用于自動化評估孵育的免疫印跡條的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于自動化評估孵育的免疫印跡條的設(shè)備和方法。對于這種免疫印跡條而言重要的是:所述免疫印跡條具有以抗原覆層的區(qū)域，一旦特別是在抗原和存在于患者樣本中的抗體之間發(fā)生結(jié)合，所述區(qū)域在形成所謂的帶的情況下被染色。在所描述的技術(shù)解決方案的范圍中，首先借助照相機(jī)拍攝至少兩個孵育的免疫印跡條的表面，并且然后以數(shù)字的形式將照片傳送給評估單元。最后，在評估單元中對以帶的形式出現(xiàn)的染色進(jìn)行探測并且至少部分地定量，從而在考慮帶的數(shù)量和其色彩強(qiáng)度的情況下生成診斷建議。
【背景技術(shù)】
[0002]在體外診斷的領(lǐng)域中，為了創(chuàng)建診斷常常使用免疫印跡條例如蛋白質(zhì)印跡條或線條印跡條。相應(yīng)需要的印跡條被置入為此設(shè)置的孵育槽中，在所述孵育槽中，所述印跡條用所需要的試劑以及患者樣本來孵育。在準(zhǔn)確的測試過程之后在患者樣本被陽性測試時在印跡條上顯現(xiàn)出特定的染色、即所謂的帶，由此尤其能夠證實(shí)抗體與設(shè)置在免疫印跡條上的抗原的結(jié)合。對所孵育的免疫印跡條的評估要么能夠通過目視檢查進(jìn)行，但是或者免疫印跡條借助于自動化的或至少半自動化的系統(tǒng)得到評估。在這方面，已知EUR0IMMUNMedizinische Labordiagnostika AG公司的所謂的EU-ROBlot照相機(jī)，所述照相機(jī)拍攝所孵育的免疫印跡條，在此期間所述條還位于孵育池的孵育槽中。相應(yīng)的照片被數(shù)字化，傳輸給數(shù)據(jù)評估單元并且在那里借助特定的實(shí)驗(yàn)室軟件進(jìn)行評估。在評估免疫印跡條時，為了準(zhǔn)備創(chuàng)建診斷建議，首先出現(xiàn)所述帶以及確定各個帶相比于背景的染色。在強(qiáng)陽性的樣本中定期引起對免疫印跡條的強(qiáng)的染色，而僅弱陽性的樣本常常提供僅弱的進(jìn)而難以評估的信號。
[0003]類似的系統(tǒng)從W099/53288中已知，在該文獻(xiàn)中描述了一種用于評估疏螺旋體印跡的自動化系統(tǒng)。在此也借助數(shù)字相機(jī)拍攝孵育的免疫印跡條并且傳輸給電子數(shù)據(jù)處理單元以用于評估。在陽性的患者樣本中的帶的染色又根據(jù)顏色等級以分辨的方式評估。
[0004]在應(yīng)用所描述的系統(tǒng)時常常成問題的是，不同的膜作為用于制造的培養(yǎng)基而用于免疫印跡條，特別是使用基于聚偏氟乙烯(PVDF)、尼龍或硝化纖維的膜。關(guān)于創(chuàng)建孵育的免疫印跡條的拍攝在此要注意的是:由不同膜制成的免疫印跡條的染色特性常常明顯不同，這會對自動化評估染色成問題。此外，之前提及的材料的干燥特性是不同的，因而部分地拍攝具有不同的殘余濕度的免疫印跡條。殘余濕度又對免疫印跡條的背景色具有直接影響，進(jìn)而對確定在帶與免疫印跡條的背景之間的色差具有直接影響。此外要注意的是:即使是免疫印跡條的具有固定的曝光時間、具有限定的照明和/或在確定的干燥時間之后的單次拍攝也不總是提供關(guān)于背景色的最優(yōu)圖片或在帶色與背景色之間的比例，或者出現(xiàn)圖像的過度照耀，這最終導(dǎo)致圖像評估變得困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]由用于自動化評估免疫印跡條的已知的系統(tǒng)以及之前描述的問題出發(fā)，本發(fā)明所基于的目的是:提供一種系統(tǒng)，借助所述系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)對免疫印跡條的高品質(zhì)評估，優(yōu)選即使對于同時使用或者拍攝由不同膜制成的免疫印跡條的情況而言也如此。此外應(yīng)不重要的是:不同的免疫印跡條具有什么樣的殘余濕度，以便防止僅當(dāng)所有孵育的免疫印跡條至少幾乎干燥時，才能實(shí)施高品質(zhì)的評估。此外，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)解決方案應(yīng)確保:尤其允許可靠地評估在各個帶的染色與背景色之間的比例并且盡可能排除所謂的過度照耀的危險。改進(jìn)的方法以及用于實(shí)施該方法的自動裝置此外應(yīng)以簡單的方式集成到已知的實(shí)驗(yàn)室流程中并且能夠以相對簡單的機(jī)構(gòu)實(shí)現(xiàn)。
[0006]之前描述的目的借助根據(jù)權(quán)利要求1的方法以及適合于執(zhí)行這種方法的根據(jù)權(quán)利要求10的設(shè)備來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的有利的實(shí)施形式是從屬權(quán)利要求的主題并且在下面的說明中部分地參考附圖詳細(xì)闡述。
[0007]根據(jù)本發(fā)明提出一種用于自動化評估孵育的免疫印跡條的方法，其中借助照相機(jī)至少局部地從免疫印跡條的設(shè)置有抗原的表面、特別是從所謂的被染色的帶拍攝圖像，并且將所述圖像傳輸給評估單元，在所述評估單元中探測在施加抗原的區(qū)域中探測所述印跡條的染色并且基于所探測到的染色來生成診斷建議，如下地進(jìn)行改進(jìn)，即，借助所述照相機(jī)在不同的時間點(diǎn)和/或在不同的拍攝條件下分別進(jìn)行至少兩次拍攝。
[0008]在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，在不同時間點(diǎn)的至少兩次拍攝包括第一拍攝和最后一次拍攝、可選地在這兩次拍攝之間的附加的拍攝，其中，在第一和最后一次拍攝之間的時間間隔為至少 0.5、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5、15、20、25、30、35、40、45、50、60、80、90、100、120、150或180分鐘，更優(yōu)選的為至少5、10或15分鐘，最優(yōu)選的為至少5分鐘。
[0009]因此在根據(jù)本發(fā)明的方法中重要的是:對免疫印跡條的各個拍攝的條件進(jìn)行改變，并且最終為了生成診斷建議而使用最佳適宜的拍攝。因此在評估的范圍中，在一定程度上按照要求由不同的拍攝的最適宜的圖像組成虛擬的免疫印跡條。被染色的帶的用于生成診斷建議的圖像因此能夠源自于一次或多次不同的拍攝。拍攝條件的改變在此可以在于在不同的時間、尤其在不同的干燥時間進(jìn)行不同的拍攝，亦或可以在于在不同的條件下進(jìn)行拍攝。
[0010]在本發(fā)明的第一特定的實(shí)施方式中提出:對至少一個免疫印跡條的以抗原覆層的表面進(jìn)行至少兩次拍攝，其中，不同拍攝的曝光時間是不同的。特別優(yōu)選的是:分別為至少兩個免疫印跡條進(jìn)行至少兩次拍攝。
[0011]不同的拍攝在每種情況下傳輸給評估單元，在所述評估單元中，對各個區(qū)域的、SP所謂的帶的染色與各所屬的免疫印跡條的背景色進(jìn)行比較并且借助具有整數(shù)值O至255的顏色等級比色圖表來分類。首先，在此將不同的拍攝相互比較，并且將一個免疫印跡條的相應(yīng)拍攝用于生成診斷建議，這些拍攝在各個帶與條背景之間的色差特別大。特別優(yōu)選的是:使用光亮的拍攝。
[0012]因此，在評估單元中由不同的拍攝中濾出最佳的拍攝，以便將這些最佳的拍攝用于生成診斷建議。在這方面可設(shè)想的是:要么對每個所拍攝的條、要么尤其對線條印跡或膜芯片連同各個設(shè)置在其上的試驗(yàn)片，為每個試驗(yàn)片確定染色的最佳拍攝。因此總是首先濾出一個條的對評估而言最適宜的帶，并且考慮將這些帶用于自動化創(chuàng)建診斷建議。在這方面提出:將一個免疫印跡條的帶的各次拍攝進(jìn)行比較，并且將一個帶的相應(yīng)最佳的拍攝用于生成診斷建議。根據(jù)該實(shí)施方式可設(shè)想的是:在創(chuàng)建診斷建議期間考慮在一定程度上虛擬的免疫印跡條，所述虛擬的免疫印跡條由帶的下述拍攝組成，所述拍攝在不同的時間點(diǎn)和/或在不同的拍攝條件下、尤其以不同的曝光時間和/或變化的亮度進(jìn)行。因此借助于該措施可行的是:在不同的時間點(diǎn)和/或在不同的條件下生成多次拍攝并且將相應(yīng)最佳的拍攝用于創(chuàng)建診斷建議。在創(chuàng)建診斷建議時的品質(zhì)因此明顯提升。
[0013]對至少兩次拍攝的曝光時間的變化的備選或補(bǔ)充，同樣可設(shè)想的是在免疫印跡條的不同亮度或者曝光的情況下的不同拍攝。在此的重要思想還在于:生成多次拍攝并且最終使用對評估最適宜的拍攝，必要時也考慮不同帶的不同拍攝。
[0014]在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，亮度、優(yōu)選稱為照明強(qiáng)度在至少兩次拍攝的情況中在具有最高亮度的拍攝與具有最低亮度的拍攝之間區(qū)別為