也會存在誤差。由此， 根據(jù)本發(fā)明實施例的檢測食品中維生素K1含量的方法可以進一步具有更簡便、快速的操 作或者更強的準(zhǔn)確性。
[0055] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，色譜檢測是按照下列條件進行的：色譜柱：C18色譜柱；鋅 還原柱；檢測波長：激發(fā)波長為243nm，發(fā)射波長為430nm ;流動相：將900毫升的甲醇、100 毫升的二氯甲烷、〇. 3毫升的冰醋酸、1. 5克的氯化鋅以及0. 5克的無水乙酸鈉混合，并用濾 膜過濾；流速：lmL/min ;進樣量：10yL ;柱溫：30°C。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，C18色譜柱的 尺寸為250mmX4. 6mmX5iim。發(fā)明人經(jīng)過大量實驗優(yōu)化得到上述最優(yōu)色譜檢測條件。由 此，根據(jù)本發(fā)明實施例的檢測食品中維生素K1含量的方法可以進一步具有更簡便、快速的 操作或者更強的準(zhǔn)確性。
[0056] 綜上，根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明檢測食品中維生素K1含量的方法具有以下優(yōu) 點的至少之一：
[0057] 1、根據(jù)本發(fā)明的實施例，采用胰脂肪酶對食品中的脂肪進行酶解。酶解反應(yīng)的環(huán) 境，如pH值和溫度，對胰脂肪酶的催化作用影響較小。胰脂肪酶能夠較徹底地通過皂化反 應(yīng)將試樣中的油脂水解成水溶性的脂肪酸鈉鹽，可以有效地避免油脂對脂溶性的維生素K1 的提取造成干擾。
[0058] 2、根據(jù)本發(fā)明的實施例，不在分液漏斗中反復(fù)萃取，而是不轉(zhuǎn)移容器的情況下，直 接在離心管內(nèi)進行萃取，不僅能夠降低分液漏斗的繁瑣操作損失的幾率，還縮短了處理的 時間，提高了工作效率。
[0059] 3、根據(jù)本發(fā)明的實施例，由于采用離心管進行萃取，無需轉(zhuǎn)移容器，所以減少了正 己烷的用量。
[0060] 下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的方案進行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下面的 實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體技術(shù)或條 件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀 器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0061] 試劑、溶液及設(shè)備
[0062] 正己烷、甲醇、二氯甲烷均為色譜純。
[0063] 氯化鋅、無水乙酸鈉為優(yōu)級純。
[0064] 95%乙醇、氫氧化鈉、冰乙酸均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
[0065] 胰脂肪酶。
[0066] 鋅還原柱：將粒度為50 ym~70 ym的鋅粉密集裝入還原柱（50mmX 4. 6mm，不銹 鋼材質(zhì)）中。裝柱時，應(yīng)連續(xù)少量多次將鋅粉裝入柱中，邊裝邊輕輕拍打，以使裝入的鋅粉 緊密。
[0067] 流動相：甲醇900mL，二氯甲燒100mL，冰乙酸0. 3mL，氯化鋅1. 5g，無水乙酸鈉 〇. 5g，溶解后用0. 45 y m濾膜過濾。
[0068] 實施例1
[0069] 在該實施例中，通過下列步驟檢測嬰幼兒配方乳粉樣品中維生素K1含量：
[0070] (1)酶解反應(yīng)：分別稱取同一份維生素K1待測樣本并編號：樣本1為2. 0012g、樣 本2為2. 1000g、樣本3為2. 0521g、樣本4為2. 0852g，同時設(shè)置空白樣本（即為0g)，分別 向每份待測樣本中添加1克胰脂肪酶，并用12毫升30~40攝氏度的溫水溶解試樣，混合 均勻，并置于37攝氏度的恒溫空氣浴振蕩器中振蕩過夜，使其充分酶解，制成脂肪降解物。
[0071](2)皂化反應(yīng)：分別將各待測樣品的脂肪降解物中加入2毫升的10m〇l/L氫氧化 鈉溶液和95%乙醇8毫升，制成皂化產(chǎn)物。
[0072] (3)提?。簩?0毫升的正己烷加入至含有每份待測樣本產(chǎn)生的皂化產(chǎn)物的離心管 中，混合振蕩2min，并將得到的混合物在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，收集上層液。
[0073] (4)將步驟（3)所得到的除上層液以外的混合物與10毫升的正己烷在離心管中重 復(fù)步驟（3)的混合振蕩及離心的操作，收集上層液，并將步驟（3)和（4)所得到的上層液合 并，接著用氮吹儀在40±2攝氏度的溫度下將合并的上層液吹干，并用正己烷將干燥的產(chǎn) 物溶解并定容至1毫升，得到待檢測液。
[0074] (5)檢測：利用高效液相色譜儀對步驟（3)所得到的待檢測液進行檢測，得到色譜 圖圖3,峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的濃度即為待檢測液中維生素K1的含量。其中檢測條件 為：
[0075] 色譜柱：C18色譜柱；鋅還原柱；流動相；檢測波長：激發(fā)波長243nm，發(fā)射波長 430nm ;流速：1. OmL/min ;進樣量：10 y L ;柱溫：30°C。
[0076] 實施例2
[0077] 按照實施例1的方法檢測米粉中維生素K1含量，區(qū)別在于，
[0078] 步驟（1)中，分別稱取同一份維生素K1待測樣本并編號：樣本1為2. 0015g、樣本 2為2. 0009g、樣本3為2. 0021g、樣本4為2. 0231g，同時設(shè)置空白樣本（即為Og)，分別向 每份待測樣品中添加1克胰脂肪酶和〇. 5克淀粉酶，并用12毫升30~40攝氏度的溫水溶 解試樣，混合均勻，并置于37攝氏度的恒溫空氣浴振蕩器中振蕩過夜，使其充分酶解，制成 脂肪降解物。
[0079] 對比例1
[0080] 按照國家標(biāo)準(zhǔn)GB5413. 10-2010法檢測實施例1的樣品中維生素K1含量：
[0081] (1)酶解反應(yīng)：分別稱取同一份維生素K1待測樣本并編號：樣本1為2. 0012g、樣 本2為2. 0123g、樣本3為2. 1113g、樣本4為2. 0219g，同時設(shè)置空白樣本（即為Og)。向每 份待測樣本中加入lg的脂肪酶（購自SIGMA，型號為L1754 Type VII，酶活為彡700units/ mg solid)，混勻后于32~42攝氏度下恒溫空氣浴振蕩器中振蕩過夜，得到脂肪降解物。
[0082] (3)皂化反應(yīng)：將脂肪降解物中加入2ml的10m〇l/L氫氧化鈉溶液和95%乙醇 50ml，制成皂化產(chǎn)物。
[0083] (4)提取：將溶液轉(zhuǎn)入250mL的分液漏斗中，充分混勻，再加入50mL正己烷并充分 振搖2min，靜置分層。放出下層水相于另一個250mL分液漏斗中，留下有機相。然后向水相 中再次加入50mL正己烷再次萃取，合并有機相。用適量蒸餾水洗有機相兩次，然后將有機 相通過無水硫酸鈉脫水過濾到一個500mL的燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上于38~42攝氏度的 溫度下蒸發(fā)至近干，最后定容溶解制成待檢測液。
[0084] (5)按照實施例1的步驟（4)對待檢測液進行檢測，峰面積在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的濃 度即為待檢測液中維生素K1的含量。
[0085] 圖4顯示了根據(jù)該實施例的方法得到的色譜圖。
[0086] 對比例2
[0087] 按照實施例1的方法檢測食品中維生素K1的含量，區(qū)別在于，采用購自購自 SIGMA，型號為Type II，酶活為100~500units/mg protein的脂肪酶酶解處理。
[0088] 實施例3
[0089] 在該實施例中，按照下列步驟繪制維生素K1標(biāo)準(zhǔn)曲線：
[0090] (1)維生素K1標(biāo)準(zhǔn)工作液曲線的配制：
[0091 ] A、維生素K1標(biāo)準(zhǔn)儲備液（2mg/mL)的配制：稱取0? 05g維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品（精確到 0? lmg)，用正己燒溶解并定容至25mL。
[0092] B、維生素K1標(biāo)準(zhǔn)中間液（20 y g/mL)的配制：取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1. OOmL，加正己烷定 容至100mL。
[0093]C、維生素K1標(biāo)準(zhǔn)液的配制：
[0094] 分別吸取 0? 50ml、1. 00ml、1. 50ml、2. 00ml 以及 2. 50ml 的標(biāo)準(zhǔn)中間液（20 y g/mL) 于25ml容量瓶中，分別用正己烷定容至25ml，混勻，得到濃度分別為0. 4 y g/mL、0. 8 y g/ mL、1. 2 y g/mL、1. 6 y g/mL 以及 2. 0 y g/mL