] 表15.考察不同流動(dòng)相比例對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0190] CN 105181823 A 說明書 16/22 頁
[0191] 結(jié)論：與相同pH值的濃度為lmM、2mM的乙酸銨緩沖液比較，有機(jī)相比例為10% 時(shí)，保留時(shí)間略有增加，但有機(jī)相比例達(dá)到20%以后，保留時(shí)間明顯減??；拖尾因子比同有 機(jī)相比例的要小；理論塔板數(shù)在有機(jī)相比例為70 %之前均有明顯增加，80 %之后略有減 少。綜合各因素分析，緩沖液濃度為3mM時(shí)，峰參數(shù)要好于ImM和2mM時(shí)?？紤]保留時(shí)間、 拖尾因子和理論塔板數(shù)3因素，選擇有機(jī)相比例為80%的條件，考察流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影 響。
[0192] 表16.考察不同流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
CN 105181823 A 說明書 17/22 頁
[0195] 結(jié)論：在該緩沖鹽濃度條件下，隨著流速增加，保留時(shí)間減小，甲卡西酮和麻黃堿 的拖尾因子比緩沖鹽濃度為時(shí)增大，理論塔板數(shù)也隨之降低。甲卡西酮及其合成 前體麻黃堿雖能夠完全分離，但峰參數(shù)與緩沖鹽濃度為2mM比較不具有優(yōu)勢。
[0196] C.流動(dòng)相A為pH5. 0的4mM乙酸銨緩沖液，B為乙腈。
[0197] 表17.考察不同流動(dòng)相比例對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
CN 105181823 A 說明書 18/22 頁
[0200] 結(jié)論：與相同pH值的濃度為的乙酸銨緩沖液比較，保留時(shí)間均略有減少； 拖尾因子與同有機(jī)相比例的比較無明顯差異；理論塔板數(shù)明顯增加，在有機(jī)相比例達(dá)到 80%時(shí)塔板數(shù)最高。綜合各因素分析，緩沖液濃度為4mM時(shí)，峰參數(shù)要好于ImM至3mM時(shí)。 考慮保留時(shí)間、拖尾因子和理論塔板數(shù)3因素，選擇有機(jī)相比例為80%的條件，考察流速對(duì) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
[0201] 表18.考察不同流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0204] 結(jié)論：在該緩沖鹽濃度條件下，隨著流速增加，保留時(shí)間減小；甲卡西酮和麻黃堿 的拖尾因子保持在1. 5左右，隨流速變化不明顯；理論塔板數(shù)雖隨流速增加而降低，但均保 持較高值。甲卡西酮及其合成前體麻黃堿能夠完全分離，該緩沖鹽濃度為一較好濃度。
[0205] D.流動(dòng)相A為pH5. 0的5mM乙酸銨緩沖液，B為乙腈。
[0206] 表19.考察不同流動(dòng)相比例對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0208] 結(jié)論：與相同pH值的濃度為4mM的乙酸銨緩沖液比較，保留時(shí)間在有機(jī)相比例為 40%之前略有增加，之后減??；拖尾因子與同有機(jī)相比例的比較略有減小但差異不大；理 論塔板數(shù)增加，在有機(jī)相比例達(dá)到80 %時(shí)塔板數(shù)最高。綜合各因素分析，緩沖液濃度為5mM 時(shí)峰參數(shù)與4mM比較無明顯差異?？紤]保留時(shí)間、拖尾因子和理論塔板數(shù)3因素，選擇有機(jī) 相比例為80 %的條件，考察流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
[0209] 表20.考察不同流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
CN 105181823 A 1>兀 叩-p 20/22 貞
[0212] 結(jié)論：在該緩沖鹽濃度條件下，隨著流速增加，保留時(shí)間減??；甲卡西酮和麻黃堿 的拖尾因子保持在1. 3左右，隨流速變化不明顯；理論塔板數(shù)雖隨流速增加而降低，但均保 持較高值。甲卡西酮及其合成前體麻黃堿能夠完全分離，該緩沖鹽濃度為一較好濃度。
[0213] E.流動(dòng)相A為pH5. 0的IOmM乙酸銨緩沖液，B為乙腈。
[0214] 表21.考察不同流動(dòng)相比例對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
CN 105181823 A 說明書 21/22 頁
[0217] 結(jié)論：與相同pH值的濃度為5mM的乙酸銨緩沖液比較，保留時(shí)間在明顯減小；拖 尾因子與同有機(jī)相比例的比較略有減小但差異不大；理論塔板數(shù)增加，在有機(jī)相比例達(dá)到 80%時(shí)塔板數(shù)最高。綜合各因素分析，緩沖液濃度為IOmM時(shí)峰參數(shù)與4mM、5mM比較無明顯 差異?？紤]保留時(shí)間、拖尾因子和理論塔板數(shù)3因素，選擇有機(jī)相比例為80%的條件，考察 流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
[0218] 表22.考察不同流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0220] 結(jié)論：在該緩沖鹽濃度條件下，隨著流速增加，保留時(shí)間減??；甲卡西酮和麻黃堿 的拖尾因子保持在1. 5左右，與5mM比較拖尾因子變大；理論塔板數(shù)雖隨流速增加而降低， 但均保持較高值。甲卡西酮及其合成前體麻黃堿能夠完全分離，但分離度均明顯減少。我 們繪制各緩沖鹽濃度與柱效的曲線（數(shù)據(jù)見表23,圖12A-C)，隨緩沖鹽濃度增加，保留時(shí)間 明顯減少；拖尾因子雖有變化，但不成線性，規(guī)律不明顯；理論塔板數(shù)也成曲線變化，但緩 沖鹽濃度增加，甲卡西酮與麻黃堿的分離度降低。綜合各影響因素，最終選擇4mM為最佳的 緩沖鹽濃度。
[0221] 表23.各緩沖鹽濃度與柱效參數(shù)
[0223] (3)考察不同流動(dòng)相比例對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0224] 由于已經(jīng)選擇了流動(dòng)相A為pH5. 0的4mM乙酸銨緩沖液，B為乙腈，從表17的數(shù) 據(jù)中可以看出，流動(dòng)相A :B = 80:20時(shí)，理論塔板數(shù)達(dá)到最大，同時(shí)拖尾因子最小，因而選擇 的最佳流動(dòng)相比例為80:20。
[0225] (4)考察不同流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0226] 在流動(dòng)相A :B = 80:20條件下，從表18的數(shù)據(jù)中可以看出，隨著流速增加，保留時(shí) 間減小；甲卡西酮和麻黃堿的拖尾因子保持在1. 5左右，隨流速變化不明顯；理論塔板數(shù)雖 隨流速增加而降低，但均保持較高值?？紤]分析時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，最終選擇的最佳流速為 I. 2mL/min〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種采用高效液相色譜法測定樣品中甲卡西酮含量的方法，其包括如下步驟： (1) 工作液的配制； (2) 樣品溶液的配制； (3) 檢測條件的設(shè)置； (4) 樣品中甲卡西酮含量的測定； (5) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算， 其中，步驟（3)中，色譜柱采用反相苯基色譜柱，流動(dòng)相為A-I~5mM乙酸銨緩沖液：B-乙腈和 / 或甲醇，A:B= (20 ~40) : (60-80)，流速為I.O-L5mL/min。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟⑶中，A-pH= 5. 0的4mM乙酸銨緩 沖液：B-乙腈，A:B= 20:80，流速為I. 2mL/min。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：采用內(nèi)標(biāo)法定量，選擇2-苯乙胺作為內(nèi) 標(biāo)物質(zhì)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，取甲卡西酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶 液，用質(zhì)量濃度為〇.lmg/mL的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的溶液依次稀釋成甲卡西酮質(zhì)量濃度分別為0. 5、 0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、0. 001、0. 0005mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，并保持內(nèi)標(biāo)溶液的濃度均為 0? 01mg/mL〇5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：在步驟（2)中：稱取樣品，加入流動(dòng)相溶 解，振蕩，離心，離心后取上清液，加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，并加入流動(dòng)相，振蕩均勻后即得到樣品溶 液；流動(dòng)相與步驟（3)中的流動(dòng)相相同。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：采用外標(biāo)法定量，其中，步驟（1)中，取 甲卡西酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，依次稀釋成質(zhì)量濃度分別為0. 5、0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、0. 001、 0. 0005mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：在步驟（2)中：稱取樣品，加入流動(dòng)相溶 解，振蕩，離心，離心后取上清液，加入流動(dòng)相，振蕩均勻后即得到樣品溶液；流動(dòng)相與步驟 (3)中的流動(dòng)相相同。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟⑶中，色譜柱規(guī)格為 250mmX4. 6mm, 5ym，柱溫為 35°C，檢測波長 254nm。9. 根據(jù)權(quán)利要求1至7任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，流動(dòng)相使用前經(jīng)0. 45ym微 孔過濾膜過濾后放入超聲波清洗器中超聲10~15min，充分脫出流動(dòng)相中的氣體。10. 根據(jù)權(quán)利要求5或7任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在向樣品中加入流動(dòng)相之 前，使用苯甲醚、二氯甲烷和乙醚的混合溶液萃取樣品中的甲卡西酮，苯甲醚、二氯甲烷和 乙醚的體積比為5:2:1. 5,向分離出的有機(jī)相中加入HCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸，除去有 機(jī)相后將剩余物置于35°C快速濃縮儀上濃縮至干。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種采用高效液相色譜法測定樣品中甲卡西酮含量的方法，包括如下步驟：(1)工作液的配制；(2)樣品溶液的配制；(3)檢測條件的設(shè)置；(4)甲卡西酮樣品含量的測定。本發(fā)明采用反相色譜等度洗脫，在12分鐘內(nèi)完成分析；其具有高效、準(zhǔn)確的檢測效果，可用于甲卡西酮樣品含量的測定，為司法部門定罪量刑提供技術(shù)支持。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號(hào)】CN105181823
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510253171
【發(fā)明人】常穎, 高利生, 鄭琿, 張春水, 劉克林, 趙陽, 賀劍鋒, 翟晚?xiàng)?
【申請(qǐng)人】公安部物證鑒定中心
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年5月18日