H = 7. 4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10 的水溶液；取 2mL 的 DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI 的 DMS0 溶液加到一個熒光比色皿中，取HC10的溶液，逐漸用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，邊加樣 邊在熒光分光光度儀上檢測（激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm)，隨著HC10的加入，465nm處熒 光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。熒光發(fā)射圖見圖1。
[0024] 實(shí)施例2
[0025] 配制pH = 7. 4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10, 200mM H202, A, N0, 02 ?，H0 ?，C102，I04，0N00，R00 ?，CN，HS，HS03 and Cys 的水溶液；在14個熒光比色皿中，各加入2mL的DMSO/HEPES (v/v，3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI的DMSO溶液，再分別加入1摩爾當(dāng)量的HC10,以及100摩爾當(dāng)量的各種分析物：H20 2, ％，N0, 02 ?，H0 ?，C102，I04，0N00，R00 ?，CN，HS，HS03 and Cys 在熒光分光光度儀上檢測 (激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm)，繪制不同分析物對應(yīng)的465nm處熒光強(qiáng)度的柱狀圖，（見圖 2)。HC10使得FHMMI的熒光強(qiáng)度由63. 3變到3751，其它的分析物基本沒有引起FHMMI熒 光強(qiáng)度的變化。
[0026] 經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，其它分析物不干擾體系對HC10的測定。
[0027] 實(shí)施例3
[0028] 配制pH = 7. 4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10 的水溶液；取 2mL 的 DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI 的 DMS0 溶液加到一個熒光比色皿中，分別在加入0、10、20、30、40、50 y L的HC10溶液時，在熒光分 光光度儀上測定465nm(激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm)對應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為63. 32、588. 1、 1219、1837、2585、3156,以HC10濃度為橫坐標(biāo)，以相對熒光強(qiáng)度F - F。為縱坐標(biāo)繪制圖，F(xiàn)。 =63. 32,得到HC10濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F - FQ= 63. 06c，c的單位為yM ;
[0029] 實(shí)施例4
[0030] 配制pH = 7. 4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM FHMMI的DMS0溶液，配 制 2mM HC10 的水溶液；取 2mL 的 DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI 的 DMS0 溶液加到一個熒光比色皿中，取HC10的溶液31 yL，用微量進(jìn)樣器加到此比色皿中，同時在 熒光光譜儀上測定465nm的對應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為2056 (激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm)，相對 熒光強(qiáng)度F - FQ= 1992. 94,通過實(shí)施例4的線性回歸方程，求得c = 31.60X 10 6m〇l/L， 偏差為1.9%。見圖4。
[0031] 實(shí)施例5
[0032] 取 Vanilline (0? 304g, 2mmol)和 hexamethylenetetramine (1. 2equiv.)溶于 TFA， 將體系加熱至l〇〇°C回流4h后向體系中加入lOmL 3M的HC1溶液，繼續(xù)于100°C回流lh。冷 卻至室溫后用CH2Cl2(3X20mL)萃取，有機(jī)相經(jīng)干燥、蒸干后得到4-hydroxy-5_methoxyiso phthalaldehyde 用于下一步反應(yīng)。取 4-hydroxy-5_methoxyisophthalaldehyde (0? 18g, lm mol)、trimethylamine(lequiv.)和 1, 4-dimethylpyridin-1-ium iodide(0. 235g, lmmol) 溶于20mL乙醇后于90°C回流14h后冷卻至室溫，將溶劑減壓蒸干。所的固體經(jīng)柱色譜分離 (展開劑：乙醇/甲醇，100%~50%)得到產(chǎn)品？腿11。
[0033] 4匪R (DMS0-d6, 300MHz) : 3. 64 (s，3H)，4. 09 (s，3H)，6. 80 (s，1H)，7. 47 (s，1H) ,7. 60(d, 1H, J = 15. 6), 7. 87(d, 1H, J = 6. 3), 7. 99 (d, 1H, J = 15. 9), 8. 47 (d, 1H, J = 6. 3)，9. 35 (s, 1H)(圖 5a) JC 匪R (DMS0-d6, 75MHz) : 45. 4, 54. 4, 115. 0, 117. 5, 120. 7, 1 42. 1，143. 2, 153.0, 154. 8, 171. 6, 186. 5(圖 5b). Crystal data for C16H16N03I:crystal size:0. 14X0. 11 X0. 08mm3, space group Pnma. a = 6.385(13)A, b= 16.788(4)A,c = 7.974(16)A,V = 854. 1 (16) J3, Z = 2, T = 173K, 0nax= 27. 48° , 9558reflections measured, 3768unique (Rint= 0. 0317) Final residual for 25lparameters and 3768reflections with I>2 〇 (I) :&= 0? 0353, wR2= 0? 0915and G0F = 1. 084(圖 5c) 〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種熒光檢測次氯酸的試劑：特征在于它是一種吡啶鹽衍生物，名稱為： (E)-4-(5-formyl-2-hydroxy-3-methoxystyryl)-1-methylpyridin-l-iumiodide， 縮寫為2. -種檢測次氯酸的方法：其特征在于，步驟為： (1)、配制pH=7. 4、濃度為IOmM的HEPES緩沖溶液，配制2mM FHMMI的DMSO溶液，配 制2mMHClO的水溶液； (2)、按體積比40:1，將體積比3:1、pH 7. 4的DMS0/HEPES溶液和FHMMI的DMSO溶液 加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm，隨著待 測樣HClO的加入，465nm的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)； (3)、取2mL的體積比3:1、pH 7. 4的DMS0/HEPES溶液、50 y LFHMMI的DMSO溶液加 到另一個熒光比色皿中，分別加入體積為〇、10、20、30、40、50 y L的HClO溶液時，在熒光分 光光度儀上測定465nm，激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm，對應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為63. 32、588. 1、 1219、1837、2585、3156,以HClO濃度為橫坐標(biāo)，以相對熒光強(qiáng)度F-F。為縱坐標(biāo)繪制圖，F(xiàn)。 =63. 32,得到HClO濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F-F。=63. 06c，c的單位為yM ; (4)、取2mL的DMSO/HEPES (v/v, 3: 1，pH 7. 4)溶液、50 y L FHMMI的DMSO溶液加入熒光 比色皿中，用微量進(jìn)樣器吸取VyL待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光 分光光度儀上檢測（激發(fā)：373nm，狹縫：5nm/5nm)，將測得的熒光強(qiáng)度代入步驟（3)的線性 回歸方程，得到濃度c，待測樣品次氯酸的濃度Cwiw =2000XcX10 6/V，單位M。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種熒光檢測次氯酸的試劑和方法。本發(fā)明提供的檢測次氯酸的試劑，是一種吡啶鹽類衍生物FHMMI((E)-4-(5-formyl-2-hydroxy-3-methoxystyryl)-1-methylpyridin-1-ium？iodide)。本發(fā)明提供的檢測HClO的方法，是基于吡啶鹽類衍生物FHMMI，在DMSO/HEPES(v/v,3:1,pH7.4)溶液中定量地檢測次氯酸的含量。該檢測方法，對次氯酸顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN105203514
【申請?zhí)枴緾N201510611238
【發(fā)明人】陰彩霞, 岳永康, 霍方俊
【申請人】山西大學(xué)
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月23日