具有內(nèi)部校準(zhǔn)的測定的制作方法
【專利說明】
[0001] 相關(guān)申請的奪叉引用
[0002] 本申請是2013年3月15日提交的美國申請?zhí)?3/833,365的繼續(xù)申請，該美國申 請為了所有目的通過引用而全文并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本文提供了用于具有內(nèi)部校準(zhǔn)的測定的試劑盒和方法。
【背景技術(shù)】
[0004] 在過去幾十年中，已經(jīng)使用熒光、化學(xué)發(fā)光或響應(yīng)于分析物產(chǎn)生信號的其他手段 進(jìn)行了測定。目前，許多測定通過測量在反應(yīng)混合物的總體積中產(chǎn)生的光信號的強(qiáng)度來進(jìn) 行。產(chǎn)生的光信號可以通過光學(xué)手段來測量，其中產(chǎn)生的光信號由大量分子發(fā)出。在典型 的實(shí)施方案中，這些測定可以如下進(jìn)行：將懷疑含有抗原的樣品與包含附接至固體支持物 (例如，微粒）上的第一抗體的試劑組合，以形成反應(yīng)混合物。該抗原如果存在于樣品中， 則與該第一抗體特異性結(jié)合。向反應(yīng)混合物中引入包含其上附接有標(biāo)記的第二抗體的偶聯(lián) 物，并與所述抗原特異性結(jié)合，該抗原與第一抗體特異性結(jié)合，該第一抗體如前所述附接至 固體支持物上。這樣的測定被稱為夾心測定或免疫計(jì)量測定。這種類型的測定示意性地示 于圖1中。通常在通過進(jìn)行洗滌步驟從反應(yīng)混合物中除去未結(jié)合的偶聯(lián)物之后，測量由標(biāo) 記物引起的信號。測量來源于反應(yīng)混合物的總體積的信號，然后將其與校準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較， 以確定樣品中存在的抗原的濃度。
[0005] 當(dāng)測定不包括從未結(jié)合的樣品分析物中分離結(jié)合的樣品分析物時，其被認(rèn)為是 '一步'測定。當(dāng)測定包括從未結(jié)合的樣品分析物中分離結(jié)合的樣品分析物時，其通常被認(rèn) 為是'兩步測定'（或延遲的一步測定，這取決于如何進(jìn)行分離）。
[0006] 在標(biāo)準(zhǔn)的夾心測定中，第一步是使用一組具有已知濃度的分析物校準(zhǔn)物生成校準(zhǔn) 曲線。然后，使用該校準(zhǔn)曲線確定未知樣品的濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了用于測定（如免疫測定）的內(nèi)部校準(zhǔn)的試劑盒和方法。本文所提供 的內(nèi)部校準(zhǔn)方法和試劑盒無需制作校準(zhǔn)曲線，并允許基于單一內(nèi)部校準(zhǔn)的參考點(diǎn)來確定大 量測試樣品中的分析物的存在和/或濃度。
[0008] 因此，在一方面，本發(fā)明提供了試劑盒。在一些實(shí)施方案中，該試劑盒包含：包含第 一標(biāo)記物的示蹤分析物、捕獲分析物結(jié)合分子和包含第二標(biāo)記物的檢測分析物結(jié)合分子， 其中該捕獲分析物結(jié)合分子和該檢測分析物結(jié)合分子能夠同時與該示蹤分析物結(jié)合。在不 同的實(shí)施方案中，該捕獲分析物結(jié)合分子附接至固體支持物上。在一些實(shí)施方案中，該固體 支持物選自顆粒、微粒、珠子、電極和多孔板。在一些實(shí)施方案中，該捕獲分析物結(jié)合分子和 /或該檢測分析物結(jié)合分子之一或兩者是抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，第一標(biāo)記物和 第二標(biāo)記物之一或兩者是發(fā)色團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，第一標(biāo)記物和第二標(biāo)記物之一或兩 者是熒光團(tuán)。
[0009] 在另一方面，本發(fā)明提供了對測定進(jìn)行內(nèi)部校準(zhǔn)的方法。在一些實(shí)施方案中，該測 定包括：
[0010] a)使捕獲分析物結(jié)合分子與預(yù)定濃度的用第一標(biāo)記物標(biāo)記的示蹤分析物及預(yù)定 濃度的用第二標(biāo)記物標(biāo)記的檢測分析物結(jié)合分子接觸，其中該捕獲分析物結(jié)合分子和該檢 測分析物結(jié)合分子同時與該不蹤分析物結(jié)合；
[0011] b)測量所獲得的第一標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（II。）和第二標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（12。）；
[0012] c)將校正因子（F)確定為第二標(biāo)記物的強(qiáng)度（12。）與第一標(biāo)記物的強(qiáng)度（II。）的 比值；由此該校正因子的確定用于對所述測定的內(nèi)部校準(zhǔn)。通常，該方法在不存在測試樣品 的情況下進(jìn)行。
[0013] 在另一方面，本發(fā)明提供了確定一個或多個測試樣品中的分析物濃度的方法。在 一些實(shí)施方案中，該方法包括：
[0014] a)在不存在或存在可能包含測試分析物的一個或多個測試樣品的情況下，使捕獲 分析物結(jié)合分子與預(yù)定濃度的用第一標(biāo)記物標(biāo)記的示蹤分析物及預(yù)定濃度的用第二標(biāo)記 物標(biāo)記的檢測分析物結(jié)合分子接觸，其中該捕獲分析物結(jié)合分子和該檢測分析物結(jié)合分子 同時與該示蹤分析物結(jié)合，并且如果存在的話，同時與所述一個或多個測試樣品中的測試 分析物結(jié)合；
[0015] b)測量在不存在所述一個或多個測試樣品時獲得的第一標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（II。） 和第二標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（12。）；
[0016] C)將校正因子（F)確定為第二標(biāo)記物的強(qiáng)度（12。）與第一標(biāo)記物的強(qiáng)度（II。）的 比值；
[0017] d)測量在存在所述一個或多個測試樣品時獲得的第一標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（Il)和 第二標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（12);以及
[0018] e)通過將第二標(biāo)記物的強(qiáng)度（12)與第一標(biāo)記物的強(qiáng)度（Il)的比值除以校正因子 (F)并減去示蹤分析物的預(yù)定濃度來確定在所述一個或多個測試樣品中的測試分析物的濃 度。在不同的實(shí)施方案中，步驟b)和d)可以同時或以任意順序完成。在一些實(shí)施方案中， 步驟d)和e)重復(fù)一次或多次。在一些實(shí)施方案中，步驟a)至c)只進(jìn)行一次。在一些實(shí) 施方案中，示蹤分析物的預(yù)定濃度的范圍為從低于預(yù)期的測試分析物濃度至高于預(yù)期的目 標(biāo)測試分析物濃度約5倍。
[0019] 關(guān)于內(nèi)部校準(zhǔn)方法和測定分析物濃度的方法的另外的實(shí)施方案，在一些實(shí)施方案 中，示蹤分析物的預(yù)定濃度在捕獲分析物結(jié)合分子的結(jié)合容量的飽和度以下。在一些實(shí)施 方案中，使用兩步測定形式。在一些實(shí)施方案中，使用一步測定形式。在不同的實(shí)施方案中， 當(dāng)使用兩步測定形式時，檢測分析物結(jié)合分子的預(yù)定濃度等于或超過在第一步中捕獲的分 析物和示蹤分析物的濃度。在不同的實(shí)施方案中，當(dāng)使用一步測定形式時，檢測分析物結(jié)合 分子的濃度超過分析物和示蹤分析物的濃度。在一些實(shí)施方案中，所述方法使用自動化或 半自動化系統(tǒng)來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，捕獲分析物結(jié)合分子附接至固體支持物上。在 一些實(shí)施方案中，該固體支持物選自顆粒、微粒、珠子、電極和多孔板。在一些實(shí)施方案中， 捕獲分析物結(jié)合分子和/或檢測分析物結(jié)合分子之一或兩者是抗體或其片段。在一些實(shí)施 方案中，第一標(biāo)記物是第一發(fā)色團(tuán)且第二標(biāo)記物是第二發(fā)色團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，第一標(biāo) 記物是第一熒光團(tuán)且第二標(biāo)記物是第二熒光團(tuán)。
【附圖說明】
[0020] 圖1提供了夾心測定的示意圖。
[0021] 圖2提供了對使用單一示蹤分析物內(nèi)部校準(zhǔn)的測定的實(shí)施方案進(jìn)行說明的示意 圖。
[0022] 圖3示出了嗜中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（NGAL)滴定的流程圖。
[0023] 圖4示出了使用單一示蹤分析物對測定條件變化的內(nèi)部校正。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 本公開內(nèi)容部分地基于使用內(nèi)部校準(zhǔn)物的測定和方法的發(fā)現(xiàn)和設(shè)計(jì)，該內(nèi)部校準(zhǔn) 物可校正測定條件的變化并提高測定精度。此外，通過用單一校準(zhǔn)物代替校準(zhǔn)物組，可以減 少校準(zhǔn)運(yùn)行的次數(shù)，例如，一個校準(zhǔn)運(yùn)行可以確定用于測量大量順序運(yùn)行的測試樣品的分 析物濃度的準(zhǔn)確參數(shù)。
[0025] 定義
[0026] 以下術(shù)語與本公開內(nèi)容有關(guān)：
[0027] "測定"是測量常常含有物質(zhì)的復(fù)雜混合物的溶液中物質(zhì)的存在或濃度的生化試 驗(yàn)。在諸如血清或尿的生物液體中的分析物常常使用測定方法進(jìn)行測定。此類測定是基于 分析物結(jié)合分子（例如，抗體或其抗原反應(yīng)性片段）以高特異性與一種或非常有限的一組 分子結(jié)合的獨(dú)特能力。與分析物結(jié)合分子（例如，抗體或其抗原反應(yīng)性片段）結(jié)合的分子 被稱為分析物或抗原。需要分離步驟的測定，通常被稱為分離測定或非均相測定，是普及 的，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀自O(shè)計(jì)，但它們經(jīng)常需要多個步驟，包括對其上結(jié)合有標(biāo)記的試劑的表面的 仔細(xì)洗滌。一些測定可以在不進(jìn)行分離步驟的情況下運(yùn)行。此類測定常?？赏ㄟ^混合試劑 和樣品并進(jìn)行物理測量來簡單地進(jìn)行。此類測定被稱為均相測定，或者較不經(jīng)常地，被稱為 非分離測定。
[0028] 如本文所用的，表述"夾心測定"意指采用兩種分析物結(jié)合分子同時（例如，在相 同或單獨(dú)的步驟中）與相同分析物結(jié)合的測定。所述分析物結(jié)合分子之一直接或間接地 附接至固體支持物上，從而允許分析物直接或間接地附接至該固體支持物，例如，微?；螂?極。其他分析物結(jié)合分子直接或間接地附接至標(biāo)記物，從而允許分析物直接或間接地附接 至該標(biāo)記物以提供用于檢測該分析物的信號。例如，分析物結(jié)合分子之一可以是用于與樣 品中的分析物（例如，抗原）特異性結(jié)合的捕獲分析物結(jié)合分子（例如，抗體或其抗原反應(yīng) 性片段），由此該分析物（例如，抗原）直接或間接地附接至固體支持物，例如，電極或微粒， 而其他的分析物結(jié)合分子可以是用于與樣品中的分析物（例如，抗原）特異性結(jié)合的檢測 分析物結(jié)合分子（例如，抗體或其抗原反應(yīng)性片段），由此該分析物（例如，抗原）直接或間 接地附接至用于檢測抗原的標(biāo)記物。如果樣品中存在相對較高的量的分析物，則將產(chǎn)生較 高的信號。如果樣品中存在相對較低的量的分析物，則將產(chǎn)生較低的信號。圖1是說明夾 心測定的代表性實(shí)例的示意圖。
[0029] 如本文所用的，術(shù)語"復(fù)合物"意指彼此特異性結(jié)合的至少兩個分子。復(fù)合物的實(shí) 例包括但不限于，與一個分析物結(jié)合分子結(jié)合的一個分析物，與多個分析物結(jié)合分子結(jié)合 的一個分析物，例如，與兩個分析物結(jié)合分子結(jié)合的一個分析物，與多個分析物結(jié)合的一個 分析物結(jié)合分子，例如，與兩個分析物結(jié)合的一個分析物結(jié)合分子。
[0030] 如本文所用的，表述"固體支持物"意指分析物結(jié)合分子（例如，抗體或其抗原反 應(yīng)性片段）可附接至其上，從而使得該分析物結(jié)合分子在液體介質(zhì)中不能從固體支持物上 脫離的任何固體表面。固體支持物可以容易地與該固體支持物接觸的液體分開。在不同的 實(shí)施方案中，固體支持物可以是，例如，塑料、衍生塑料、磁性或非磁性金屬、玻璃或硅。固體 支持物的代表性實(shí)例包括但不限于電極、試管、珠子、微粒、納米顆粒、微孔或多孔板的孔、 凝膠、膠體、生物細(xì)胞、薄片、芯片和本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的其他構(gòu)造。分析物結(jié)合分子 (例如，抗體或其抗原反應(yīng)性片段）可以附接至其上的物體的一個實(shí)例是微粒，例如，磁性 微粒。微粒一般具有小于1000微米的平均直徑。微?？梢匀菀椎貜钠浞稚⒂谄渲械囊后w 中分離。微粒容易地分散在水性介質(zhì)中。此外，固體支持物任選地提供回收分析物結(jié)合蛋 白質(zhì)的手段，即，在與進(jìn)行測定的條件不同的受控條件下從表面上釋放或脫離分析物結(jié)合 分子的手段。例如，分析物結(jié)合分子可借助于可裂解的連接體附接至固體支持物上。
[0031] 如本文所用的，表述"捕獲分析物結(jié)合分子"意指一種分析物結(jié)合分子（例如，抗 體或其抗原反應(yīng)性片段）：其將分析物，例如，抗原，結(jié)合至固體支持物上，其結(jié)果是抗體將 該分析物附接至固體支持物上，由此該分析物直接地或通過居間的部分間接地附接至固體 支持物上。
[0032] 如本文所用的，表述"檢測分析物結(jié)合分子"意指一種分析物結(jié)合分子（例如，抗 體或其抗原反應(yīng)性片段）：其附接至在化學(xué)或生物反應(yīng)中提供或可變成提供可檢測的信號 的部分。
[0033] 術(shù)語"一步"測定是指不包括從未結(jié)合的樣品分析物中分離結(jié)合的樣品分析物的 測定。
[0034] 術(shù)語"兩步"測定是指包括從未結(jié)合的樣品分析物中分離結(jié)合的樣品分析物的測 定。
[0035] "約"是指從所述值大約+/-10%的變化。應(yīng)當(dāng)理解，這樣的變化總是包含在本文 所提供的任何給定值中，無論是否具體提及。
[0036] 如本文進(jìn)一步描述的，"分析物"是指待測的化合物或組合物，其可以是配體，其可 以是單表位的或多表位的，抗原的或半抗原的，共享至少一個共同表位位點(diǎn)或受體的單個 或多個化合物。說明性的感興趣的分析物通常包括但不限于，例如，蛋白質(zhì)、糖蛋白、肽、多 肽、寡核苷酸或多核苷酸，以及更具體地，例如，抗體、抗原、半抗原、激素、藥物、酶或受體。 [0037] "抗體"和"多個抗體"是指單克隆抗體、多特異性抗體、雙功能抗體、人抗體、人 源化抗體（完全或部分人源化的）、動物抗體（諸如但不限于鳥（例如鴨或鵝）、鯊魚、 鯨和哺乳動物，其包括非靈長類（例如，牛、豬、駱駝、美洲駝、馬、山羊、兔、綿羊、倉鼠、豚 鼠、貓、狗、大鼠、小鼠等）或非人靈長類（例如、猴、黑猩猩等）、重組抗體、嵌合抗體、單 鏈Fv( "scFv"）、單鏈抗體、單域抗體、Fab片段、F(ab'）片段、F(ab'）2片段、二硫鍵連接 的卩￥(〃8(^￥〃）以及抗獨(dú)特型（〃3111：；[-1(1〃）抗體、雙域抗體、雙可變域（0￥0)或三可變域 (TVD)抗體（雙可變域免疫球蛋白及其制備方法描述于Wu, C.等人，Nature Biotechnolo gy，25(ll) :1290-1297 (2007)，以及公開號為WO 2001/058956的國際專利申請，其中每一 篇的內(nèi)容均通過引用并入本文），以及上述任一種的功能活性表位結(jié)合片段。尤其是，抗體 包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫反應(yīng)性片段，即，含有分析物結(jié)合位點(diǎn)的分 子。免疫球蛋白分子可以是任何類型（例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別（例如， IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的。為了簡單起見，針對分析物的抗體在本文 中常被稱為"抗分析物抗體"或僅稱"分析物抗體"。如本文所用的術(shù)語"雙功能抗體"是指 包含對一個抗原位點(diǎn)具有特異性的第一臂和對一個不同的抗原位點(diǎn)具有特異性的第二臂 的抗體，g卩，雙功能抗體具有雙重特異性。
[0038] "抗體片段"和"多個抗體片段"是指包含抗原結(jié)合位點(diǎn)或可變區(qū)的完整抗體的一 部分。該部分不包括完整抗體的Fc區(qū)的恒定重鏈域（即，CH2、CH3或CH4,取決于抗體同 種型）。抗體片段的實(shí)例包括但不限于Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F (ab'）2片段、 Fd片段、Fv片段、雙抗體、單鏈Fv(ScFv)分子、只含有一個輕鏈可變域的單鏈多肽、含有輕 鏈可變域的三個CDR的單鏈多肽、只含有一個重鏈可變區(qū)的重鏈可變區(qū)單鏈多肽和含有重 鏈可變區(qū)的三個CDR的單鏈多肽。
[0039] "結(jié)合常數(shù)"如本文所述。在本文中可互換使用的術(shù)語"締合速率常數(shù)"、"kj'或 "k a"是指這樣的值：其表示特異性結(jié)合對的第一成員（SBPl ;例如，分析物結(jié)合分子，抗體 (Ab)或其分析物反應(yīng)性片段）和特異性結(jié)合對的第二成員（SBP2;例如，分析物（例如，抗 原（Ag))的結(jié)合速率，或特異性結(jié)合對的第一成員與特異性結(jié)合對的第二成員之間的復(fù)合 物形成的速率，如以下方程式所示：
[0040] SBP1+SBP2 - SBP1-SBP2
[0041] Ab+Ag - Ab-Ag。
[0042] 在本文中可互換使用的術(shù)語"解離速率常數(shù)"、"krff"或"kd"是指這樣的值：其表示 SBPl(例如，分析物結(jié)合分子，抗體或其分析物反應(yīng)性片段）從SBP2(例如，抗原）上的解離 速率，或SBP1-SBP2復(fù)合物（例如，抗體-抗原復(fù)合物）隨時間分離成游離SBPl (例如，分 析物結(jié)合分子、抗體或其分析物反應(yīng)性片段）和SBP2 (例如，抗原）的速率，如以下方程式 所示：
[0043] SBP1+SBP2 - SBP1-SBP2
[0044] Ab+Ag - Ab-Ag
[0045] 用于確定締合和解離速率常數(shù)的方法是本領(lǐng)域公知的。使用基于熒光的技術(shù)提 供了高靈敏度和在平衡的生理緩沖液中檢測樣品的能力?？梢允褂闷渌麑?shí)驗(yàn)方法和儀器 如BlAcore⑨I (生物分子相互作用分析）測定（例如，可從BIAcore International AB， GE Healthcare公司，Uppsala，Sweden獲得的儀器）。此外，也可以使用可從Sapidyne Instruments (Boise，Idaho)獲得的KinExA? (動力學(xué)排除測定）測定。
[0046] 在本文中可互換使用的術(shù)語"平衡解離常數(shù)"或"KD"是指通過將解離速率（Icciff) 除以締合速率（U而得到的值。締合速率、解離速率和平衡解離常數(shù)用來表示分析物結(jié)合 分子（例如，抗體或其分析物反應(yīng)性片段）對抗原的結(jié)合親和力。這可由以下反應(yīng)和方程 式描述：
[0047] A+B - AB
[0049] 這些結(jié)合常數(shù)中的任何一個，即，ka、kdS K D，可以想象可用來評估或比較"結(jié)合親 和力"，即，結(jié)合的傾向或強(qiáng)度。然而，通常如本文所述，結(jié)合親和力是指K D。
[0050] "CDR"在本文中用來指分析物結(jié)合分子或抗體可變序列內(nèi)的"互補(bǔ)性決定區(qū)"。 在抗體中，在重鏈和輕鏈的每一個可變區(qū)中有三個CDR，對于每個可變區(qū)，它們被稱為 "⑶R1"、"⑶R2"和"⑶R3"。如本文所用的術(shù)語"⑶R組"是指在結(jié)合抗原的單個可變區(qū)中 存在的一組三個CDR。這些⑶R的確切邊界根據(jù)不同的體系已有不同的定義。Kabat描 述的體系（Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987)和（1991))不僅提供了適用于抗體的任何可 變區(qū)的明確的殘基編號體系，而且還提供了限定三個CDR的精確的殘基邊界。這些CDR可被 稱為"Kabat CDR"。Chothia 和同事（Chothia 和 Lesk, J.Mol.Biol·，196:901-917(1987); 和Chothia等人，Nature, 342:877-883 (1989))發(fā)現(xiàn)Kabat CDR內(nèi)的某些亞部分采用幾 乎相同的肽骨架構(gòu)象，盡管在氨基酸序列水平上具有很大的多樣性。這些亞部分被稱為 " L1"、" L2 "和" L3 "，或"ΗΓ'、"H2 "和"H3 "，其中" L"和"H"分別指代輕鏈和重鏈區(qū)。這 些區(qū)域可以被稱為"Chothia⑶R"，它們具有與Kabat⑶R重疊的邊界。與Kabat⑶R重 疊的限定 CDR 的其他邊界已由 Padlan, FASEB J.，9:133-139 (1995)和]\&1(^31111111，1]\1〇1· Biol.，262 (5) : 732-745 (1996)描述。另外其他的CDR邊界限定可能不嚴(yán)格遵循此處的一種 體系，但仍將與KabatCDR重疊，盡管根據(jù)特定殘基或成組殘基乃至整個CDR不顯著影響分 析物（例如，抗原）結(jié)合的預(yù)測或?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)，它們得以縮短或加長。本文所使用的方法可以 利用根據(jù)這些體系中的任意一個限定的⑶R，盡管某些實(shí)施方案使用Kabat或Chothia限定 的 CDR0
[0051] "組分"、"多種組分"和"至少一種組分"通常是指捕獲抗體、檢測或偶聯(lián)物抗體、校 準(zhǔn)物、對照、靈敏度組（panel)、容器、緩沖液、稀釋劑、鹽、酶、酶的輔助因子、檢測試劑、預(yù)處 理試劑/溶液、底物（例如，作為溶液）、終止溶液等，根據(jù)本文描述的方法和本領(lǐng)域所知的 其他方法，其可包含在用于測定諸如患者血清樣品的測試樣品的試劑盒中。一些組分可以 在溶液中或被凍干以便重建后在測定中使用。
[0052] 如本文所用的，術(shù)語"偶聯(lián)物"意指包含結(jié)合對成員和標(biāo)記物的實(shí)體。
[0053] "對照"是指已知不含分析物（"陰性對照"）或含有分析物（"陽性對照"）的組 合物。陽性對照可以包含已知濃度的分析物。"對照"、"陽性對照"和"校準(zhǔn)物"在本文中可 互換使用，其指包含已知濃度的分析物的組合物。"陽性對照"可用來確立測定性能特性，并 且是試劑（例如，分析物）完整性的有用的指示物。
[0054] 在本文中可互換使用的"校正因子"或"F"是指這樣的數(shù)值，在算術(shù)運(yùn)算中利用該 數(shù)值來校正描述由來自檢測抗原結(jié)合分子的標(biāo)記物產(chǎn)生的信號的值。尤其是，測量在不存 在測試樣品時獲得的第一標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（IU和第二標(biāo)記物的信號強(qiáng)度（12。)，并且將 校正因子（F)確定為第二標(biāo)記物的強(qiáng)度（12。）與第一標(biāo)記物的強(qiáng)度（II。）的比值。
[0055] "表位"、"多個表位"或"感興趣的表位"是指被識別并且可以結(jié)合至其特異性結(jié)合 配偶體（例如，分析物結(jié)合分子，例如，抗體或其片段）上的互補(bǔ)位點(diǎn)的任何分析物上的位 點(diǎn)。分析物和抗原結(jié)合分子是特異性結(jié)合對的一部分。例如，表位可以在多肽、蛋白質(zhì)、半 抗原、碳水化合物抗原（例如但不限于糖脂、糖蛋白或脂多糖）或多糖上。其特異性結(jié)合配 偶體可以是，但不限于，分析物結(jié)合分子（例如，抗體或其分析物反應(yīng)性片段）。
[0056] 如本文所使用的，術(shù)語"強(qiáng)度"意指每單位面積或體積上電、光、熱或聲的強(qiáng)度的量 或程度。在不同的實(shí)施方案中，術(shù)語"強(qiáng)度"是指每單位時間每單位面積計(jì)數(shù)的光子的數(shù)目。 例如，每單位面積1000個光子可以被記錄為在單一像素中的500個計(jì)數(shù)，而每單位面積80 個光子可以被記錄為在單一像素中的40個計(jì)數(shù)。特定的轉(zhuǎn)換取決于所使用的照相系統(tǒng)。強(qiáng) 度與計(jì)數(shù)的光子數(shù)目成比例。
[0057] "標(biāo)記物"和"可檢測標(biāo)記物"意指直接或間接地附接至