一種銀杏內(nèi)酯b殘留溶劑的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥，具體涉及中藥提取物殘留溶劑的檢測方法，尤其涉及一種檢測 銀杏內(nèi)酯B殘留溶劑的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物的葉子，主要化學成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物， 具有重要的藥用價值和市場價值，市場上已開發(fā)了許多銀杏葉系列產(chǎn)品。隨著社會的進步 和經(jīng)濟的發(fā)展，銀杏葉萜類內(nèi)酯的重要性越來越受人們的關(guān)注，其中銀杏內(nèi)酯B作為天然 特異性血小板活化因子（PAF)拮抗劑，對治療腦卒中具有顯著的療效，其藥理作用和治療 價值已引起制藥工業(yè)的極大興趣。銀杏內(nèi)酯B是以銀杏葉或銀杏葉提取物為原料，經(jīng)提取 分離純化而得到，但是，由于使用有機溶劑后的殘留溶劑含量過高，影響藥品的穩(wěn)定性，也 會對人體產(chǎn)生致崎、致癌作用。因而，多國藥典均有控制產(chǎn)品中殘留溶劑的相關(guān)要求，銀杏 內(nèi)酯B作為藥用原料也需要對殘留溶劑進行檢測，加以監(jiān)控，使其符合規(guī)定。
[0003]目前報道的有機溶劑殘留的檢測方法均為部分相關(guān)溶劑檢測，如檢測羅紅霉素 中甲醇的殘留量（《毛細管氣相色譜法測定羅紅霉素中的溶劑殘留》，王建等，醫(yī)藥導報， 2010, 29(3) :369);檢測銀杏內(nèi)酯B中甲醇和乙酸乙酯的殘留量（《銀杏內(nèi)酯B中有機溶 劑殘留的毛細管GC測定》，張現(xiàn)濤等，今日藥學，2011，21(7) :400);檢測雙氫青蒿素哌喹 片中乙醇的殘留量（《頂空氣相色譜法測定雙氫青蒿素哌喹片中乙醇殘留含量》，木書林， 2013, 32 (9) :504)。也有報道使用氣相方法同時檢測原料中多種溶劑殘留量的方法，如《毛 細管氣相色譜法測定13種有機溶劑殘留》，陸燁等，復旦學報（醫(yī)學版）2013(3)，40(2): 222。提供了檢測合成原料氟代紫杉醇的13種殘留溶劑，但該方法中使用二甲基亞砜 (DMSO)作為溶劑，進樣方式是頂空進樣，對儀器要求較高，而且，DMSO雖然可以溶解樣品， 但當溫度較低時，DMSO發(fā)生凝固，無法準確取樣檢測，限制其應用。目前未見報道同時檢測 銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品中甲醇、乙醇和乙酸乙酯殘留量的方法，因而需要進一步研究設計。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究設計一種能夠簡便、快 速、準確的檢測銀杏內(nèi)酯B溶劑殘留的分析方法。
[0005] 本發(fā)明提供了一種銀杏內(nèi)酯B殘留溶劑的檢測方法。
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案：取銀杏內(nèi)酯B適量加入乙腈超聲溶解，配成濃度為40mg/ ml的溶液，過0. 45 μ m濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另外，分別精密稱取色譜級甲醇、乙 醇、乙酸乙酯適量，加乙腈制成每ImL各含0. 3mg、0. 5mg、0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶 液，直接進樣注入氣相色譜儀檢測，以外標法定量計算出供試品甲醇、乙醇和乙酸乙酯的含 量，最終計算出銀杏內(nèi)酯B中各有機溶劑殘留量。
[0007] 具體的，本發(fā)明方法包括以下步驟：
[0008] (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱為6% -氰丙基苯基-94% -二甲基硅氧 烷共聚物毛細管柱，載氣為高純氮氣，檢測器為氫離子火焰（FID)檢測器，對照品溶液和供 試品溶液直接進樣，進樣口溫度150-200°C，檢測器溫度200-280°C，柱溫30-200°C，程序升 溫，甲醇、乙醇、乙酸乙酯峰分離度大于1. 5,各峰對稱性良好；
[0009] ⑵對照品溶液的制備：分別精密稱取色譜級甲醇、乙醇、乙酸乙酯適量，加乙腈 制成每ImL各含約0. 3mg、0. 5mg、0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液；
[0010] (3)供試品溶液的制備：取銀杏內(nèi)酯B適量，精密稱定，加乙腈超聲使溶解，使銀杏 內(nèi)酯B濃度為40mg/ml，搖勻，以0. 45 μ m濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0011] (4)測定：分別精密吸取對照品溶液，供試品溶液各適量，直接進樣注入氣相色譜 儀，測定，外標法計算甲醇、乙醇和乙酸乙酯的含量，最終計算出銀杏內(nèi)酯B中各有機溶劑 殘留量。
[0012] 本發(fā)明方法所述步驟（1)色譜柱為6% -氰丙基苯基-94% -二甲基硅氧烷共聚 物毛細管柱，柱長30m，柱內(nèi)徑0. 53mm，薄膜厚度3 μ m。
[0013] 所述進樣口溫度160°C~190°C，柱溫為35°C~180°C，程序升溫35°C保持lOmin， 再以20°C /min的升溫速率升至180°C，保持3min ;檢測器溫度為230°C~260°C
[0014] 本發(fā)明人對于本檢測方法的各種重要條件經(jīng)過了研究、設計和改進試驗，突破了 本領(lǐng)域的常規(guī)：（1)溶劑的選擇：氣相檢測通常會使用二甲基亞砜（DMSO)作為溶劑，雖然 DMSO可以溶解大多數(shù)樣品，但環(huán)境溫度較低時，DMSO凝固，無法準確取樣檢測，限制其應 用。本發(fā)明人選擇乙腈作為溶劑，不僅能溶解樣品，而且還不受溫度影響，樣品處理簡單方 便。（2)柱溫箱條件的選擇：通常提高柱溫可以使保留時間減少，加快分析速度，使樣品中 的組分完全流出，但是分離效果不好。而降低柱溫，樣品有較大的分配系數(shù)，選擇性高，有利 于分離，但是溫度過低，容易引起峰形拖尾或前伸，并且分析時間長。本發(fā)明人采用根據(jù)固 定液的使用溫度極限和樣品組分沸點來調(diào)節(jié)柱溫，使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯達到和溶劑峰 乙腈的分離。并且通過由低到高改變柱溫，研究相應柱溫下的分離度，選擇了比較理想的柱 溫，同時將每個樣品分析時間控制在20分鐘以內(nèi)，使其達到簡便、快速、準確的效果。
[0015] 這樣，本發(fā)明采用毛細管氣相色譜法同時測定甲醇、乙醇和乙酸乙酯殘留量，以乙 腈作為溶劑，就可以完全溶解樣品，且不受溫度影響，樣品處理簡單方便，直接進樣檢測溶 劑殘留，結(jié)果準確可靠。
[0016] 本發(fā)明檢測方法對于用同樣方法制備但是在制備中溶劑的加入量不相同得到的 銀杏內(nèi)酯B進行了檢測，準確地檢測到銀杏內(nèi)酯B中各有機溶劑殘留量。（見實施例1-3)
[0017] 本發(fā)明檢測方法經(jīng)方法學驗證表明，甲醇、乙醇、乙酸乙酯和溶劑峰乙腈的分離效 果良好，在檢測限、定量限、線性、穩(wěn)定性、加樣回收率等方法學的考察方面，均符合定量測 定的要求。適于工業(yè)化生產(chǎn)使用，有較大的應用價值。
【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明。實施例以舉例的方式給出，并不 構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
[0019] 以下實施例所用原料和試劑通過市售得到。
[0020] 實施例1樣品檢測及檢測方法重復性實驗
[0021] 銀杏內(nèi)酯B的制備：
[0022] 取市售銀杏葉提取物浸膏（含量標準為總內(nèi)酯含量彡6%，總黃酮含量彡24%，銀 杏酸含量< lOppm) 1000g，用水2000mL稀釋至0· 5g生藥/mL，加入1000 ml乙酸乙酯進行萃 取，共萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，于45°C減壓濃縮至無溶劑，加入10%乙醇100mL使 濃縮液濃度約為0. 5g/mL，濕法裝柱，使藥液通過MCI樹脂，先用30%乙醇洗脫樹脂除雜，以 除去水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫3BV，洗脫速度lBV/h，再用40 %乙醇以同樣流速洗脫樹 月旨，收集后38￥洗脫液，于45°(：減壓濃縮至18/1111的浸膏，加入50〇111170%甲醇，加熱至溶 解，4°C冰箱靜置24h析晶，析出晶體后，抽濾，得到銀杏內(nèi)酯B的粗品2. 07g，將得到的銀杏 內(nèi)酯B粗品加80%乙醇50ml，加熱至溶解，于4°C靜置24h，析出結(jié)晶，抽濾，結(jié)晶于80°C烘 干最終得到銀杏內(nèi)酯BI. 86g。檢測銀杏內(nèi)酯B中甲醇、乙醇和乙酸乙酯溶劑殘留。
[0023] (1)供試品溶液的制備：取銀杏內(nèi)酯B0.2g，精密稱定，平行取6份樣品，加乙腈 5ml超聲使溶解，使銀杏內(nèi)酯B濃度為40mg/ml，搖勻，以0. 45 μ m濾膜過濾，取續(xù)濾液，作為 供試品溶液；
[0024] (2)對照品溶液的制備：分別精密稱取色譜級甲醇、乙醇、乙酸乙酯適量，加乙腈 制成每ImL各含約0. 3mg、0. 5mg、0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液；
[0025] (3)測定：
[0026] 儀器：島津GC-2010氣相色譜儀，島津GCsolution工作站，上海全浦QPT-300G型 氮氫空一體機，梅特勒·托利多AL204電子天平。
[0027] 色譜條件：色譜柱為6% -氰丙基苯基-94% -二甲基硅氧烷共聚物毛細管柱，柱 長30m，柱內(nèi)徑0. 53_，薄膜厚度3 μπι;載氣為高純氮氣；檢測器為氫離子火焰（FID)檢測 器；進樣口溫度190°C，柱溫35-180°C，程序升溫，35°C保持lOmin，以20°C /min的升溫速率 升至180°C，保持3min ;檢測器溫度250°C。
[0028] 測定方法：分別精密吸取對照品溶液，供試品溶液各0. 5 μ L，直接進樣注入氣相 色譜儀，測定，外標法計算甲醇、乙醇和乙酸乙酯的含量，最終計算出銀杏內(nèi)酯B中各有機 溶劑殘留量。
[0029] 表1供試品甲醇、乙醇和乙酸乙酯殘留量（％)的檢測結(jié)果及方法重復性結(jié)果
CN 105181842 A 說明書 4/10 頁
[0032] 結(jié)果表明：銀杏內(nèi)酯B的6個平行樣品中，乙酸乙酯殘留量太低，未檢出，甲醇、乙 醇殘留量均值分別為〇. 103%，0. 132%，RSD分別為1.3%，1.6%，均小于2%，表明本方法 重復性好，準確度高，可用于銀杏內(nèi)酯B溶劑殘留的檢測。
[0033] 實施例2銀杏內(nèi)酯B樣品檢測
[0034] 銀杏內(nèi)酯B的制備：取市售銀杏葉提取物浸膏（含量標準為總內(nèi)酯含量多6%，總 黃酮含量多24%，銀杏酸含量< IOppm) 1000g，用水溶液稀釋至0· 5g生藥/mL，加入1000 ml 乙酸乙酯進行萃取，共萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，于45°C減壓濃縮至無溶劑，加入 10%乙醇100mL使?jié)饪s液濃度為0. 5g/mL，濕法裝柱，使藥液通過MCI樹脂，先用30%乙醇 洗脫樹脂除雜，以除去水溶性和大極性雜質(zhì)，共洗脫3BV，洗脫速度lBV/h，再用40%乙醇以 同樣流速洗脫樹脂，收集后3BV洗脫液，于45°C減壓濃縮至lg/ml的浸膏，加入500ml 80% 甲醇，加熱至溶解，4°C冰箱靜置24h析晶，析出晶體后，抽濾，得到銀杏內(nèi)酯B的粗品I. 76g， 將得到的銀杏內(nèi)酯B粗品加70%乙醇