例對本發(fā)明進行進一步說明。
[0014] 實施例1 一種傳統(tǒng)的PNP-NAG法檢測試劑，所述試劑R1和試劑R2的組成如下： R1試劑： 甘氨酸緩沖液 30mmol/L 對硝基苯-0-D-氨基葡萄糖苷 16mmmol/L 疊氮鈉 lg/L R2試劑： pH 10. 2的硼砂緩沖液. 100 mmol / L 疊氮鈉 lg/L。
[0015] 實施例2 一種分析靈敏度高的NAG檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1和試劑R2的 組成如下： R1試劑組成： MES (2- (N-嗎啡啉）乙磺酸）緩沖液 30mmol/L 5- (4- (3-甲基-苯乙烯）-繞丹寧-3-乙酸氨基-N-乙酰氨基-0-D-葡萄糖苷 5. 3mmol/L 環(huán)己二胺四乙酸（CDTA) 5mmol/L 抗壞血酸氧化酶 1KU/L 氯化鉀 l〇g/L 氯化鋰 13. 5g/L 疊氮鈉 2g/L 十六烷基三甲基溴化銨 lg/L 3_磺丙基十四烷基二甲基甜菜堿 5g/L R2試劑組成： AMP 100mmol/L 曲拉通405 3mL/L 疊氮鈉 2g/L。
[0016] 實施例3 一種分析靈敏度高的NAG檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1和試劑R2的 組成如下： R1試劑組成： MES 緩沖液 30mmol/L 5- (4- (3-甲基-苯乙烯）-繞丹寧-3-乙酸氨基-N-乙酰氨基-0-D-葡萄糖苷 5. 3mmol/L 環(huán)己二胺四乙酸（CDTA) 10mmol/L 抗壞血酸氧化酶 5KU/L 氯化鉀 20g/L 氯化鋰 18g/L 疊氮鈉 5g/L 十六烷基三甲基溴化銨 2g/L 3_磺丙基十四烷基二甲基甜菜堿 10g/L R2試劑組成： AMP 100mmol/L 曲拉通405 5mL/L 疊氮鈉 5g/L。
[0017] 分別將實施例1、實施例2和實施例3所得試劑在具有雙試劑功能的全自動生化分 析儀檢測使用，利用速率法進行測定。
[0018] 1)檢測使用方法：將試劑R1和R2按照3:1的比例放置到對應(yīng)的試劑位上，在樣 品盤的對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標準品和樣本，操作如表1 :
計算：一種分析靈敏度高的NAG含量（U/L) =( A A測定+ A A標準）XC標準。
[0019] 2)干擾性試驗：取新鮮混合血清，分成2等份，然后將每等份再分成6等份，加入不 同的干擾物質(zhì)，使其在血清中的濃度達到表2的要求。然后分別用實施例2和實施例3所 得試劑，同時對比測定血清中NAG的含量，加入不同干擾物質(zhì)后各組的測定結(jié)果見表2。相 對偏差（%)=(干擾樣本的測定均值一無干擾物質(zhì)的樣本的測定均值）/無干擾物質(zhì)的測定 均值X 100%。
[0020] 由表2可以看出，實施例2和3的試劑在抗壞血酸彡1500 ymol/L、膽紅素彡4. 6mg/L、 丙酮酸<20mg / L、尿酸< 800iimol / L、葡萄糖<50mmol/L對測試結(jié)果沒有明顯干擾， 因而本試劑的抗干擾性能較好。
[0021] 3)相關(guān)性實驗：利用實施例1、2和實施例3中的配方配制試劑，與酶聯(lián)免疫吸附試 驗檢測血清NAG進行對照檢測，同時檢測了 20個臨床血清樣本，檢測結(jié)果如表3所示。并 獲得了 3種試劑分別與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測結(jié)果的相關(guān)性曲線(如圖1-圖3所示)。
[0022] 表3實施例1-3試劑與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清對比檢測結(jié)果

通過檢測結(jié)果顯示，實施例1試劑和實施例2以及實施例3與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測 血清的NAG相關(guān)系數(shù)r分別為0.9848、0.9971、0.9967,說明了實施例2和實施例3中的試 劑與酶聯(lián)免疫吸附試驗的相關(guān)性要比實施例1與酶聯(lián)免疫吸附試驗的相關(guān)性要好很多。
[0023] 4)靈敏度實驗： 分別將實施例1、實施例2、實施例3與酶聯(lián)免疫吸附試驗對9個不同濃度的樣本進行 檢測，樣本濃度由低到高，分別記錄對比檢測結(jié)果，如表4所示。
[0024] 表4實施例1-3與酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測不同濃度血清對比檢測結(jié)果
通過表4中的內(nèi)容可以看出，實施例1中的對于低值的樣本檢測結(jié)果非常的不準確，甚 至出現(xiàn)0值，而實施例2與實施例3和酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測結(jié)果較好，這說明實施例2和 實施例3檢測試劑有非常高的靈敏度和準確度。
【主權(quán)項】
1. 一種分析靈敏度高的N-乙酰-13-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑，其特征在于，包括試 劑Rl和試劑R2， 所述試劑Rl的組成如下： MES緩沖液 30mmol/L 底物 5. 3mmol/L 金屬離子螯合劑 .Smmol/T~10mmol/L 抗壞血酸氧化酶 1KU/L-5KU/L 氯化鉀 10g/L-20g/L 氯化鋰 13. 5g/L-18g/L 疊氮鈉 2g/L-5g/L 十六烷基三甲基溴化銨 lg/L_2g/L 3-磺丙基十四烷基二甲基甜菜堿 5g/L-10g/L; 所述試劑R2的組成如下： AMP緩沖液 lOOmmol/L 曲拉通 405 3mL/L-5mL/L 疊氮鈉 2g/L-5g/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑，其特征在于，所述MES緩沖液為25°C，pH為4. 6的 MES緩沖液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑，其特征在于，所述底物為5-[4-(3-甲氧基-苯甲 烯-繞丹寧）]-3-乙酸銨-N-乙酰氨基-P-D-葡萄糖苷。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑，其特征在于，所述金屬離子螯合劑為環(huán)己二胺四 乙酸。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑，其特征在于，所述AMP緩沖液為25°C，pH為9. 85 的AMP緩沖液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種分析靈敏度高的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶檢測試劑。本發(fā)明試劑包括試劑R1和試劑R2，本發(fā)明以人工合成物5-（4-（3-甲基-苯乙烯）-繞丹寧-3-乙酸氨基-N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷作為反應(yīng)底物，提高了試劑的靈敏度；試劑使用了MES(2-(N-嗎啡啉）乙磺酸)緩沖液和AMP（2-氨基-2-甲基-1-丙醇）兩種緩沖液，在保證緩沖能力的同時還能夠促進NAG酶的催化作用，有效提高強堿性環(huán)境，保證了顯色的效率；通過合理搭配使用組分使試劑整體靈敏度、特異性和準確性均較高，有利于在市場中進一步的推廣使用。
【IPC分類】G01N21/78
【公開號】CN105203533
【申請?zhí)枴緾N201510582641
【發(fā)明人】郁東, 羅維曉, 譚柏清, 甘宜梧, 謝清華
【申請人】郁東
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月14日