一種補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的快速檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種基于快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS法）快速檢 測(cè)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂的干燥成熟果實(shí)，具有溫腎助陽(yáng)、納氣、止瀉的功效。其 主要成分為香豆素類和黃酮類化合物，其中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為其重要有效成分。作 為傳統(tǒng)的中藥，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素常用于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松，現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明， 補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素是一種有效的Ca +通道拮抗劑，其對(duì)大鼠的成骨細(xì)胞的增值和分化 具有明顯的促進(jìn)作用。
[0003] 最近的研究表明補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素可用于治療T細(xì)胞淋巴癌、人乳腺癌細(xì)胞 和一些自動(dòng)免疫性疾病。補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的聯(lián)合使用對(duì)多藥耐藥性的癌細(xì)胞，如人 乳腺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株，有明顯的抑制作用。因此，在其他藥物治療白血病失敗后，補(bǔ)骨 脂素和異補(bǔ)骨脂素有可能成為治療白血病的有效藥物之一?？焖?、高效檢測(cè)中藥或其復(fù)方 制劑中的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)成藥性及中藥現(xiàn)代化應(yīng)用是非常重要的。
[0004] 現(xiàn)有對(duì)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分析檢測(cè)要采用高效液相的方法。往往需要對(duì)樣 品進(jìn)行較為復(fù)雜的樣品前處理，通過(guò)熱提、冷提或超聲萃取等方法將補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂 素從藥材或其復(fù)方制劑中分離，隨后采用HPLC/UPLC/SFCLC等液相色譜方法分析。該分析 方法的樣品處理過(guò)程復(fù)雜、總體分析時(shí)間長(zhǎng)。
[0005] 快速熱解-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)是一種高效的檢測(cè)易揮發(fā)性成 分的技術(shù)，近年來(lái)發(fā)展迅速。低溫下的熱解過(guò)程是一種非常有效的熱分離手段，通過(guò)控制 熱解的溫度和時(shí)間可以實(shí)現(xiàn)低沸點(diǎn)的復(fù)雜混合物的初步的氣-液或氣-固相分離；為氣相 色譜提供一種在線的和實(shí)時(shí)的樣品前處理和初步分離能力。分析檢測(cè)過(guò)程中的熱解時(shí)間、 溫度、升溫速率、載氣流速、分流比、離子化溫度等對(duì)分析結(jié)果的影響是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技術(shù)的特點(diǎn)，目前亟需提出一種針對(duì)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的快速、微量檢測(cè)方 法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的快速檢測(cè)方法，并基于此， 初步判斷補(bǔ)骨脂及其制劑質(zhì)量的高低。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0008] 1)準(zhǔn)確稱取補(bǔ)骨脂或其復(fù)方制劑0. 01~10.0 Omg得樣品，將樣品加入熱解杯中； [0009] 2)采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)加入熱解杯中的樣品進(jìn)行測(cè)定； [0010] 3)經(jīng)過(guò)步驟2)后，根據(jù)測(cè)定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中補(bǔ)骨脂素和 異補(bǔ)骨脂素的色譜峰，并獲得樣品中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的相對(duì)含量。
[0011] 所述樣品為塊狀或粉末狀固體。
[0012] 所述熱解的條件為：熱解溫度為200~400 °C，熱解時(shí)間為0. 1~2min。
[0013] 所述氣相色譜的工作條件為：載氣為流速0. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~ 500 :1，升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟葹?0~60°C，并保持O~4min，然后以彡35°C /min升至 150°C，然后以彡 15°C /min 升至 300°C。
[0014] 所述質(zhì)譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測(cè)，電子能量為40~80eV，離子源 溫度為210~240°C，單四級(jí)桿溫度為140~180°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電 壓為1070~3000V，溶劑延遲為O~3min。
[0015] 所述相對(duì)含量采用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算。
[0016] 所述補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的色譜峰的定性采用NIST08軟件自動(dòng)匹配計(jì)算。
[0017] 本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
[0018] 1)熱分離和色譜分離相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)快速分離?，F(xiàn)有方法是將補(bǔ)骨脂或其制劑 通過(guò)超聲萃取或溶劑萃取，過(guò)濾處理后，利用液相色譜分析，或薄層層析-光譜聯(lián)用技術(shù) (TLC-SP)等檢測(cè)其有效成分；該方法的一般分析時(shí)間為4~24小時(shí)。本發(fā)明中通過(guò)熱分 離方法直接對(duì)補(bǔ)骨脂或復(fù)方補(bǔ)骨脂中的低沸點(diǎn)物質(zhì)進(jìn)行初步分離，隨后采用氣相色譜進(jìn)一 步分離補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素，大大節(jié)省了分析時(shí)間，常規(guī)分析時(shí)間為〇. 5~1小時(shí)，提高 了分析效率。
[0019] 2)所需樣品量少，靈敏度好。現(xiàn)有方法因需要先分離得到粗品溶液，因此需要的樣 品量較大，通常是幾克到幾十克不等；本發(fā)明方法的分析所用樣品量一般為〇. 01~lmg，提 高了分析靈敏度。
[0020] 3)本發(fā)明優(yōu)化了熱解、色譜、質(zhì)譜等檢測(cè)條件，可以快速定性所需的色譜峰，實(shí)現(xiàn) 了快速和準(zhǔn)確檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0022] 本發(fā)明針對(duì)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素熔沸點(diǎn)相對(duì)較低且易揮發(fā)的特點(diǎn)，采用快速熱 解-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)，充分將熱分離和色譜分離相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素 和異補(bǔ)骨脂素的快速分離，隨后采用質(zhì)譜定性和定量檢測(cè)，達(dá)到快速、微量檢測(cè)的目的。
[0023] 實(shí)施例
[0024] -種基于PY-GC/MS檢測(cè)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的方法，以補(bǔ)骨脂制劑為例，但本 發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于該實(shí)施例，具體步驟如下：
[0025] 一、樣品準(zhǔn)備
[0026] 將取得的補(bǔ)骨脂膠囊（陜西斯諾特生物技術(shù)有限公司，西安）準(zhǔn)確稱取 1.0 Omg (±0. 02mg)放入50 μ L的熱解小杯中；
[0027] 二、熱解：
[0028] 熱裂解爐采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0029] ①熱解溫度：300 °C ;
[0030] ②熱解時(shí)間：0· 2〇min。
[0031] 三、分離、檢測(cè)
[0032] 色譜：
[0033] 氣相色譜采用安捷倫7890A :
[0034] ①分析柱是HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0035] ②載氣：高純氦氣，流速為1.0 mL/min ;
[0036] ③進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣