一種糖化血清白蛋白檢測試劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)學檢驗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種糖化血清白蛋白檢測試劑及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖化血清白蛋白（glyecatedalbumin，GA)是葡萄糖通過非酶促糖基化反應(yīng)與血 漿中白蛋白結(jié)合形成的酮胺類化合物。糖化血清白蛋白值可以反映糖尿病患者檢測前2-3 周的平均血糖水平，與血糖監(jiān)測的金標準HbAK相比，GA可以反映血糖短期波動的情況，可 以更準確的反映糖尿病患者的血糖情況。良好的血糖控制能有效延緩糖尿病、慢性并發(fā)癥 的發(fā)生和發(fā)展。因此，糖化血清白蛋白的測定在糖尿病的診斷、近期監(jiān)控和療效評價方面均 具有重要的意義。
[0003] 在上世紀80年代，日本學者就研發(fā)了高壓液相離子交換法（HPLC法)進行GA測定。 雖然HPLC法測定GA可準確檢測糖尿病患者短期血糖控制的總體水平，但是該測定方法在 當時的價格較高，處理樣本量小，不利于臨床常規(guī)的開展和應(yīng)用。接著美國研制出一種特異 性較高的糖化血清白蛋白的測定方法，該檢測方法是一種固體酶法，解決了當時檢測糖化 血清白蛋白價格高的問題。但是，該檢測方法操作繁瑣，檢測時需要復溶，而且測定的結(jié)果 重復性較低，大大的限制了該檢測試劑的應(yīng)用。
[0004] 近年來，隨著對糖化血清白蛋白檢測的深入研究，為了更方便、快捷的檢測出糖化 血清白蛋白的濃度，學者們研究出了 一種液態(tài)酶法檢測的糖化血清白蛋白的檢測方法，該 液態(tài)酶法是一種簡單、快速、靈敏、準確定量的檢測方法，而且該檢測方法的測定結(jié)果準確 高、重復性好，是一種較為理想的糖化血清白蛋白的檢測方法。
[0005] 中國專利申請201410401260.X公開了一種穩(wěn)定的糖化白蛋白檢測試劑盒，該試 劑盒由試劑R1、試劑R2和試劑R3組成，所述試劑R1主要由緩沖液、糖化氨基酸氧化酶、白 蛋白蛋白酶、過氧化物酶、過氧化氫酶、4-氨基安替比林和穩(wěn)定劑組成；所述試劑R2主要 由緩沖液、白蛋白蛋白酶、過氧化物酶、色原和穩(wěn)定劑組成；所述試劑R3主要由緩沖液、溴 甲酚綠和表面活性劑組成。該試劑是一種簡單、快速、靈敏、準確的檢測試劑，而且該試劑穩(wěn) 定性高，有利于延長檢測試劑的保質(zhì)期。但是，該檢測試劑中的溴甲酚綠可以與非白蛋白類 蛋白質(zhì)結(jié)合，影響血清白蛋白的檢測濃度，從而導致檢測結(jié)果誤差較大，影響診斷結(jié)果，不 利于該試劑的推廣和應(yīng)用。
[0006] 因此，研究和發(fā)開出一種穩(wěn)定性高，檢測結(jié)果誤差小，檢測結(jié)果重復性高的糖化血 清白蛋白檢測試劑是目前亟需解決的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)中糖化血清白蛋白檢測試劑存在檢測結(jié)果準確性差、重復性低 的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種糖化血清白蛋白檢測試劑及其應(yīng)用，以解決上述問題。
[0008] 本發(fā)明提供了一種糖化血清白蛋白檢測試劑，包括試劑R1、試劑R2和試劑R3,所 述試劑R1包括以下組分： MES緩沖液10-60mmo1 /L、糖化氨基酸氧化酶2-15U/ml、蛋白酶5-1OU/ml、氯化鈉 20-50μmol/L和防腐劑 0·Ι-lg/L; 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液 10-60mmol/L、N，N-雙（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二鈉鹽l-10mmol/L、 4-氨基安替吡啉5-20mmol/L、過氧化物酶l-8U/ml、多元醇5-10mg/ml、烷基聚葡萄糖苷 10-30mmol/L和防腐劑 0·Ι-lg/L; 所述試劑R3包括以下組分： 醋酸鹽緩沖液20-50mmol/L、溴甲酚紫2-15mmol/L、烷基聚葡萄糖苷30-80mmol/L和防 腐劑 0. 1-lg/L。
[0009] 優(yōu)選地，所述的糖化血清白蛋白檢測試劑包括試劑R1、試劑R2和試劑R3,所述試 劑R1包括以下組分： MES緩沖液40mmol/L、糖化氨基酸氧化酶8U/ml、蛋白酶6U/ml、氯化鈉30μmol/L和防 腐劑 0. 2g/L; 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液40mmol/L、N，N-雙（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二鈉鹽4mmol/L、4-氨基安 替P比啉10mmol/L、過氧化物酶4U/ml、多元醇8mg/ml。烷基聚葡萄糖苷20mmol/L和防腐劑 〇· 2g/L; 所述試劑R3包括以下組分： 醋酸鹽緩沖液30mmol/L、溴甲酸紫5mmol/L、烷基聚葡萄糖苷50mmol/L和防腐劑0. 2g/L〇
[0010] 進一步地，所述防腐劑為proclin300。所述的proclin300具有優(yōu)越的兼容性、穩(wěn) 定性和低毒性的優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用于診斷試劑或產(chǎn)品中控制微生物含量的高效滅菌劑，可 以有效的延長檢測試劑的保質(zhì)期。
[0011] 進一步地，所述多元醇為乙二醇。
[0012] 進一步地，所述醋酸鹽緩沖液的pH值為4. 5-5. 5,所述醋酸鹽緩沖液的pH值優(yōu)選 為 4. 9。
[0013] 本發(fā)明的MES緩沖液是2-嗎啉乙磺酸（MES)緩沖液，2-嗎啉乙磺酸的分子式 為C6H13N04S，CAS號為4432-31-9。N，N-雙（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二鈉鹽的分子式為 C15H23NNa206S2,CAS號為 127544-88-1。
[0014] 本發(fā)明的檢測試劑添加的氯化鈉可以有效的保持糖化氨基酸氧化酶和蛋白酶的 構(gòu)象，維持其活性，保證試劑檢測結(jié)果的準確性。多元醇是分子中含有三個或三個以上羥基 的醇類，可以提高檢測試劑的穩(wěn)定性。烷基聚葡萄糖苷是一種非離子表面活性劑，具有殺菌 性能強、配伍性好和提高酶活性的優(yōu)點，可以有效的提高過氧化物酶的活性，提高試劑的穩(wěn) 定性。
[0015] 本發(fā)明提供的糖化血清白蛋白檢測試劑檢測糖化血清白蛋白（GA)的原理：在樣 本中先加入糖化氨基酸氧化酶，將內(nèi)源性糖化氨基酸變成葡萄糖酮醛、氨基酸和過氧化氫 除去；然后在處理液中，加入蛋白酶，將糖化血清白蛋白反應(yīng)生成糖化氨基酸，接著加入糖 化氨基酸氧化酶將糖化氨基酸生成葡萄糖酮醛、氨基酸和過氧化氫，在生成的過氧化氫的 環(huán)境下，N，N-雙（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二鈉鹽和4-氨基安替吡啉可以定量變換成藍紫 色色素。通過測定該藍紫色色素的吸光度從而計算出糖化血清白蛋白的濃度。
[0016] 本發(fā)明提供的糖化血清白蛋白檢測試劑檢測血清白蛋白（ALB)的原理：在pH為 4. 5-5. 5的環(huán)境中，溴甲酚紫與血清白蛋白結(jié)合形成綠色復合物，在600nm波長處的吸光度 與血清白蛋白濃度成正比，與同樣處理的血清白蛋白標準比較，可計算樣本血清中的白蛋 白濃度。
[0017] 糖化血清白蛋白（GA)值（％)的計算是將糖化血清白蛋白濃度除以血清白蛋白濃 度，計算出糖化血清白蛋白值（％)，從而反映出糖尿病患者檢測前2-3周的平均血糖水平。
[0018] 本發(fā)明提供的糖化血清白蛋白檢測試劑檢測GA濃度是采用終點法檢測，該試劑 的檢測方法包括以下步驟：采用自動生化分析儀進行檢測，其主波長設(shè)為546nm，副波長設(shè) 為700nm，加入樣本，接著加入試劑R1和試劑R2反應(yīng)4-8min。
[0019] 本發(fā)明提供的糖化血清白蛋白檢測試劑檢測ALB濃度是采用終點法檢測，該試劑 的檢測方法包括以下步驟：采用自動生化分析儀進行檢測，其主波長設(shè)為600nm，副波長設(shè) 為660nm，加入樣本和試劑R3反應(yīng)4-8min。
[0020] 另外，本發(fā)明還提供了糖化血清白蛋白檢測試劑在檢測糖化血清白蛋白中的應(yīng) 用。
[0021] 總之，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的糖化血清白蛋白檢測試劑具有具有抗干擾 能力強、精密度高、測定結(jié)果重復性好和檢測試劑穩(wěn)定性高的優(yōu)點，而且該試劑回收率高， 是一種理想的糖化血清白蛋白檢測試劑，有利于該試劑的推廣和應(yīng)用。
【具體實施方式】
[0022] 以下通過具體實施例進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明不僅僅限于以下實施例。在本發(fā) 明的范圍內(nèi)或者在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)，對本發(fā)明進行的變更、組合或替 換，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的，且包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0023] 實施例1、糖化血清白蛋白檢測試劑 糖化血清白蛋白檢測試劑包括試劑R1、試劑R2和試劑R3,所述試劑R1包括以下組分：MES緩沖液20mmol/L、糖化氨基酸氧化酶2U/ml、蛋白酶5U/ml、氯化鈉25μmol/L和 proclin300 0.lg/L； 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液20mmol/L、N，N-雙（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二鈉鹽lmmol/L、4-氨基安替P比啉