后甲醒提取液放置于具塞Ξ角燒瓶中；
[0054] (4)氧化反應(yīng):取5ml步驟(3)得到的所述凈化后甲醒提取液于具塞Ξ角燒瓶中，加 入10ml質(zhì)量百分數(shù)為30%的過氧化氨溶液，封緊瓶口，進行氧化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至 室溫;所述氧化反應(yīng)條件為:80°C，2h;
[0055] (5)滴定:往步驟(4)處理后的溶液中加入過氧化氨酶催化過氧化氨分解反應(yīng);然 后加入0.15ml酪獻指示劑，用0.Imol/L的氨氧化鋼溶液進行滴定，記錄消耗的氨氧化鋼的 體積Vi;所述過氧化氨酶催化過氧化氨的分解反應(yīng)的條件為:過氧化氨酶濃度為Img/ml，加 入量為6ml，反應(yīng)20min;
[0056] (6)空白試驗:將步驟(4)中的所述凈化后甲醒提取液替換為去離子水，其他步驟 按照(4)-(5)進行，記錄空白試驗消耗的氨氧化鋼的體積為Vo;
[0057] (7)結(jié)果計算步驟：
[0058] 上述步驟所設(shè)及到的化學反應(yīng)方程式：
[0化9] C出0+出化=C出化+化下；
[0060]CH2〇2+NaOH=CHNa+H2〇；
[0061 ]出化=出0+化(過氧化氨酶為催化劑）；
[0062] 所述待測飯魚樣品中甲醒的含量按照下列公式計算：
[0063] 甲醒含量(mg/Kg) = [M* 1 03* (V廣Vo) * 1 0-3*C]/m
[0064] 公式中；
[0065] Μ:甲醒的摩爾質(zhì)量，為30g/mol;
[0066] C:氨氧化鋼的物質(zhì)的量濃度，為O.lmol/L;
[0067] Vi:樣品中消耗的氨氧化鋼的體積，單位為ml;
[0068] Vo:空白試驗消耗的氨氧化鋼的體積，單位為ml;
[0069] m:參與氧化反應(yīng)的所述凈化后甲醒提取液所代表的飯魚的質(zhì)量，單位為Kg;本實 施例中，m為：（5ml/50ml)*5*l〇-3Kg= 0.5*l〇-3Kg。
[0070] 上述1.4實驗步驟中步驟(4)氧化反應(yīng)，甲醒被雙氧水氧化生成甲酸的反應(yīng)速度較 慢，所W需要對其反應(yīng)條件進行優(yōu)化，氧化反應(yīng)條件的優(yōu)化方法如下：
[0071] 1)反應(yīng)溫度的優(yōu)化:設(shè)置四組實驗，每組實驗均將5ml濃度為2mg/L的甲醒溶液中 加入10ml雙氧水，然后分別在60°(3、70°(3、80°(3、90°(3下反應(yīng)化，冷卻后均加入61111過氧化氨 酶，反應(yīng)20min，再加入酪獻指示劑1.51111，用0.1111〇1/1的氨氧化鋼滴定至終點，記錄消耗的 氨氧化鋼的量，結(jié)果如表1所示，在80°C，消耗的氨氧化鋼的量達到最大，說明80°C時，甲醒 與過氧化氨的反應(yīng)更加徹底，為最佳的反應(yīng)溫度。
[0072] 表1不同反應(yīng)溫度下5ml濃度為2mg/L的甲醒溶液被氧化成甲酸所消耗的氨氧化鋼 的量
[0073]
[0074] 2)反應(yīng)時間的優(yōu)化:設(shè)置四組實驗，每組實驗均將5ml濃度為2mg/L的甲醒溶液中 加入10ml雙氧水，然后分別在80°C下反應(yīng)化、1.5h、化、2.5h，冷卻后均加入6ml過氧化氨酶， 反應(yīng)20min，再加入酪獻指示劑1.5ml，用0.Imol/L的氨氧化鋼滴定至終點，記錄消耗的氨氧 化鋼的量，結(jié)果如表2所示，在反應(yīng)時間為2h時，消耗的氨氧化鋼的量達到最大，說明反應(yīng)時 間2h時，甲醒與過氧化氨的反應(yīng)更加徹底，為最佳的反應(yīng)時間。
[0075]表2不同反應(yīng)時間下5ml濃度為2mg/L的甲醒溶液被氧化成甲酸所消耗的氨氧化鋼 的量 「00761
[0077] ~3)過氧化氨添加量的優(yōu)化:設(shè)置四組實驗，四組實驗將5ml濃度為2mg/L的甲醒溶 液中分別加入5ml、7.5ml、10ml、15ml質(zhì)量分數(shù)為30%的過氧化氨溶液（甲醒溶液與過氧化 氨溶液的體積比分別為1:1、1:1.5、1: 2、1:2.5)，然后在80°C下反應(yīng)化，冷卻后均加入6ml過 氧化氨酶，反應(yīng)20min，再加入酪獻指示劑1.5ml，用0.Imol/L的氨氧化鋼滴定至終點，記錄 消耗的氨氧化鋼的量，結(jié)果如表3所示，當甲醒溶液與過氧化氨溶液的體積比為1:2時，消耗 的氨氧化鋼的量達到最大，說明體積比為1:2時，甲醒與過氧化氨的反應(yīng)更加徹底，即10ml 為最佳的過氧化氨添加量。
[0078] 表3不同過氧化氨添加量下5ml濃度為2mg/L的甲醒溶液被氧化成甲酸所消耗的氨 氧化鋼的量
[0079]
[0080] 上述1.4實驗步驟的步驟(5)中所述過氧化氨酶催化過氧化氨的分解反應(yīng)的條件 的確定：
[0081] 用憐酸緩沖液將過氧化氨酶配成Img/ml的溶液，設(shè)置四組實驗，每組實驗每組均 加入10ml質(zhì)量百分數(shù)為30%的過氧化氨溶液，分別加入上述配置好的過氧化氨酶溶液1、2、 4、6ml，37°C下放置5min、lOmin、15min、20min后，加入少量的二氧化儘（二氧化儘可催化過 氧化氨分解），結(jié)果見表4可見，10ml雙氧水加入6ml濃度為Img/ml的過氧化氨溶液，在37°C、 20min的條件下全部分解。
[0082] 表4雙氧水在過氧化氨酶的作用分解實驗
[0083]
【主權(quán)項】
1. 一種鲅魚中甲醛含量的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法通過氫氧化鈉滴定過 氧化氫氧化甲醛所產(chǎn)生的甲酸，來定量測定鲅魚中的甲醛含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種鲅魚中甲醛含量的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包 括鲅魚預(yù)處理、甲醛提取、凈化、氧化反應(yīng)、滴定、空白試驗以及結(jié)果計算步驟。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述一種鲅魚中甲醛含量的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法具 體是:首先進行鲅魚預(yù)處理，然后使用超聲波萃取法來提取預(yù)處理后鲅魚中的甲醛，得到粗 提液，將所述粗提液進行凈化，得到凈化后甲醛提取液，在所述氧化反應(yīng)步驟中添加過氧化 氫溶液將所述凈化后甲醛提取液中的甲醛氧化生成甲酸，在所述滴定步驟以酚酞為指示 劑，用氫氧化鈉滴定所述甲酸，獲得所述甲酸的含量，并設(shè)置空白試驗，根據(jù)所述空白試驗 的結(jié)果以及所述甲酸的含量計算獲得鲅魚中甲醛含量。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述一種鲅魚中甲醛含量的檢測方法，其特征在于，所述測定 方法具體包括下列步驟： (1) 鲅魚預(yù)處理:取待測鲅魚樣品，組織搗碎機搗碎，攪拌均勻后稱取5g，精確至O.Olg， 置于具塞三角瓶中，加入45ml去離子水，封緊瓶口待用； (2) 甲醛提取:使用超聲波萃取法來提取預(yù)處理后鲅魚中的甲醛，得到粗提液，具體是： 將步驟(1)預(yù)處理后的鲅魚超聲萃取30min，得到粗提液;所述超聲萃取功率為100W; (3) 凈化:將步驟(2)中得到的所述粗提液在10000轉(zhuǎn)/min條件下離心15min，取上清液， 收集離心后下層溶液加5ml去離子水，混勻后在10000轉(zhuǎn)/min條件下離心lOmin，收集上層上 清液，合并兩次離心獲得的上清液，并定容至50ml，得到凈化后甲醛提取液，將所述凈化后 甲醛提取液放置于具塞三角燒瓶中； (4) 氧化反應(yīng)：取5ml步驟（3)得到的所述凈化后甲醛提取液于具塞三角燒瓶中，加入 10ml質(zhì)量百分數(shù)為30%的過氧化氫溶液，封緊瓶口，進行氧化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室 溫;所述氧化反應(yīng)條件為:80°C，2h; (5 )滴定:往步驟(4 )處理后的溶液中加入過氧化氫酶催化過氧化氫分解反應(yīng);然后加 入0.15ml酚酞指示劑，用0.lmol/L的氫氧化鈉溶液進行滴定，記錄消耗的氫氧化鈉的體積 Vi; (6) 空白試驗:將步驟(4)中的所述凈化后甲醛提取液替換為去離子水，其他步驟按照 (4)-( 5)進行，記錄空白試驗消耗的氫氧化鈉的體積為Vo; (7) 結(jié)果計算:所述待測鲅魚樣品中甲醛的含量按照下列公式計算： 甲醛含量(mg/Kg)=[M*103*(Vi-V〇)*10-3*C]/m 公式中： M:甲醛的摩爾質(zhì)量，為30g/mol; C:氫氧化鈉的物質(zhì)的量濃度，為0.lmol/L; Vi:樣品中消耗的氫氧化鈉的體積，單位為ml; Vo:空白試驗消耗的氫氧化鈉的體積，單位為ml; m:參與氧化反應(yīng)的所述凈化后甲醛提取液所代表的鲅魚的質(zhì)量，單位為Kg。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述一種鲅魚中甲醛含量的檢測方法，其特征在于，步驟(5)中，所述 過氧化氫酶催化過氧化氫的分解反應(yīng)的條件為:過氧化氫酶濃度為lmg/ml，反應(yīng)溫度為37 °C，加入量為6ml，反應(yīng)20min。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種鲅魚中甲醛含量的檢測方法，屬于水產(chǎn)品的食品安全領(lǐng)域。所述檢測方法具體是:首先進行鲅魚預(yù)處理，然后使用超聲波萃取法來提取預(yù)處理后鲅魚中的甲醛，得到粗提液，將所述粗提液進行凈化，得到凈化后甲醛提取液，在所述氧化反應(yīng)步驟中添加過氧化氫溶液將所述凈化后甲醛提取液中的甲醛氧化生成甲酸，在所述滴定步驟以酚酞為指示劑，用氫氧化鈉滴定所述甲酸，獲得所述甲酸的含量，并設(shè)置空白試驗，根據(jù)所述空白試驗的結(jié)果以及所述甲酸的含量計算獲得鲅魚中甲醛含量。本發(fā)明能有效提取并檢測鲅魚中的甲醛，且檢測成本低。
【IPC分類】G01N21/78
【公開號】CN105445260
【申請?zhí)枴緾N201510789129
【發(fā)明人】勵建榮, 張麗華, 李燦嬰, 孫協(xié)軍, 馬春穎
【申請人】渤海大學
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年11月16日