一種植物提取物中吡啶類農(nóng)藥的快速檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于有害物檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物提取物中吡啶類農(nóng)藥的快速檢測 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 吡啶類農(nóng)藥具有生物活性高、毒性低、內(nèi)吸性強(qiáng)、選擇性好的特點(diǎn)，是由吡啶代替 苯環(huán)而得到的的一類新化合物。啶蟲脒和吡蟲啉屬于煙堿類殺蟲劑，具有殺蟲廣譜，活性 高、持續(xù)時間長等特點(diǎn)，氟硫草定、氟啶草酮、甲氧咪草煙和噻唑煙酸廣譜、高活性和選擇性 強(qiáng)的吡啶類除草劑；啶酰菌胺為新型煙酰胺類殺菌劑，主要用于各種腐爛病、白粉病等，對 孢子的萌發(fā)有很強(qiáng)的抑制能力，且與其它殺菌劑無交互抗性。由于吡啶類農(nóng)藥在殺蟲、殺菌 和除草方面效果顯著，常在植物和中藥材中使用。
[0003] 植物提取物（Plant Extract，P. E)是以植物為原料，經(jīng)過物理或化學(xué)的方法提取、 分離，獲得植物中的某一種或多種有效成分，而不改變其有效成分結(jié)構(gòu)的一種產(chǎn)品。隨著中 國植物提取物的大量出口，植物提取物中農(nóng)藥殘留、重金屬、有機(jī)溶劑、環(huán)境污染物等問題 也顯現(xiàn)出來，國際上對其限量要求日益嚴(yán)格，植物提取物出口面臨著嚴(yán)格的質(zhì)量要求。
[0004] 目前，吡啶類農(nóng)藥的分析方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色 譜-質(zhì)譜法等，但這些方法的樣品前處理均需采用固相萃取或凝膠滲透色譜凈化，過程復(fù) 雜、成本高、周期長等問題，不能實(shí)現(xiàn)7種吡啶類農(nóng)藥的快速檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種植物提取物中吡啶類農(nóng)藥的快速檢測方法，解決了現(xiàn)有 檢測方法存在的樣品前處理均需要采用固相萃取柱或凝膠滲透色譜凈化，過程復(fù)雜、成本 高、周期長的問題。
[0006] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種植物提取物中吡啶類農(nóng)藥的快速檢測方法，具 體按以下步驟實(shí)施：
[0007] 步驟1，對植物提取物進(jìn)行前處理：
[0008] 將植物提取物與溶劑混合，獲得提取濃縮后的植物提取物樣品；
[0009] 步驟2,檢測植物提取物中的吡啶類農(nóng)藥殘留：
[0010] 采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，簡稱TF-LC-MS/MS，檢測植物提取物中的吡啶類 農(nóng)藥殘留。
[0011] 本發(fā)明的特點(diǎn)還在于，
[0012] 步驟1具體為：將植物提取物與氨水、乙酸乙酯渦旋混勻后超聲提取25~35min， 在4000~6000rpm下離心4~IOmin ;取上清液10~15mL，濃縮至干，與ImL甲醇-〇· 1% 甲酸水溶液復(fù)溶，渦旋均勻后過濾，得到提取濃縮后的植物提取物樣品。
[0013] 植物提取物和氨水的質(zhì)量體積比1 :0. 2~0. 4g/mL，植物提取物和乙酸乙酯的質(zhì) 量體積比為1 :1〇~30g/mL。
[0014] 甲醇與0· I %甲酸水的體積比為I :9。
[0015] 步驟2具體為：
[0016] 2. 1設(shè)置色譜條件及質(zhì)譜條件；
[0017] 2. 2制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0018] 2. 3精密度與加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)；
[0019] 2. 4樣品液檢測。
[0020] 步驟2. 1具體為：
[0021] 色譜條件設(shè)置，包括TF檢測參數(shù)設(shè)置和液相檢測參數(shù)設(shè)置，具體為：
[0022] I) TF檢測參數(shù)設(shè)置：
[0023] TF凈化柱：Cyclone?-P，0. 5_X 50_ ;流動相：A為甲醇；B為0. 1 %甲酸水；流動 相A與流動相B的體積比為3 :7 ;
[0024] 2)液相檢測參數(shù)設(shè)置：
[0025] Hypersil GOLD aQ C18,柱長50mm，柱內(nèi)徑2. 1mm，填料粒徑3 μπι ;流動相：A為甲 醇；B為0. 1 %甲酸水；流動相A與流動相B的體積比為1 :9 ;柱溫：室溫18~22°C，進(jìn)樣 量：50 ~100 μ L ;
[0026] 質(zhì)譜條件設(shè)置：
[0027] 掃描方式：電噴霧正離子模式；
[0028] 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM;噴霧電壓：3300V;氣化溫度：330°C ;鞘氣壓N2: 0. 5L/min，輔助氣壓N2:4. 5L/min ;離子傳輸管溫度：300°C ;碰撞氣體Ar ;碰撞氣體壓力 1. 5mTorr〇
[0029] 步驟2. 2具體為：
[0030] 稱取吡啶類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品適量，以甲醇溶解并定容至10mL，配制成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn) 儲備液；取吡啶類農(nóng)藥100 μ L至10.0 OmL容量瓶中，配制成10 μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液， 以空白植物提取物樣品溶液為稀釋溶液；將儲備液逐級稀釋為500ng/mL、100ng/mL、50ng/ mL、20ng/mL、10ng/mL系列的混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣測定，以每種化合物的峰面積對應(yīng)化 合物的質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
[0031] 步驟2. 3具體為：
[0032] 采用不含吡啶類農(nóng)藥的植物提取物作為空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，每個樣品 分別做10 μ g/kg、20 μ g/kg、50 μ g/kg的添加水平的回收率實(shí)驗(yàn)，每個添加水平做6份平行 樣，進(jìn)行測定，求其平均回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0033] 步驟2. 4具體為：取步驟1得到的處理好的樣品液，每個樣均重復(fù)進(jìn)樣3次取其峰 面積平均值帶入相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算出樣品液中各種吡啶類農(nóng)藥的含量。
[0034] 本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明植物提取物中吡啶類農(nóng)藥的快速檢測方法的前處理 方法操作簡便，免去了傳統(tǒng)方法中固相萃取或凝膠滲透凈化過程，節(jié)省了樣品前處理時間2 倍以上，本方法完整檢測一個樣品僅需1個小時，檢出限可達(dá)到loyg/kg，檢測周期短、檢 測成本低、檢出限低、重復(fù)性好，適合生產(chǎn)企業(yè)及管理部門進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量檢測。
【附圖說明】
[0035] 圖1是7種吡啶類農(nóng)藥在TF凈化柱的上樣品色譜圖；
[0036] 圖2是7種吡啶類農(nóng)藥在TF凈化柱上樣品保留色譜圖；
[0037] 圖3是實(shí)施例1中枸杞提取物中7種吡啶類農(nóng)藥的的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)色圖；
[0038] 圖4是實(shí)施例1枸杞提取物樣品色譜圖；
[0039] 圖5是枸杞提取物樣品加標(biāo)水平為10 μ g/kg的色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0041] 本發(fā)明提供了一種植物提取物中吡啶類農(nóng)藥的快速檢測方法，具體按以下步驟實(shí) 施：
[0042] 步驟1，對植物提取物進(jìn)行前處理：
[0043] 按照植物提取物和氨水的質(zhì)量體積比1 :0. 2~0. 4g/mL，植物提取物和乙酸乙酯 的質(zhì)量體積比為1 :1〇~30g/mL，分別稱取植物提取物、氨水和乙酸乙酯，渦旋混勻后超聲 提取25~35min，在4000~6000rpm下離心4~IOmin ;取上清液10~15mL，濃縮至干， 與ImL甲醇-0. 1 %甲酸水溶液復(fù)溶，渦旋均勻后過0. 22 μ m有機(jī)微孔濾膜，得到提取濃縮后 的植物提取物樣品；
[0044] 其中甲醇與0· 1 %甲酸水的體積比為1 :9。
[0045] 步驟2,檢測植物提取物中的吡啶類農(nóng)藥殘留：
[0046] 采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（TurboFlow-LC-MS/MS簡稱TF-LC-MS/MS (Thermo fisher公司））檢測植物提取物中的吡啶類農(nóng)藥殘留，具體按照以下步驟實(shí)施：
[0047] 2. 1設(shè)置色譜條件及質(zhì)譜條件：
[0048] I) TF檢測參數(shù)：
[0049] TF 凈化柱：Cyclone?_P，0· 5mmX50mm ;
[0050] 流動相：A為甲醇；B為0· I %甲酸水；
[0051 ] 梯度洗脫程序及流速見表1。
[0052] 2)液相檢測參數(shù)：
[0053] Hypersil GOLD aQ C18 (柱長 50mm，柱內(nèi)徑 2. 1mm，填料粒徑 3 μ m)，或者相當(dāng)；
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