體外診斷試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及試劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種體外診斷試劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國診斷試劑市場規(guī)模為30億-40億元，約占全球市場的1. 14%，年增長速度為 15% -20%。其中，體外診斷所用的試劑在臨床檢驗(yàn)應(yīng)用中已普遍使用，且隨著科學(xué)技術(shù)的 發(fā)展，體外診斷試劑的種類越來越多，用途也越來越廣泛。在體外診斷試劑相關(guān)研發(fā)過程中 除了需要關(guān)注其準(zhǔn)確性和重復(fù)性外，研發(fā)人員同樣需要保證產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)的品質(zhì)，因此 防腐劑的選擇至關(guān)重要。
[0003] 防腐劑是能夠殺滅或抑制微生物，特別是細(xì)菌和真菌生長的化學(xué)物質(zhì)。但是，防腐 劑不是殺菌劑，沒有很強(qiáng)的即時(shí)殺滅效果，只有在足夠濃度并與微生物直接接觸的情況下 才能發(fā)揮作用。
[0004] 優(yōu)良的防腐劑應(yīng)具備以下特性：①加入防腐劑應(yīng)能有效抑制在試劑制備、保存和 使用過程中最有可能污染的一種或多種微生物的生長，防腐劑應(yīng)對(duì)大多數(shù)細(xì)菌、真菌及酵 母有較強(qiáng)的抑制作用；②防腐劑在試劑中應(yīng)有足夠的溶解度，以保證其在兩相或多相體系 中有足夠的溶解度，從而保證其在兩相或多相體系的試劑中具有足夠濃度；③在試劑的有 效期內(nèi)，防腐劑應(yīng)非常穩(wěn)定，不會(huì)因化學(xué)降解或揮發(fā)而降低濃度，防腐劑本身的理化性質(zhì)和 抗微生物性質(zhì)應(yīng)穩(wěn)定，不易受熱和樣品PH值的影響，在長期貯存時(shí)不分解失效、不揮發(fā)、不 與包裝材料起作用；④防腐劑應(yīng)不與試劑中的任何成分發(fā)生反應(yīng)，不會(huì)影響試劑的檢測效 果或防腐劑的效果；⑤使用成本低，容易獲得。
[0005] 目前，國內(nèi)的體外診斷所用試劑中大都采用化學(xué)劑作為防腐劑。最常用的防腐劑 有疊氮鈉、抗生素類藥物以及苯甲酸鈉。疊氮鈉作為防腐劑，雖然能對(duì)試劑起防腐作用，但 同時(shí)對(duì)反應(yīng)也具有一定的抑制作用，使得反應(yīng)速度緩慢，反應(yīng)不能充分進(jìn)行，導(dǎo)致試劑靈敏 度低?？股仡愃幬锔鶕?jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)有著不同的抗菌譜，但是抗菌譜最廣的也僅僅限于大 部分的原核微生物，無法對(duì)全部微生物起效。因此，不能起到完全防腐作用。苯甲酸及其鹽 類的防腐機(jī)理是：苯甲酸鈉親油性大，易穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi)，干擾細(xì)胞膜的通透性， 抑制細(xì)胞膜對(duì)氨基酸的吸收，并抑制細(xì)胞的呼吸酶系的活性，從而達(dá)到防腐的目的。其防腐 最佳PH為2. 5-4. 0,而免疫反應(yīng)的反應(yīng)體系范圍為7. 2-7. 6,故殺菌效果不是很理想。所以， 尋找一種既能起防腐作用又能夠?qū)Ψ磻?yīng)底物不起抑制作用的防腐劑十分必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種體外診斷試劑，它具有既能起防腐作用又不會(huì)對(duì)反應(yīng)底 物起抑制作用的特點(diǎn)。
[0007] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：體外診斷試劑，包括：
[0008] 試劑R1，該試劑R1包含：pH值為7. 0-9. 0的20-100mM緩沖液、0? 01-2. Og/L表面 活性劑、〇. 1-20. 〇g/L穩(wěn)定劑、防腐劑；
[0009] 試劑R2,該試劑R2包含：pH值為7. 0-9. 0的20-80mM緩沖液、可接受含量的包被 有抗體的膠乳顆粒、〇. 1-20.Og/L穩(wěn)定劑、防腐劑；
[0010] 所述防腐劑為大蒜辣素，其濃度為0. 8-2.Og/L。
[0011] 所述包被有抗體的膠乳顆粒為包被有羊抗人P2-mIgG的膠乳顆粒、包被有抗胱 抑素C的膠乳顆粒、羊抗人視黃醇結(jié)合蛋白抗血清中的一種。
[0012] 所述抗體為多克隆抗體。
[0013] 所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、HEPES緩沖液、PIPES緩沖液中的一種。 [0014] 所述體外診斷試劑為免疫比濁法所用試劑。
[0015] 所述免疫比濁法為膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。
[0016] 所述體外診斷試劑為胱抑素C測定試劑、0 2-微球蛋白測定試劑或視黃醇結(jié)合蛋 白試劑。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：既能起防腐作用又不會(huì)對(duì)反應(yīng)底物起抑制作用。本發(fā)明的體外 診斷試劑中的防腐劑采用大蒜辣素（2-propene-1-sulfinothioic acid)，其來自于蒜汁。 眾所周知，蒜汁富含豐富的氨基酸，而氨基酸是常用的蛋白保護(hù)劑，抗體本身就是免疫球蛋 白。所以，蒜汁除了具有良好的防腐功能以外，還對(duì)免疫比濁試劑中的抗體具有保護(hù)作用， 能夠保持抗體原來的活性，使抗體與抗原能夠更快的反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，從而提高 試劑的靈敏度。通過實(shí)驗(yàn)，篩選得到蒜汁所含的大蒜辣素不僅具有良好的防腐效果，而且對(duì) 抗原、抗體的反應(yīng)物無抑制作用。同時(shí)，大蒜辣素是一種具有抗念球菌屬菌、隱球菌屬菌和 須發(fā)癬菌等抗菌作用，是一種殺菌效果很理想的廣譜殺菌劑。作用原理為：大蒜辣素中的二 烯丙基硫醚具有獨(dú)特的生物活性。丙烯基是共輒結(jié)構(gòu)基團(tuán)，它的電負(fù)性較高，可部分的給毗 鄰的硫原子提供電子，使硫的缺電子性減小，活性增大，且能產(chǎn)生一定量的具生物活性的含 硫基團(tuán)，而許多含硫基團(tuán)是已知的有效殺菌劑，能破壞細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成等生理過程。主要 特點(diǎn)就是抗菌廣譜，抑菌力強(qiáng)，且對(duì)革蘭氏陽性菌和陰性菌、霉菌都具有極強(qiáng)的殺滅作用， 可有效地抑制細(xì)菌的生長。
【附圖說明】
[0018] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明：
[0019] 圖1是本發(fā)明的大蒜辣素的結(jié)構(gòu)式；
[0020] 圖2是本發(fā)明的檢測過程示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 實(shí)施例1
[0022] 結(jié)合圖1和圖2所示，本實(shí)施例的操作步驟：在全自動(dòng)生化分析儀上，使用大蒜辣 素作為02-微球蛋白測定試劑的防腐劑，與添加疊氮鈉的02-微球蛋白測定試劑進(jìn)行靈 敏度比對(duì)，并對(duì)儲(chǔ)存在2_8°C的添加大蒜辣素的0 2-微球蛋白測定試劑的性能進(jìn)行考評(píng) 價(jià)，確定添加大蒜辣素是否達(dá)到防腐的效果。
[0023] 實(shí)驗(yàn)組0 2-微球蛋白測定試劑主要組成：
[0024] R1 TRIS緩沖液 20mmol/L 大蒜辣素 0.8g/L 表面活性劑 適量 R2： 包被有羊抗人3 2-mIgG的膠乳顆粒 適量 大蒜辣素 0.8g/L
[0025] 對(duì)照組0 2-微球蛋白測定試劑主要組成：
[0026] MiTRIS緩沖液 20mmol/L 疊氮鈉 〇.95g/L 表面活性劑 同實(shí)驗(yàn)組 R2 包被有羊抗人P2-mIgG的膠乳顆粒 同實(shí)驗(yàn)組 疊氮鈉 0.95g/L
[0027] 使用日立7180全自動(dòng)生化儀，實(shí)驗(yàn)參數(shù)為：主波長546nm，樣本3yl，R1試劑 240 y 1，R2試劑60 y 1，反應(yīng)溫度為37°C。
[0028] 用單位濃度的吸光度差值（A A)表達(dá)試劑的分析靈敏度：用已知濃度的樣品測試 試劑，記錄在試劑規(guī)定的參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變，換算為lmg/L的吸光度差值（A A)，兩 組對(duì)照結(jié)果見表1 :
[0029] 表1:0 2-微球蛋白測定試劑靈敏度結(jié)果比較
[0030]
[0031] 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，使用同等數(shù)量的包被有羊抗人0 2-m IgG的膠乳顆粒，以大 蒜辣素作為防腐劑的試劑靈敏度高于使用疊氮鈉作為防腐劑的試劑。
[0032] 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：在2_8°C貯存條件下，分別在0月，6月，12月，18月，21月對(duì)同一血 清樣本進(jìn)行測定，每個(gè)樣本測定10次，取均值，結(jié)果見表2 :
[0033] 表2:添加大蒜辣素的0 2-