其上具有質(zhì)量對(duì)照物的顯微鏡載玻片的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及分子病理學(xué)的領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明針對(duì)用于確保顯微鏡載玻片上 的組織樣本的有質(zhì)量的染色的設(shè)備和方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 組織診斷對(duì)于患者護(hù)理而言正在變得更加重要并且要求愈加自動(dòng)化W滿足對(duì)于 吞吐量的日益增長的需求。自動(dòng)化免疫染色技術(shù)被廣泛地使用在大多數(shù)IHC實(shí)驗(yàn)室中。儀 器被設(shè)計(jì)成模仿手動(dòng)免疫染色過程，包括諸如抗原修復(fù)、抗體和溶液施加、培育和清洗之類 的關(guān)鍵步驟。不同的系統(tǒng)具有不同程度的靈活性和載玻片容量，但是其目標(biāo)是相同的：最小 化錯(cuò)誤并且提供高質(zhì)量的染色，因此可W從患者樣本提取一致的解釋。
[0003] 然而，不管運(yùn)些自動(dòng)染色器中的工程控制工具的供給如何，使組織具有染色溶液 的不正確分配和由于氣泡或厚的、松散的或折疊的組織區(qū)段的存在而引起的患者樣本的 不完整覆蓋并不罕見，運(yùn)然后產(chǎn)生偽陰性和非均勻染色的組織W供分析。參見例如化i， S.-民.，Taylor,C.民.，AntigenRetrievalImmunohistochemistryBasedResearchand Dia即ostics, 2010，Wiley,新加坡。另外，市面上的典型自動(dòng)染色器將染色區(qū)域限制到大 約50mm長。一個(gè)制造商的蓋玻片技術(shù)將染色區(qū)域限制到21X50mm。另一制造商的液體滿 流空氣混合協(xié)議覆蓋了 25X50mm染色區(qū)域。當(dāng)前不存在驗(yàn)證運(yùn)些指定染色區(qū)域內(nèi)的整個(gè) 組織區(qū)段被等同或完全染色的控制方法。
[0004] 當(dāng)前，載玻片上的組織的不充分染色僅僅被回顧性地標(biāo)識(shí)。許多并不如此明顯 (not-so-obvious)的事件可能已經(jīng)被忽視。來自化ko的化rcetTest?包括單獨(dú)載玻片， 其包含具有〇、1+和3+的染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)的=個(gè)團(tuán)塊化的、福爾馬林固定的、嵌入石蠟的人類 乳腺癌細(xì)胞系，該單獨(dú)載玻片作為批量對(duì)照物而被包括在每一個(gè)染色過程中。然而，批量對(duì) 照物不能標(biāo)識(shí)批次內(nèi)的每一個(gè)個(gè)體載玻片上的任何染色缺陷。
[0005] 另一先前的方案在已經(jīng)包含陽性或陰性組織或細(xì)胞對(duì)照物的載玻片頂部上制備 患者樣本區(qū)段。運(yùn)些組織的源根據(jù)設(shè)施而變化并且其染色行為將由于患者可變性而從批次 到批次不同。如圖1中所示，現(xiàn)有技術(shù)提供具有其上附著組織樣本3和細(xì)胞對(duì)照物4的平 面基底2的組織樣本載玻片1。細(xì)胞對(duì)照物4是W在樣本和基底2的一個(gè)縱向端5之間的 區(qū)域中附著到載玻片的細(xì)胞團(tuán)塊（cellpellet)的形式。圖2描繪了由馬里蘭州羅克維爾 的Bio-如ick公司銷售的現(xiàn)有技術(shù)的另一組織樣本載玻片1'，其包括用于癌癥標(biāo)記I肥化 驗(yàn)的細(xì)胞對(duì)照物 4a-i的 9 點(diǎn)式陣列化ttp://www.bio-quick.com/qc-dots%C2%AE-cance r-arra^ca-control-slides)。細(xì)胞對(duì)照物4a-i可W包括陽性和陰性對(duì)照物，但是每一個(gè) 被示為與彼此是不同的對(duì)照物。盡管載玻片1包含細(xì)胞團(tuán)塊陣列，但是其供給與包含單個(gè) 細(xì)胞團(tuán)塊的載玻片類似的信息。也就是說，細(xì)胞團(tuán)塊標(biāo)記僅僅用于從被分析的組織樣本接 收到的信號(hào)的校準(zhǔn)。像載玻片1那樣，載玻片1'將對(duì)照物4a-I定位在樣本與基底2'的一 個(gè)縱向端5'之間并且可W因此取決于樣本的大小和操作者的技術(shù)而靠近或遠(yuǎn)離患者的樣 本。運(yùn)些對(duì)照物到組織的單側(cè)的位置因此不會(huì)提供組織樣本自身是否被完全且均勻地染色 的可靠指示。
[0006] 現(xiàn)有技術(shù)因此缺少W確保組織樣本已經(jīng)W其整體既完全又均勻地被染色的方式 使用對(duì)照物的載玻片。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供具有鄰近于樣本附著區(qū)的陽性對(duì)照物樣本的顯微鏡載玻片。運(yùn)些載玻 片適合于組織樣本的分析，諸如病理學(xué)染色，并且提供關(guān)于染色質(zhì)量的實(shí)時(shí)確認(rèn)。陽性對(duì)照 物樣本或陽性對(duì)照物包括在組織樣本的分析期間可W被檢測的一個(gè)或多個(gè)生物標(biāo)記。因 此，從陽性對(duì)照物染色的缺失將提供染色失敗的實(shí)時(shí)標(biāo)識(shí)?？蛇x地，陰性對(duì)照物樣本也可W 被包括在載玻片上。陰性對(duì)照物樣本或陰性對(duì)照物不包含在陽性對(duì)照物中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)或多 個(gè)生物標(biāo)記。從陰性對(duì)照物染色因此也提供染色失敗的實(shí)時(shí)標(biāo)識(shí)。
[0008] 因此，在一方面中，本發(fā)明提供了一種用于要染色的組織樣本的顯微鏡載玻片。顯 微鏡載玻片包括伸長的基本上平面的基底，該基底包括具有在其內(nèi)可W附著組織樣本的樣 本附著區(qū)的第一主表面。載玻片還包括在鄰近于樣本附著區(qū)的第一位置處附著在第一主表 面上的第一陽性對(duì)照物樣本和在鄰近于樣本附著區(qū)的第二位置處附著在第一主表面上的 第二陽性對(duì)照物樣本。第一和第二位置被間隔為使得第一和第二陽性對(duì)照物樣本的染色質(zhì) 量指示組織樣本的染色質(zhì)量。
[0009] 在另一方面中，本發(fā)明提供了一種用于要染色的組織樣本的顯微鏡載玻片。顯微 鏡載玻片包括伸長的基本上平面的基底，該基底包括具有在其內(nèi)可W附著組織樣本的樣本 附著區(qū)的第一主表面。載玻片包括在鄰近于樣本附著區(qū)的第一位置處附著在第一主表面上 的第一陽性對(duì)照物樣本和在鄰近于樣本附著區(qū)的第二位置處附著在第一主表面上的第二 陽性對(duì)照物樣本。第一和第二位置被間隔為使得樣本附著區(qū)的至少一部分在第一和第二位 置之間沿基底的縱軸延伸。
[0010] 在又一方面中，本發(fā)明提供一種制作本發(fā)明的顯微鏡載玻片的方法，該方法包括 將陽性對(duì)照物樣本的薄層在第一和第二位置處轉(zhuǎn)移和附著到顯微鏡載玻片上的步驟，其中 第一和第二位置被間隔為使得第一和第二陽性對(duì)照物樣本的染色質(zhì)量指示組織樣本的染 色質(zhì)量。
[0011] 在再一方面中，本發(fā)明提供一種分析方法，該方法包括利用用于分別定位在第一 和第二位置處的陽性對(duì)照物樣本的檢測手段來對(duì)本發(fā)明的顯微鏡載玻片染色的步驟。第一 和第二位置被間隔為使得陽性對(duì)照物樣本的染色質(zhì)量指示組織樣本的染色質(zhì)量，W及從至 少第一和第二位置檢測陽性對(duì)照物樣本。
【附圖說明】
[0012] 圖1描繪了具有在鄰近于載玻片的組織附著區(qū)的位置處的作為對(duì)照物的細(xì)胞團(tuán) 塊的現(xiàn)有技術(shù)載玻片。
[0013] 圖2描繪了具有在鄰近于載玻片的組織附著區(qū)的位置處的多個(gè)細(xì)胞團(tuán)塊的另一 現(xiàn)有技術(shù)載玻片。
[0014] 圖3描繪了具有跨載玻片的組織附著區(qū)的一部分定位的細(xì)胞團(tuán)塊的根據(jù)本發(fā)明 的實(shí)施例的載玻片。
[0015] 圖4描繪了具有跨組織附著區(qū)的一部分定位的細(xì)胞團(tuán)塊的根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例 的另一載玻片。
[0016] 圖5描繪了具有彼此與組織附著區(qū)相對(duì)并且沿載玻片的相對(duì)邊緣定位的細(xì)胞團(tuán) 塊的根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的又一載玻片。
[0017] 圖6描繪了圖5的載玻片的可替換實(shí)施例，其中細(xì)胞團(tuán)塊二者彼此縱向間隔并且 與載玻片的縱軸橫向間隔。
[0018] 圖7描繪了具有在載玻片的組織附著區(qū)附近定位的=個(gè)細(xì)胞團(tuán)塊的本發(fā)明的另 一實(shí)施例。
[0019] 圖8描繪了具有在載玻片的組織附著區(qū)附近定位的四個(gè)細(xì)胞團(tuán)塊的根據(jù)本發(fā)明 的實(shí)施例的再一載玻片。
[0020] 圖9描繪了具有彼此跨組織附著區(qū)定位的不同細(xì)胞團(tuán)塊對(duì)的根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施 例的又一載玻片。
[0021] 圖10描繪了具有沿載玻片的相對(duì)邊緣并且鄰近于組織附著區(qū)定位的不同細(xì)胞團(tuán) 塊的多個(gè)對(duì)的根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的另外又一載玻片。
[0022] 圖11描繪了具有由基本上均勻間隔的細(xì)胞團(tuán)塊周邊定界的組織附著區(qū)的根據(jù)本 發(fā)明的實(shí)施例的可替換載玻片。
[0023] 圖12描繪了具有由不同類型的團(tuán)塊周邊定界的組織附著區(qū)的根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施 例的另一可替換載玻片。
[0024] 圖13描繪了具有在載玻片上的組織附著區(qū)附近的八個(gè)細(xì)胞團(tuán)塊的根據(jù)本發(fā)明的 實(shí)施例的載玻片。
[0025] 圖14描繪了根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的又一可替換載玻片，其中在載玻片的組織附 著區(qū)附近定位的細(xì)胞團(tuán)塊進(jìn)一步被提供在顯微鏡載玻片的第一主表面上的支撐平臺(tái)上。
[0026] 圖15描繪了具有在載玻片的組織附著區(qū)附近定位的細(xì)胞團(tuán)塊的根據(jù)本發(fā)明的實(shí) 施例的又一可替換載玻片，其中組織樣本被附著在顯微鏡載玻片的第一主表面上的平面凹 陷區(qū)內(nèi)。
[0027]圖16描繪了具有在載玻片的組織附著區(qū)附近定位的細(xì)胞團(tuán)塊的根據(jù)本發(fā)明的實(shí) 施例的又一可替換載玻片，顯微鏡載玻片進(jìn)一步包括在樣本附著區(qū)上方抬高的基本上平面 的標(biāo)記區(qū)。
[0028] 圖17描繪了根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的用于制作載玻片的系統(tǒng)。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 本發(fā)明提供了包括創(chuàng)新性對(duì)照物樣本布局的顯微鏡載玻片，其提供了附著到載玻 片的組織樣本的正確染色的較高置信度。本發(fā)明的載玻片適合于組織樣本的自動(dòng)染色和分 析。本發(fā)明的顯微鏡載玻片特別適合于組織樣本的自動(dòng)的、多回合的、復(fù)用的分析。運(yùn)些載 玻片使得能夠?qū)崿F(xiàn)關(guān)于組織成像/分析期間的染色質(zhì)量的確認(rèn)。運(yùn)些載玻片還提供通過在 每一個(gè)染色回合之后提供的圖像回顧來確認(rèn)在所有染色回合完成之后的染色質(zhì)量。在一些 實(shí)施例中，本文所公開的顯微鏡載玻片和方法可W在組織化學(xué)、免疫染色、免疫組織化學(xué)、 免疫分析、免疫巧光或巧光原位雜交方面是特別可適用的。
[0030] 如圖3中所示，本發(fā)明的第一方面提供了一種顯微鏡載玻片10,其用于對(duì)與其附 著的組織樣本15染色。載玻片10包括伸長的基本上平面的基底12,該基底12具有第一主 表面14,該第一主表面14具有樣本附著區(qū)16 (其周邊由假想線指示)，組織樣本15可W附 著在該樣本附著區(qū)16內(nèi)。載玻片10還提供在鄰近于樣本附著區(qū)16的第一位置處附著在 第一主表面14上的第一陽性對(duì)照物樣本20a和在鄰近于樣本附著區(qū)16的第二位置處附著 在第一主表面14上的第二陽性對(duì)照物樣本20b。第一和第二位置被間隔為使得第一和第二 陽性對(duì)照物樣本20a和20b的染色質(zhì)量指示組織樣本15的染色質(zhì)量。也就是說，當(dāng)對(duì)照物 樣本20a和2化分別被定位在組織樣本