一種含胞磷膽堿鈉的藥物制劑中udpc的分析檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及對細(xì)胞代謝改善藥胞磷膽堿鈉注射液質(zhì)量進(jìn) 行分析的方法，具體涉及一種胞磷膽堿鈉注射液中尿苷二磷酸膽堿的分析檢測方法，該分 析檢測方法主要采用液相色譜法（即HPLC)分離測定胞磷膽堿鈉注射液中的雜質(zhì)尿苷二磷 酸膽堿。
【背景技術(shù)】
[0002] 胞磷膽堿鈉注射液的主要成分為胞磷膽堿鈉（英文名：CiticolineSodium，CAS: 33818-15-4)，化學(xué)名為膽堿胞嘧啶核苷二磷酸酯單鈉鹽。分子式為C14H25N4NaOnP2，分子量 為510. 31，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 胞磷膽堿是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)性磷脂生物合成的中間物質(zhì)。外源性給予胞磷膽堿，能通 過增加磷脂的合成快速修復(fù)神經(jīng)元細(xì)胞膜，促進(jìn)乙酰膽堿和多巴胺的合成，穩(wěn)定神經(jīng)遞質(zhì) 系統(tǒng)，并能夠促進(jìn)大腦的能量代謝。胞磷膽堿能增強(qiáng)上行性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)激活系統(tǒng)的功能，降低 腦血管阻力，增加腦血流量，改善大腦血液循環(huán)，促進(jìn)大腦物質(zhì)代謝，功能恢復(fù)。
[0005] 1956年Geiger在動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)胞磷膽堿能使腦損傷恢復(fù)。1957年Kennedy的 研究證實(shí)其在腦磷脂質(zhì)的合成中至關(guān)重要，1961年日本武田制藥公司開發(fā)生產(chǎn)出此產(chǎn)品， 并于1988年在我國注冊。目前，該品種制劑上市劑型有片劑、膠囊劑及注射劑，依托我公司 現(xiàn)有生產(chǎn)線，選擇開發(fā)胞磷膽堿鈉注射液劑型。國外上市的胞磷膽堿鈉注射液規(guī)格有2ml: 0. 25g及5ml:0. 5g;根據(jù)本品的用法用量及國內(nèi)外上市產(chǎn)品的信息，確定我司研發(fā)的制劑 規(guī)格為：胞磷膽堿鈉注射液2ml:0. 25g及5ml:0. 5g。
[0006] 胞磷膽堿鈉注射液中的雜質(zhì)UDPC(英文全稱為Uridine5'-(trihydrogendipho sphate)，P，_[2-(trimethylammonio)ethyl]ester,innersalt，CAS:99492_83_8,UDPC為 英文簡稱），化學(xué)名為尿苷二磷酸膽堿，分子式為C14H25N3012P2，分子量為489. 31，其結(jié)構(gòu)式如 下：
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[0008] 胞磷膽堿鈉嘧啶環(huán)上的兩個氮的孤對電子都沒有共輒，在酸性條件下，它的氮 被氫離子結(jié)合后有利于氨基離子（_NH3+)離去，水再作為親核試劑取代，最后異構(gòu)為雜質(zhì) UDPC〇
[0009] 反應(yīng)機(jī)理如下所示：
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[0011] 因此，實(shí)現(xiàn)胞磷膽堿鈉及其雜質(zhì)間的有效分離對測定胞磷膽堿鈉和各雜質(zhì)的量具 有重大意義。目前，本領(lǐng)域仍然期待有用于控制胞磷膽堿鈉注射液質(zhì)量的有效方法，尤其是 期待能夠快速、準(zhǔn)確地分析出胞磷膽堿鈉注射液中雜質(zhì)UDPC含量的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明目的是提供一種含胞磷膽堿鈉的藥物制劑中UDPC的分析檢測方法，該分 析檢測方法是一種可用于控制胞磷膽堿鈉質(zhì)量的有效方法。用特定的色譜分析條件，包括 使用C18色譜柱，以及使用磷酸鹽緩沖液-甲醇分離測定胞磷膽堿鈉注射液中相關(guān)雜質(zhì)的 高效液相色譜法，可以有效地實(shí)現(xiàn)胞磷膽堿鈉中雜質(zhì)UDPC的分離及測定。本發(fā)明人經(jīng)過反 復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用Inersil? 〇DS-3(型號為C18,柱長X內(nèi)徑為150X4. 6mm)色譜柱檢測，以 磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液（取0.Olmol/L四丁基氫氧化 銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 5)等體積混合）]-甲醇（二者的體積比95 :5)為流動相，可 以將胞磷膽堿鈉雜質(zhì)UDPC進(jìn)行有效分離，從而可以準(zhǔn)確控制胞磷膽堿鈉的質(zhì)量。本發(fā)明的 方法能簡單、快速、準(zhǔn)確地分離、檢測出胞磷膽堿鈉及其雜質(zhì)含量。
[0013] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種含胞磷膽堿鈉的藥物制劑中 UDPC的分析檢測方法，該分析檢測方法采用高效液相色譜法對含胞磷膽堿鈉的藥物制劑中 雜質(zhì)UDPC進(jìn)行分析檢測，包括以下步驟：
[0014] 第一步，用高效液相色譜法分析系統(tǒng)適用性溶液，系統(tǒng)適用性溶液的進(jìn)樣量為 20μ1，記錄色譜圖中胞磷膽堿鈉峰與5' -胞苷酸峰的分離度；
[0015] 第二步，當(dāng)所述第一步得到的胞磷膽堿鈉峰與5' -胞苷酸峰的分離度大于1. 5時， 再用高效液相色譜法分析含胞磷膽堿鈉的藥物制劑樣品溶液和對照溶液，藥物制劑樣品溶 液和對照溶液的進(jìn)樣量均為10μ1，記錄色譜圖至主成分保留時間的至少3倍，獲得藥物制 劑樣品溶液和對照溶液的高效液相色譜分析圖，從中讀取并計算雜質(zhì)數(shù)量、雜質(zhì)種類、雜質(zhì) 相對量、各色譜峰之間分離度中的至少一個信息；
[0016] 第三步，將所述第二步中得到的高效液相色譜分析圖中的峰面積值帶入到公式 中，計算出含胞磷膽堿鈉的藥物制劑中UDPC的含量，所述公式為UDPC的質(zhì)量百分含量= (藥物制劑樣品溶液中UDPC的峰面積+對照溶液中胞磷膽堿鈉的峰面積）Χ0. 5% ;
[0017] 在所述第一步和第二步中，色譜條件為：
[0018] 色譜柱為Inersi「K 0DS-3色譜柱；色譜柱的柱溫為30~40°C;流動相為磷酸鹽緩 沖液-甲醇混合溶液，其中磷酸鹽緩沖液與甲醇的體積比為95:5,磷酸鹽緩沖液的pH值為 4. 3~4. 7 ;流動相的流速為0. 9~1.lml/min;使用紫外檢測器，檢測波長為276nm。
[0019] 上述技術(shù)方案中的有關(guān)內(nèi)容解釋如下：
[0020] 1、上述方案中，含胞磷膽堿鈉的藥物制劑也可以指胞磷膽堿鈉注射液。
[0021] 2、上述方案中，所述系統(tǒng)適用性溶液的制備：將每100ml水中含有25mg的5' -胞 苷酸對照品溶液與每l〇〇ml水中含有25mg的胞磷膽堿鈉對照品溶液等體積混合，即得系統(tǒng) 適用性溶液。
[0022] 3、上述方案中，所述對照溶液的制備：精密量取所述藥物制劑樣品適量，用水定量 稀釋制成每lml中含0. 0125mg的溶液，作為對照溶液；
[0023] 所述藥物制劑樣品溶液的制備：精密量取含胞磷膽堿鈉的藥物制劑樣品適量，用 水定量稀釋制成每lml中含胞磷膽堿鈉2. 5mg的溶液，即為藥物制劑樣品溶液。
[0024] "精密稱取"系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。
[0025] 4、上述方案中，所述磷酸鹽緩沖液是通過以下步驟獲得的：將0.lmol/L的磷酸二 氫鉀溶液和四丁基銨溶液等體積混合，即得磷酸鹽緩沖液，其中，所述四丁基銨溶液取是通 過用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 5的0.Olmol/L四丁基氫氧化銨溶液得到的。
[0026] 所述磷酸鹽緩沖液具體是通過以下步驟獲得的：取磷酸二氫鉀13. 6g，加1000ml 水溶解；四丁基銨溶液的制備：取10 %四丁基氫氧化銨26ml，加水至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié) pH至6. 5 ;取磷酸二氫鉀溶液與四丁基銨溶液等體積混合，搖勻，即得。
[0027] 5、上述方案中，所述色譜柱的柱溫優(yōu)選為35 °C。
[0028] 6、上述方案中，所述流動相的流速優(yōu)選為1.Oml/min。
[0029] 7、上述方案中，所述磷酸鹽緩沖液的pH值優(yōu)選為4. 45~4. 55.
[0030] 8、上述方案中，所述Inersil1' 0DS-3色譜柱的生產(chǎn)廠商為日本GLSciences公司， 該InersiP〇DS-3色譜柱的填料粒徑為4μm，色譜柱的內(nèi)徑4. 6_，色譜柱的柱長為150_。 以上型號參數(shù)可以簡寫為4μπι，150X4. 6_，或簡寫為150_Χ4. 6_Χ4μπι，或其它類似 簡寫方式。
[0031] 9、上述方案中，所述磷酸鹽緩沖液中還加入有離子對試劑，優(yōu)選離子對試劑為 10%四丁基氫氧化銨水溶液。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在流動相中加入離子對試劑，在不干擾兩個已知 雜質(zhì)的前提下，能夠更好地分離胞磷膽堿鈉與雜質(zhì)5胞苷酸和UDPC，并且有效改善峰 形。
[0032] 本發(fā)明設(shè)計特點(diǎn)是：本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑的色譜柱， 即inersil? 〇DS-3(型號為C18,柱長X內(nèi)徑為150X4. 6mm)色譜柱，能夠有效分離胞磷膽 堿鈉中含有的兩個已知雜質(zhì)，即雜質(zhì)5'-胞苷酸和UDPC;在柱箱溫度為30~40°C的范圍 內(nèi)具有相當(dāng)好的分離效果，色譜峰的對稱性良好；在pH值為4. 3~4. 7的范圍內(nèi)具有相當(dāng) 好的分離效果。
[0033] 本發(fā)明方法針對胞磷膽堿鈉中的雜質(zhì)Y-胞苷酸和UDPC有良好的檢測效果。另 外，本發(fā)明采用等度條件對胞磷膽堿鈉中的雜質(zhì)進(jìn)行分析，有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0034] (1)分析時間較短，快速，僅需15分鐘左右即可完成胞磷膽堿鈉中的雜質(zhì)UDPC的 分析檢測。
[0035] (2)系統(tǒng)穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好。
[0036] (3)對高效液相色譜儀型號及性能要求不高，高效液相色譜儀可以使用島津LC Solution/LabSolution，或安捷倫ChemStation，或其他色譜系統(tǒng)。
[0037] (4)對胞磷膽堿鈉中的雜質(zhì)UDPC更具有針對性和適用性，并且測定的準(zhǔn)確度高。
【附圖說明】
[0038] 附圖1為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 5)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為35°C，流速為1. 0ml/min時的系統(tǒng)適用性HPLC 圖；
[0039] 附圖2為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 5)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為35°C，流速為1. 0ml/min時的樣品HPLC圖；
[0040] 附圖3為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 3)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為35°C，流速為1. 0ml/min時的系統(tǒng)適用性HPLC 圖；
[0041] 附圖4為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 3)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為35°C，流速為1. 0ml/min時的樣品HPLC圖；
[0042] 附圖5為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 7)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為35°C，流速為1. 0ml/min時的系統(tǒng)適用性HPLC 圖；
[0043] 附圖6為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 7)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為35°C，流速為1. 0ml/min時的樣品HPLC圖；
[0044] 附圖7為流動相為磷酸鹽緩沖液[0.lmol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基銨溶液 (取0. 01m0l/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4. 5)等體積混合）]-甲醇（磷酸 鹽緩沖液與甲醇的體積比為95 :5)，柱溫為30