一種脂質(zhì)體人工皮膚膜及其制備方法和在外用制劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及經(jīng)皮給藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種脂質(zhì)體人工皮膚膜及其制備方法 和在外用制劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 眾所周知，經(jīng)皮給藥是除口服以外的主要給藥途徑之一，具有給藥方便、可隨時(shí)中 止用藥、能夠避免口服給藥的首過(guò)效應(yīng)及胃腸道副作用等優(yōu)點(diǎn)。但是，皮膚是人體最主要的 屏障，大部分藥物較難通過(guò)皮膚角質(zhì)層，因此，不管是局部給藥還是全身給藥，經(jīng)皮給藥制 劑處方的設(shè)計(jì)和優(yōu)化都需要開展體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)，以評(píng)價(jià)經(jīng)皮滲透性能或優(yōu)選制劑處方 工藝。
[0003] 由于人皮難以獲得，長(zhǎng)期以來(lái)，離體動(dòng)物皮膚被廣泛應(yīng)用于外用制劑的體外透皮 實(shí)驗(yàn)，但動(dòng)物皮膚存在種屬、個(gè)體、部位、年齡、性別等各種生物因素導(dǎo)致的差異，實(shí)驗(yàn)可控 性和重現(xiàn)性不佳，并且動(dòng)物皮膚的使用也存在一定倫理學(xué)問(wèn)題。如能采用人工皮膚膜替代 動(dòng)物皮膚進(jìn)行體外透皮實(shí)驗(yàn)，將有效地解決上述問(wèn)題，無(wú)疑會(huì)為外用制劑包括化妝品的研 發(fā)提供有力的技術(shù)保障。目前文獻(xiàn)報(bào)道的人工皮膚膜主要是借助于簡(jiǎn)單的改性技術(shù)制備， 與真實(shí)皮膚的擬合度較低，直接導(dǎo)致體外透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度不高。脂質(zhì)體是一種組成和 結(jié)構(gòu)類似于生物膜的微型載體，本發(fā)明基于脂質(zhì)體技術(shù)，模擬皮膚角質(zhì)層的組成和結(jié)構(gòu)，并 通過(guò)脂質(zhì)體融合改性人工膜，致力于研發(fā)一種重現(xiàn)性好且能模擬真實(shí)皮膚的人工皮膚膜， 能夠替代動(dòng)物皮膚在體外透皮試驗(yàn)中的應(yīng)用。
[0004] 發(fā)明方案
[0005] 發(fā)明目的：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是研發(fā)一種能夠代替真實(shí)皮膚進(jìn)行體外透皮 實(shí)驗(yàn)的人工皮膚膜。該人工膜應(yīng)用了脂質(zhì)體技術(shù)，模擬角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)特征，從而模擬皮膚的 屏障作用，可以替代真實(shí)皮膚應(yīng)用到體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)中，使體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有 較好的可控性和重現(xiàn)性。
[0006] 技術(shù)方案：本發(fā)明提供一種用于模擬真實(shí)皮膚的脂質(zhì)體人工皮膚膜，其包含兩種 粒徑不同的脂質(zhì)體，1份過(guò)孔徑為SOOnm聚碳酸酯膜的脂質(zhì)體，1~10份過(guò)孔徑為400nm聚 碳酸酯膜的脂質(zhì)體。
[0007] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述脂質(zhì)體采用磷脂材料制備所得，其中磷脂材料為 重量比為1~8:1:0. 2:0. 6:2的卵磷脂，膽固醇，膽固醇硫酸酯、神經(jīng)酰胺、棕櫚酸。磷脂材 料優(yōu)選為重量比為8:1~1:1的卵磷脂和膽固醇。最優(yōu)選為卵磷脂。
[0008] 作為本發(fā)明的更進(jìn)一步改進(jìn)，所述兩種粒徑不同的脂質(zhì)體，其組成為1份過(guò)孔徑 為SOOnm聚碳酸酯膜的脂質(zhì)體，2份過(guò)孔徑為400nm聚碳酸酯膜的脂質(zhì)體。
[0009] 作為本發(fā)明的更進(jìn)一步改進(jìn)，所述兩種粒徑不同的脂質(zhì)體分層鋪于多孔膜上（見 圖1)。
[0010] 本發(fā)明同時(shí)提供上述脂質(zhì)體人工皮膚膜的制備方法，包括脂質(zhì)體的制備、多孔膜 與嵌套底部的密封、脂質(zhì)體與多孔膜的結(jié)合、凍融循環(huán)步驟。
[0011] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述脂質(zhì)體采用被動(dòng)載藥法或主動(dòng)載藥法制備所得， 其中被動(dòng)載藥法選自超聲分散法、冷凍干燥法、復(fù)乳法、注入法、反相蒸發(fā)法、超臨界法；主 動(dòng)載藥法選自PH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法。優(yōu)選為薄膜分散法。
[0012] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，本發(fā)明同時(shí)提供的脂質(zhì)體人工皮膚膜的制備方法包括 如下步驟：
[0013] 1)脂質(zhì)體的制備：稱取作膜材用的磷脂材料5~10份，溶于50~120份無(wú)水乙 醇或體積比為2:1的氯仿-甲醇混合溶液；減壓蒸發(fā)除去溶劑，形成薄膜；再用50~120份 含有5~15 %乙醇的磷酸鹽緩沖溶液室溫水合，得到脂質(zhì)體混懸液；最后將脂質(zhì)體混懸液 分別擠壓過(guò)孔徑為400nm和SOOnm的聚碳酸酯膜，得到兩種粒徑的脂質(zhì)體；
[0014] 2)多孔膜與膜嵌套底部的密封：將膜嵌套底部原有的膜去掉，將孔徑為0. 45 μm 的尼龍膜和膜嵌套底部150°C加熱，使多孔膜與嵌套底部形成完全密封的小室；
[0015] 3)脂質(zhì)體與多孔膜的結(jié)合：將步驟1)制備所得過(guò)孔徑400nm聚碳酸酯膜的脂質(zhì) 體1份，加入到步驟2)制得的嵌套中，2000rpm離心10min ;將嵌套版旋轉(zhuǎn)180°，再次加入 步驟1)制備所得過(guò)孔徑400nm聚碳酸酯膜的脂質(zhì)體1份，2000rpm離心10min ;然后將膜置 于干燥箱中50°C加熱至干燥；最后加入步驟1)制備所得過(guò)孔徑SOOnm聚碳酸酯膜的脂質(zhì) 體1份，2000rpm離心10min，去除上清液，制得脂質(zhì)體人工皮膚膜初品；
[0016] 4)凍融循環(huán)：將步驟3)制備所得脂質(zhì)體人工皮膚膜初品置于-70~-120°C冷凍 0. 5~lh，取出后50~75°C加熱0. 5~lh，如此循環(huán)凍融2~3次，即得脂質(zhì)體人工皮膚 膜。
[0017] 本發(fā)明同時(shí)提供用上述方法制備所得的脂質(zhì)體人工皮膚膜及其在外用藥物制劑 或化妝品中的應(yīng)用，包括用于經(jīng)皮途徑的軟膏劑、凝膠劑、乳膏劑、貼膏劑、貼劑、溶液劑、乳 劑、混懸劑、涂劑、搽劑、洗劑、膜劑、氣霧劑、噴霧劑等劑型體外透皮吸收性質(zhì)的評(píng)價(jià)。
[0018] 本發(fā)明同時(shí)提供用上述方法制備所得的脂質(zhì)體人工皮膚膜在考察或篩選透皮吸 收促進(jìn)劑的作用及機(jī)制中的應(yīng)用。
[0019] 有益效果
[0020] 本發(fā)明提供的脂質(zhì)體人工皮膚膜能夠替代真實(shí)皮膚用于體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)，不同 極性藥物成分透過(guò)行為與真實(shí)皮膚類似，并且模擬程度優(yōu)于市售人工皮膚膜。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1脂質(zhì)體人工皮膚膜示意圖
[0022] 圖2模型藥物在脂質(zhì)體人工皮膚膜、市售人工皮膚膜和真實(shí)皮膚的體外透皮曲線 (η = 5);橫坐標(biāo)為透過(guò)時(shí)間、縱坐標(biāo)為單位面積透過(guò)量
[0023] 圖3布洛芬通過(guò)人工皮膚膜與大鼠皮膚的透皮吸收曲線（η = 5)
[0024] 圖4采用偏最小二乘判別法（PLS-DA)模型，對(duì)脂質(zhì)體人工皮膚膜組、市售Start-M 膜組，及大鼠皮組透過(guò)數(shù)據(jù)進(jìn)行多維統(tǒng)計(jì)分析得分圖（score plot)
[0025] 圖5大鼠皮、脂質(zhì)體人工皮膚膜、市售Start-M膜的紅外測(cè)定結(jié)果
【具體實(shí)施方式】
[0026] 下面將結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但這些實(shí)例并不限制本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
[0027] 實(shí)施例1 :脂質(zhì)體人工皮膚膜的制備
[0028] 包括如下步驟：脂質(zhì)體的制備、多孔膜與嵌套底部的密封、脂質(zhì)體與多孔膜的結(jié) 合、凍融循環(huán)，具體按如下步驟進(jìn)行：
[0029] (1)脂質(zhì)體的制備：稱取卵磷脂460mg，膽固醇140mg，置于前形瓶，用12ml無(wú)水乙 醇溶解，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，成膜。成好的膜置于真空干燥箱過(guò)夜除去殘余溶劑。加入 含10 %乙醇的磷酸鹽緩沖溶液12ml水合，得到脂質(zhì)體混懸液。將該脂質(zhì)體混懸液分成兩 份，分別過(guò)400nm和SOOnm的聚碳酸酯膜，得到兩種粒徑的脂質(zhì)體混懸液。
[0030] (2)多孔膜與嵌套底部的密封：將尼龍膜（孔徑0. 45 μ m)和膜嵌套底部150°C高 溫加熱25~30s，使之形成完全密封的小室。
[0031] (3)脂質(zhì)體與多孔膜的結(jié)合：將小室置于六孔板中，先加入過(guò)400nm聚碳酸酯膜擠 出的脂質(zhì)體〇. 6ml，2000rpm，離心10min，再將小室水平旋轉(zhuǎn)180°，加入過(guò)400nm聚碳酸酯 膜擠出的脂質(zhì)體〇. 6ml，2000rpm離心10min ;然后將膜置于干燥箱中50°C加熱使膜干燥； 再加入過(guò)800nm聚碳酸酯膜擠出的脂質(zhì)體0. 6ml，2000rpm離心10min，去除上清液。
[0032] 凍融循環(huán)：將載有脂質(zhì)體的膜置于-80°C冷凍lh，再于真空干燥箱中65°C加熱 0. 5h，完成一次凍-融，重復(fù)該凍融循環(huán)3次，即得脂質(zhì)體人工皮膚膜。
[0033] 實(shí)施例2 :脂質(zhì)體人工皮膚膜的制備
[0034] 與實(shí)施例1不同的是，步驟（1)中稱取卵磷脂360mg，膽固醇180mg置于前形瓶，用 IOml氯仿-甲醇（v/v = 2:l)溶解，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，成膜。成好的膜置于真空干燥 箱過(guò)夜除去殘余溶劑。加入含5%乙醇的磷酸鹽緩沖溶液IOml水合，得到脂質(zhì)體混懸液。 步驟（4)中凍融循環(huán)條件為，-120