一種測定多西他賽或紫杉醇的高效液相色譜-三重四級桿質譜聯(lián)用方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物分析領域，涉及一種測定多西他賽或紫杉醇的方法。更具體而言， 涉及一種基于高效液相色譜-三重四級桿質譜聯(lián)用(液-質聯(lián)用)技術定量分析多西他賽或 紫杉醇的方法。
【背景技術】
[0002] 多西他賽和紫杉醇為紫杉烷類抗癌藥物，是一類從短葉紫杉樹皮中提取的天然產(chǎn) 物，臨床用于治療乳腺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌以及頭頸癌等 [1<]。其作用機 制為通過與腫瘤細胞的微管蛋白結合，促進微管蛋白形成穩(wěn)定的微管，同時抑制其解聚，阻 斷細胞有絲分裂，對腫瘤細胞產(chǎn)生抑制和殺傷作用 [3]。
[0003]根據(jù)文獻查閱結果，生物樣品中多西他賽和紫杉醇的定量分析方法研究常用高效 液相色譜法分離目標化合物后在紫外檢測器上進行定量+ 6]。近年來，靈敏特異的液-質聯(lián) 用分析技術也越來越多地應用到紫杉烷類抗癌藥物的定量中，成為快速分離和鑒定的有力 手段 [M1]。文獻報道的測定生物樣品中多西他賽和紫杉醇含量的方法中，均采用電噴霧正 離子(ESI+)電離模式，通過檢測[M+H]+或[M+Na]+的準分子離子峰4特征性子離子的離子傳 輸通道，實現(xiàn)基于液-質聯(lián)用技術的定量分析。文獻中未見采用ESI(-)或APCI(-)電離模式 對紫衫烷類化合物進行定量分析的方法，這可能與該類化合物在負離子檢測模式下不易形 成去質子化的[Μ-ΗΓ峰有關。
[0004]然而，基于液-質聯(lián)用技術的定量分析也存在一些問題，如:基質效應和加合離子 的形成。ESI( + )電離模式的液-質聯(lián)用檢測中，某些化合物容易形成多種加合離子，且豐度 很高。紫杉烷類抗癌藥物由于其結構上含有多個可被氧化的基團（結構參見下文），在ESI (+ )電離模式下，容易與堿金屬離子產(chǎn)生加合的準分子離子峰(如：[M+Na]+和[M+K]+等）。質 譜圖上表現(xiàn)為多種離子化形式并存的情況，導致檢測靈敏度和重現(xiàn)性的下降。因此，形成信 號強且重現(xiàn)性好的單一離子化形式是最為理想的結果。由于鈉廣泛存在于玻璃或不銹鋼等 實驗器具，化合物或試劑中也有含鈉的雜質，為了避免在離子化過程中形成鈉的加合離子 而完全去除實驗體系中的鈉并非易事。文獻報道 [12]通過在流動相中添加伯胺的方法促進 單一離子的形成;或通過加入可與堿金屬離子形成螯合物的特殊試劑(如冠醚類化合物)來 減少[M+Na]+的形成[13]。然而伯胺類化合物的堿性極強，可能會造成色譜柱填料的劣化和紫 杉烷類化合物的降解。
[0005]
[0006] 紫杉烷類抗癌藥物的[M+Na]+準分子離子峰可在ESI( + )電離模式下產(chǎn)生特征性的 子離子碎片，使二級質譜檢測成為可能。但[M+Na]+的準分子離子峰打碎效率低，且ESI( + ) 電離模式下該類化合物可產(chǎn)生除[M+Na]+峰以外的多種離子化形式，不利于液-質聯(lián)用定量 分析。此外，選擇[M+Na]+峰進行測定時還可能受到樣品或環(huán)境中的鈉離子濃度變化的影 響，使測定結果產(chǎn)生誤差。M〇rtier[14]等采用向流動相中加入非揮發(fā)性的試劑，如乙酸鈉的 方法對檢測體系中的鈉離子濃度進行控制，使待測化合物形成穩(wěn)定、單一的[M+Na]+準分子 離子峰。范亞新[15]等探索了加入金屬離子的液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用方法，通過向液相流 動相中加入碳酸鋰試劑，在ESI( +)電離模式下利用紫杉醇的鋰加合離子進行檢測。但非揮 發(fā)性試劑可能對質譜檢測儀造成污染。且加入鋰離子后雖然[M+Li]+峰成為基峰，[M+Na]+峰 得到了一定程度的抑制，但質譜圖上多種離子化形式并存的情況依然存在，[M+Na]+峰信號 強度約為基峰信號的50%，另可觀察到[M+K]1$[15]。
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【發(fā)明內容】

[0023]本發(fā)明旨在針對多西他賽或紫杉醇在質譜檢測ESI( + )電離模式下易形成[M+Na] +等堿金屬加合的準分子離子峰，造成多種離子化形式并存，影響