一種半枝蓮藥材及其配方顆粒中野黃芩苷和野黃芩素的含量測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] -種半枝蓮藥材及其配方顆粒中野黃芩苷和野黃芩素的含量測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 半枝蓮為唇形科植物Scutellaria barbata D. Don的干燥全草。是一種常用中 藥，具清熱解毒，化瘀利尿的功效。用于疔瘡腫毒，咽喉腫痛，跌撲傷痛，水腫，黃疸，蛇蟲(chóng) 咬傷。主含黃酮類(lèi)成分，如黃芩素、漢黃芩素、芹菜素、木犀草素、柚皮素、野黃芩苷、7-羥 基_5,8二甲氧基黃酮、7-羥基_5,8二甲氧基黃酮-7-0-β -D-葡萄糖苷、5、7、8、2_四羥 基黃酮-7-〇-i3-D-葡萄糖苷等，還含有一些二萜和三萜內(nèi)酯類(lèi)等。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在中國(guó)藥 典2015年版一部半枝蓮藥材項(xiàng)下未收載薄層鑒別項(xiàng)目，收載了 2項(xiàng)含量測(cè)定，一項(xiàng)是以野 黃芩苷為指標(biāo)，采用分光光度法，測(cè)定藥材中的總黃酮含量；另一項(xiàng)是采用HPLC法，以甲 醇-水-醋酸（35 : 61 : 4)為流動(dòng)相測(cè)定野黃芩苷的含量。查閱文獻(xiàn)得知，目前半枝蓮 藥材及其制劑中都是以野黃芩苷為指標(biāo)，采用藥典的流動(dòng)相，測(cè)定野黃芩苷含量的。也查閱 到同時(shí)測(cè)定野黃芩素、木樨草素和芹菜素的報(bào)道，但采用的是梯度洗脫，其相對(duì)含量都比較 低。目前還未查閱到采用等度洗脫，同時(shí)測(cè)定野黃芩苷與野黃芩素的報(bào)道。在上述背景情 況下，為簡(jiǎn)便、快捷、多指標(biāo)控制半枝蓮藥材及其配方顆粒的質(zhì)量，發(fā)明了采用普通色譜儀、 等度洗脫，同時(shí)測(cè)定半枝蓮及其配方顆粒中的野黃芩苷和野黃芩素的含量。
[0003] 半枝蓮藥材配方顆粒的制備方法取半枝蓮飲片13000-14000g，分別加水8倍量， 煎煮提取二次，每次1-2小時(shí)，濾過(guò)，濾液70°C減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥或70°C減壓干燥， 加糊精適量，混勻，制粒成l〇〇〇g，分裝，得半枝蓮配方顆粒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 采用普通的等度洗脫，以體積比為12. 5 : 15-16. 2 : 71.3-72. 5的乙腈-甲 醇-0. 1%磷酸為流動(dòng)相；柱溫：30°C;在340±2nm處；同時(shí)測(cè)定了半枝蓮藥材及其配方顆粒 中野黃芩苷和野黃芩素的含量。方法簡(jiǎn)便、快捷，易于普及掌握；在三種不同的色譜柱上，各 波峰分離良好，基線平穩(wěn)，在44分鐘內(nèi)出峰完畢。
[0005] 通過(guò)方法學(xué)考察，野黃芩苷的進(jìn)樣量在0. 0744~0. 744 μ g，與峰面積呈良好的 線性關(guān)系（見(jiàn)表1、圖1)，回歸方程為：Y = 44. 173X-0. 9457, r = 0. 9999 ;野黃芩素進(jìn)樣 量在0. 0516~0. 3612 μ g，與峰面積呈良好的線性關(guān)系（見(jiàn)表2、圖2)，回歸方程為：Y = 51. 554X-0. 184, r = 0.9999。采用加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：野黃芩苷的平均回收率為 101. 18% (n = 9)，RSD為2. 67% (見(jiàn)表3);野黃芩素的平均回收率為101. 08% (η = 9)， RSD為1. 94% (見(jiàn)表4)。精密度（見(jiàn)表5)、穩(wěn)定性（見(jiàn)表6)、重復(fù)性（見(jiàn)表7)、專屬性（見(jiàn) 圖3、4、5)與柱耐用性（見(jiàn)表8、圖6、7、8)實(shí)驗(yàn)均符合方法學(xué)要求。適用于半枝蓮藥材及 其配方顆粒中野黃芩苷和野黃芩素的定量測(cè)定。
[0006] 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：
[0007] (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為12. 5 : 15-16. 2 : 71. 3-72. 5的乙 腈-甲醇-〇. 1%磷酸為流動(dòng)相；柱溫：30°C;檢測(cè)波長(zhǎng)為340±2nm ;理論板數(shù)按野黃芩苷峰 計(jì)算應(yīng)不低于3000 ;
[0008] (2)對(duì)照品溶液的制備分別取野黃芩苷和野黃芩素對(duì)照品適量，精密稱定，置棕 色量瓶中，加 70 %甲醇制成每lml含野黃芩苷40 μ g，野黃芩素為12 μ g的溶液，作為對(duì)照 品溶液；
[0009] (3)供試品溶液的制備取半枝蓮藥材細(xì)粉0. 5g，精密稱定；或半枝蓮配方顆粒 0. lg，精密稱定；分別置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，藥材細(xì)粉 以功率250W，頻率33kHz超聲處理30分鐘，配方顆粒以功率250W，頻率33kHz超聲處理10 分鐘，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液用0.45 μ m的微 孔濾膜濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0010] (4)測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜 儀，測(cè)定野黃芩苷和野黃芩素的含量。
[0010] 以島津Wondasil C1S與迪馬迪馬Diamonsil C1S色譜柱，優(yōu)選的半枝蓮藥材及其配 方顆粒的測(cè)定技術(shù)方案為：
[0012] (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為12.5 : 15 : 72.5的乙腈-甲 醇-0. 1 %磷酸為流動(dòng)相；柱溫：30°C;檢測(cè)波長(zhǎng)為340±2nm ;理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算應(yīng) 不低于3000 ;
[0013] (2)對(duì)照品溶液的制備分別取野黃芩苷和野黃芩素對(duì)照品適量，精密稱定，置棕 色量瓶中，加 70 %甲醇制成每lml含野黃芩苷40 μ g，野黃芩素為12 μ g的溶液，作為對(duì)照 品溶液；
[0014] (3)供試品溶液的制備取半枝蓮藥材細(xì)粉0. 5g，精密稱定；或半枝蓮配方顆粒 0. lg，精密稱定；分別置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，藥材細(xì)粉 以功率250W，頻率33kHz超聲處理10分鐘，配方顆粒以功率250W，頻率33kHz超聲處理30 分鐘，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液用0.45 μ m的微 孔濾膜濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0015] (4)測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜 儀，測(cè)定野黃芩苷和野黃芩素的含量。
[0016] 以安捷倫Agilent Eclipse Plus C1S色譜柱，優(yōu)選的半枝蓮藥材及其配方顆粒的 測(cè)定技術(shù)方案為：
[0017] (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為12.5 : 16.2 : 71.3的乙腈-甲 醇-0. 1%磷酸為流動(dòng)相；柱溫：30°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為340±2nm ;理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算 應(yīng)不低于3000 ;
[0018] (2)對(duì)照品溶液的制備分別取野黃芩苷和野黃芩素對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色 量瓶中，加70%甲醇制成每lml含野黃芩苷40 μ g，野黃芩素為12 μ g的溶液，作為對(duì)照品 溶液；
[0019] (3)供試品溶液的制備取半枝蓮藥材細(xì)粉0. 5g，精密稱定；或半枝蓮配方顆粒 0. lg，精密稱定；分別置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，稱定重量，藥材細(xì)粉 以功率250W，頻率33kHz超聲處理30分鐘，配方顆粒以功率250W，頻率33kHz超聲處理10 分鐘，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液用0.45 μ m的微 孔濾膜濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0020] (4)測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜 儀，測(cè)定野黃芩苷和野黃芩素的含量。
[0021] 本發(fā)明的原理如下：
[0022] 野黃芩苷及野黃芩素是苷與苷元的關(guān)系，都是黃酮類(lèi)化合物，含多個(gè)多酚羥基，易 溶于含水醇，二者光譜吸收?qǐng)D一致，都在288 ± 2nm和340 ± 2nm有最大吸收（見(jiàn)圖9、10)，但 340nm處?kù)`敏度高，所以以340nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，進(jìn)行含量測(cè)定。直接以含水甲醇超聲提取藥 材或配方顆粒中的野黃芩苷及野黃芩素，濾過(guò)后，進(jìn)樣即可。無(wú)萃取、無(wú)蒸干、簡(jiǎn)便、快捷、實(shí) 用。通過(guò)調(diào)整乙腈、甲醇與0. 1%磷酸的體積比，使2種成分在3種不同的色譜柱上，44分 鐘內(nèi)出峰完畢。再依據(jù)該2種成分的進(jìn)樣量在一定范圍內(nèi)，與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān) 系，而用于定量測(cè)定。
[0023] 本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)及有益效果如下：
[0024] (1)采用普通等度洗脫、反相色譜柱，以體積比為12-12. 5 : 15-16. 2 : 71. 3-72. 5 的乙腈-甲醇-0. 1%磷酸為流動(dòng)相；同時(shí)測(cè)定了半枝蓮藥材及其配方顆粒中的野黃芩苷及 野黃芩素的含量。通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相的比例，使2種成分在三種不同的色譜柱上，44分鐘出峰 完畢，各波峰分離良好。野黃芩苷和野黃芩素的同時(shí)定量測(cè)定尚屬首次報(bào)道。實(shí)現(xiàn)了簡(jiǎn)便、 快捷、科學(xué)、規(guī)范、雙指標(biāo)控制藥材與其配方顆粒質(zhì)量的愿望。
[0025] (2)半枝蓮藥材因含多種性質(zhì)近似的黃酮類(lèi)，要得到分離度良好的多種黃酮成分 的色譜峰，必須通過(guò)色譜柱的多因素耐用性試驗(yàn)研究。本發(fā)明獲得在三種不同的色譜柱上， 都分離良好的色譜條件（見(jiàn)圖6、7、8)?？朔怂幍湟徊堪胫ι徦幉捻?xiàng)下收載的含量測(cè)定 條件，無(wú)法將野黃芩苷及野黃芩素波峰有效分離（見(jiàn)圖11)，而導(dǎo)致無(wú)法準(zhǔn)確定量測(cè)定的弊 端，確保了含量結(jié)果的準(zhǔn)確性與重現(xiàn)性。
[0026] (3)本發(fā)明與中國(guó)藥典2015年版一部半枝蓮藥材項(xiàng)下的樣品前處理程序比較，藥 典方法較繁瑣、費(fèi)時(shí)，僅樣品提取就需要6-7小時(shí)，花費(fèi)石油醚與甲醇225ml ;而本發(fā)明藥材 提取花費(fèi)0.5小時(shí)，70%甲醇25ml ;配方顆?；ㄙM(fèi)10分鐘，70%甲醇25ml。以含水甲醇取 代石油醚和甲醇，不但減少了脂溶性成分提出，而且利于測(cè)定結(jié)束后，色譜柱的沖洗保護(hù)。 充分體現(xiàn)了本發(fā)明的進(jìn)步與顯著的實(shí)用效果。
[0027] (4)在野黃芩苷及野黃芩素的含量上，本