一種九味熄風(fēng)顆粒成分定量檢測(cè)方法及其指紋圖譜構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種九味熄風(fēng)顆粒成分定量檢測(cè)方法及 其指紋圖譜構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 多發(fā)性抽動(dòng)癥又稱為抽動(dòng)穢語綜合征，Tourette綜合征，是一種以慢性、波動(dòng)性、 多發(fā)性運(yùn)動(dòng)性抽動(dòng)，伴有不自主發(fā)聲為特征的遺傳性神經(jīng)精神疾病。多發(fā)性抽動(dòng)癥已經(jīng)比 較常見，僅在基層醫(yī)院每年就有不少患兒前來就診，近年來，多發(fā)性抽動(dòng)癥的發(fā)病有明顯增 多的趨勢(shì)。流行病學(xué)調(diào)查顯示，多發(fā)性抽動(dòng)癥的年發(fā)病率一般為〇. 5~1/10萬（每10萬 中每年發(fā)生新病人的數(shù)目）。多發(fā)性抽動(dòng)癥在男性的發(fā)病明顯多于女性，文獻(xiàn)報(bào)告的結(jié)果差 異較大，男女之比從1. 6 :1到10 :1，患病率至少為0. 5%。以上。
[0003] 九味熄風(fēng)顆粒具有很好的滋陰補(bǔ)腎、平肝熄風(fēng)、化痰寧神作用，主治小兒多發(fā)性抽 動(dòng)癥，證屬腎陰虧損，肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)型，喉中發(fā)出異常聲音，神思渙散，注意力欠集中，小動(dòng)作多， 性情急躁等。其由熟地黃、龍骨、龜甲、天麻、龍膽、鉤藤、僵蠶、青礞石、法半夏等制成，九味 熄風(fēng)顆粒中的主要成分有生物堿、環(huán)烯醚萜類等成分。具有以下療效：
[0004] 1、九味熄風(fēng)顆?？梢宰剃幯a(bǔ)腎：瞄準(zhǔn)病源，補(bǔ)腎陰，清神志，迅速緩解抽動(dòng)多動(dòng)癥 狀，提升注意力集中程度。
[0005] 2、九味熄風(fēng)顆?？梢曰祵幧瘢赫{(diào)和陰陽(yáng)，化痰濕，又治標(biāo)，由內(nèi)而外，煥然一新， 增強(qiáng)體質(zhì)祛除兼癥，徹底康復(fù)。
[0006] 3、九味熄風(fēng)顆粒可以平肝熄風(fēng)：深度濡養(yǎng)，熄肝風(fēng)，固本元，平息抽動(dòng)多動(dòng)癥狀，走 出病患心理，重享金色童年。
[0007] 隨著我國(guó)中藥制劑的快速發(fā)展，中藥制劑的質(zhì)量管理問題也受到了人們的廣泛關(guān) 注，其質(zhì)量的優(yōu)劣會(huì)直接影響到醫(yī)療質(zhì)量和患者生命安危。影響中藥制劑質(zhì)量的因素主要 包括：
[0008] 1、原藥材的質(zhì)量
[0009] 中藥材的質(zhì)量好壞是直接影響中藥制劑臨床療效的關(guān)鍵原因之一，由于目前中藥 材的來源較為復(fù)雜，且品種繁多，許多藥材市場(chǎng)常常以次充好從中取得大量的經(jīng)濟(jì)利益。此 外，現(xiàn)今我國(guó)藥材市場(chǎng)對(duì)野生藥材的供應(yīng)相對(duì)缺乏再加上受到國(guó)家對(duì)野生自然資源采集的 限制許多地方采取用種植的藥材來代替這種家種的藥材會(huì)嚴(yán)重影響藥劑的質(zhì)量，使藥材的 質(zhì)量下降，特別是過量使用化肥，大幅度提升家中藥材的產(chǎn)量，從而導(dǎo)致這與野生藥材的氣 味發(fā)生了改變，從而影響了中藥的療效。
[0010] 2、生產(chǎn)過程
[0011] 在中藥制劑的每一個(gè)環(huán)節(jié)中從投料到制劑的制備都需要投料人員認(rèn)真仔細(xì)的按 照工藝中的處方核查所投的藥味及數(shù)量，如果少投或者多投都會(huì)影響到產(chǎn)品的整體質(zhì)量。 此外，還要注意中藥制劑的粉碎、濃縮、干燥、精制和提取等方面的工序，這對(duì)中藥成品的成 分含量具有較大的影響作用。因此，在工藝設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)根據(jù)藥材的性質(zhì)進(jìn)行綜合性的思考，選 擇最優(yōu)的制備條件和最佳工藝，并做好工序中的質(zhì)量監(jiān)督工作，從而保障中藥制劑的質(zhì)量。
[0012] 3、工藝用水、潔凈區(qū)環(huán)境、工藝衛(wèi)生
[0013] 在制劑時(shí)，工藝用水也是重要的一個(gè)步驟，如果工藝衛(wèi)生和潔凈區(qū)環(huán)境存在不合 格的情況，那將會(huì)直接引發(fā)微生物的滋生和污染，從而導(dǎo)致生產(chǎn)的制劑出現(xiàn)不合格的產(chǎn)品。
[0014] 4、包裝材料及現(xiàn)代包裝技術(shù)
[0015] 現(xiàn)今制劑的包裝材料也是影響制劑質(zhì)量的關(guān)鍵，例如塑料具有透氣性和吸附性， 它既能保證液體藥物的溶媒揮發(fā)，也會(huì)使其含揮發(fā)成分的藥物性能改變，加速藥物的分解， 使用劣質(zhì)的保障袋，也會(huì)使有害的物質(zhì)滲入制劑當(dāng)中，此外，由于中藥制劑具有劑型多、品 種繁雜和生產(chǎn)量小等特點(diǎn)，因此，就會(huì)出現(xiàn)因包裝袋質(zhì)量差而導(dǎo)致液體劑外漏、液體發(fā)生霉 變、藥液與包裝之間發(fā)生反應(yīng)、固體制劑因?yàn)槭艹弊冑|(zhì)等問題的出現(xiàn)，這嚴(yán)重影響制劑的質(zhì) 量。
[0016] 因此，為了更好地對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行控制，保證其臨床療效，需建立全面評(píng)價(jià)該制劑 質(zhì)量的方法。目前關(guān)于九味熄風(fēng)顆粒的質(zhì)量控制方法尚無明確報(bào)道，因此提供一種九味熄 風(fēng)顆粒的質(zhì)量控制方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種九味熄風(fēng)顆粒成分定量檢測(cè)方法及其指紋圖譜構(gòu)建 方法。該檢測(cè)方法測(cè)得的圖譜能較全面的反映九味熄風(fēng)顆粒中的化學(xué)成分，且各色譜峰分 離較好，基線平穩(wěn)，峰型好，重復(fù)性較好，該方法具有良好的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、回收 率，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)九味熄風(fēng)顆粒的成分含量，獲得的對(duì)照指紋圖譜能夠客觀評(píng)估樣品的質(zhì) 量。
[0018] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0019] 本發(fā)明提供了一種九味熄風(fēng)顆粒成分定量檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0020] 取九味熄風(fēng)顆粒供試品和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行HPLC檢測(cè)，HPLC檢測(cè)的色譜條件為：采用 C18色譜柱，以甲醇為流動(dòng)相A、三乙胺為流動(dòng)相B，梯度洗脫程序?yàn)椋?~5min，流動(dòng)相A為 40%;5~30111；[11，流動(dòng)相4從40%升至60%;30~50111；[11，流動(dòng)相4從60%升至75%;50~ 60min，流動(dòng)相A為75% ;
[0021] 根據(jù)HPLC檢測(cè)結(jié)果，獲得九味熄風(fēng)顆粒成分及其含量。
[0022] 本發(fā)明采用上述檢測(cè)方法對(duì)九味熄風(fēng)顆粒成分進(jìn)行定量檢測(cè)時(shí)，能較全面的反映 九味熄風(fēng)顆粒中的化學(xué)成分，且各色譜峰分離較好，基線平穩(wěn)，峰型好，重復(fù)性較好，該方法 具有良好的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、回收率，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)九味熄風(fēng)顆粒的成分含量，獲 得的對(duì)照指紋圖譜能夠客觀評(píng)估樣品的質(zhì)量。
[0023] 作為優(yōu)選，HPLC檢測(cè)的波長(zhǎng)為230~260nm〇
[0024] 優(yōu)選地，HPLC檢測(cè)的波長(zhǎng)為246nm〇
[0025] 作為優(yōu)選，三乙胺的質(zhì)量百分含量為0. 05%~0. 15%。
[0026] 優(yōu)選地，三乙胺的質(zhì)量百分含量為〇. 1 %。
[0027] 作為優(yōu)選，HPLC檢測(cè)的流速為0. 8~I. 2mL/min。
[0028] 優(yōu)選地，HPLC檢測(cè)的流速為1.0 mL/min。
[0029] 作為優(yōu)選，HPLC檢測(cè)的柱溫為30~40°C。
[0030] 優(yōu)選地，HPLC檢測(cè)的柱溫為35 °C。
[0031] 作為優(yōu)選，C18 色譜柱為 Phenomenex 66111；[11；[(]18色譜柱、Thermo syncronis C18 色 譜柱、Agilent 5TC-C18 色譜柱、Kromasil 100-5C18 色譜柱、Waters symmetry C18 色譜柱 或 Phenomenex Luna C18 色譜柱。
[0032] 作為優(yōu)選，C18色譜柱的柱長(zhǎng)為250mm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑為5 μ m〇
[0033] 作為優(yōu)選，九味熄風(fēng)顆粒供試品的制備方法為：取九味熄風(fēng)顆粒與氨水、水、氯仿 混合，回流提取，分出氯仿層，去除氯仿，殘?jiān)蛹状既芙?，濾過，取續(xù)濾液過濾膜，得到九味 媳風(fēng)顆粒供試品。
[0034] 作為優(yōu)選，以g/mL/mL/mL計(jì)，九味媳風(fēng)顆粒、氨水、水與氯仿的比例為（1~5): (1 ~10) : (20 ~30) : (15 ~25) 〇
[0035] 優(yōu)選地，以g/mL/mL/mL計(jì)，九味媳風(fēng)顆粒、氨水、水與氯仿的比例為3 :5 :25 :20。
[0036] 作為優(yōu)選，回流提取的時(shí)間為80~lOOmin。
[0037] 優(yōu)選地，回流提取的時(shí)間為90min。
[0038] 作為優(yōu)選，標(biāo)準(zhǔn)品為鉤藤堿標(biāo)準(zhǔn)品、異鉤藤堿標(biāo)準(zhǔn)品、去氫鉤藤堿標(biāo)準(zhǔn)品或異去氫 鉤藤堿標(biāo)準(zhǔn)品中的一種或兩者以上的混合物。
[0039] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，鉤藤堿對(duì)照品的濃度為45. 05 μ g/mL，異鉤藤堿對(duì) 照品的濃度為45. 06 μ g/mL，去氫鉤藤堿對(duì)照品的濃度為50. 18 μ g/mL，異去氫鉤藤堿對(duì)照 品的濃度為50. 29 μ g/mL。
[0040] 本發(fā)明還提供了一種九味熄風(fēng)顆粒指紋圖譜構(gòu)建方法，包括：取九味熄風(fēng)顆粒供 試品進(jìn)行HPLC檢測(cè)，獲得九味熄風(fēng)顆粒指