著影響，分離度符合要求，說明甲硝挫的測定波長在316~322nm之間能精準測定。
[0083] 11. 2柱溫考察
[0084] 色譜柱：DIKMA Diamonsil C18 柱（250X4. 6mm, 5 μ m)，流動相：甲醇-水 (20:80)，流速：1.0 mL. min \檢測波長320nm，精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10uL， 分別進樣，測定甲硝唑含量，結(jié)果見表10和圖19-圖21。
[0085] 表10不同柱溫耐用性實驗結(jié)果
[0086]
[0087] 結(jié)果表明，含量測定在柱溫30°C上下浮動，在柱溫25°C~35°C范圍內(nèi)，RDS = 1.02%，無顯著影響，分離度基本符合要求，說明甲硝唑的測定在柱溫25°C~35C之間都 能較精準測定。
[0088] 11. 3流速考察
[0089] 色譜柱：DIKMADiamonsil C18柱（250X4. 6mm, 5 μm),流動相：甲醇-水（20:80)， 檢測波長320nm，柱溫30°C，精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10uL，分別進樣，測定甲 硝唑含量，結(jié)果見表11和圖22-圖26。
[0090] 表11不同流速耐用性實驗結(jié)果
[0091]
[0092] 結(jié)果表明，含量測定在流速1.0 mL. min 1上下浮動，流速0. 8~I. 2mL. min 1范圍 內(nèi)RSD = 4. 02%，主要是在I. 2mL. min 1處偏差較大。在0· 8~I. ImL. min 1范圍內(nèi)，RSD =0. 95%，無顯著影響，分離度符合要求，說明甲硝唑的測定在流速在0. 8~I. ImL min 1 之間都能較精準測定。
[0093] 11. 4流動相組成比例考察
[0094] 色譜柱：DIKMA Diamonsil C18 柱（250X4. 6mm, 5 μπι),檢測波長 320nm,柱溫 30°C，流速：1.0 mL min-1，精密吸取供試品溶液與對照品溶液各IOuL,分別進樣，測定甲硝 唑含量，結(jié)果見表12,圖14-圖18。
[0095] 表12不同流動相比例耐用性實驗結(jié)果
[0096]
[0097] 注：流動相：甲醇-水：1· (20:80)，2· (22:78)，3· (24:76)，4· (18:82)， 5· (16:84)。
[0098] 結(jié)果表明，含量測定在甲醇-水（20:80)上下浮動，比例（16:84)~（24:76)范 圍內(nèi)，RDS = 3. 44%。主要是在比例（24:76)時偏差較大。比例（16:84)~（22:78)范圍 內(nèi)，RSD = 2.65%，分離度符合要求，說明甲硝唑的測定在比例（16:84)~（22:78)范圍 內(nèi)都能精準測定。
[0099] 11. 5色譜柱考察
[0100] 色譜條件：流動相：甲醇-水（20:80)，檢測波長320nm，柱溫30°C，流速：1.0 mL. min\精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10uL，分別進樣，測定甲硝唑含量，結(jié)果見表 13。
[0101] 表13不同色譜柱耐用性實驗結(jié)果
[0102]
[0103] 注：1. AgelaTechnologies0dyssil-C18, 2. Agilent ZORBAX SB-C18, 3. DIKMA Diamonsil C18〇
[0104] 結(jié)果表明，不同廠牌類型的色譜柱對甲硝唑的含量測無顯著影響，分離度符合要 求（RSD = 0. 88% )，說明三者能準確對甲硝唑含量進行測定。
[0105] 12.樣品含量測定
[0106] 精密稱取不同批次的復(fù)方乳膏，按供試品制備方法處理，注入高效液相色譜儀 10uL，按以上條件測定其含量，結(jié)果見表14。
[0107] 表14復(fù)方乳膏中甲硝唑含量測定結(jié)果（η = 3)
[0108]
[0109]
[0110] 由以上測定結(jié)果可知，3批樣品甲硝唑含量的均值為2. 2402%。綜合考慮原料、制 劑生產(chǎn)及存過程等因素，甲硝唑含量限度標準按80%計算，暫定本品每克含甲硝唑不得少 于 1. 79%。
【附圖說明】
[0111] 圖1復(fù)方制劑系統(tǒng)適用性試驗色譜圖（A是空白溶劑色譜圖；B是甲硝唑?qū)φ掌?；C 是供試品溶液色譜圖；D是缺甲硝唑陰性供試品色譜圖）；
[0112] 圖2是復(fù)方制劑標準曲線圖；
[0113] 圖3是復(fù)方制劑穩(wěn)定性試驗色譜圖；
[0114] 圖4是復(fù)方制劑重復(fù)性試驗色譜圖；
[0115] 圖5是復(fù)方制劑精密度試驗色譜圖；
[0116] 圖6是加樣回收色譜圖80 % ;
[0117] 圖7是加樣回收色譜圖100 % ;
[0118] 圖8是加樣回收色譜圖120% ;
[0119] 圖9是不同波長考察圖（條件：流動相：甲醇-水（20:80)，流速：1. OmL. min-1， 柱溫：30°C，λ = 316nm);
[0120] 圖10是不同波長考察圖（條件：流動相：甲醇-水（20:80)，流速：1. OmL. min-1， 柱溫：30°C，λ = 318nm);
[0121] 圖11是不同波長考察圖（條件：流動相：甲醇-水（20:80)，流速：1. OmL. min-1， 柱溫：30°C，λ = 320nm);
[0122] 圖12是不同波長考察圖（條件：流動相：甲醇-水（20:80)，流速：1. OmL. min-