一種同時(shí)定量檢測(cè)saa/pct/crp的檢測(cè)裝置的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是一種同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]血清淀粉樣蛋白A(SAA)是一種高度異質(zhì)性的急性相反應(yīng)蛋白，主要由肝細(xì)胞產(chǎn)生，其相對(duì)分子量約為12000 AAA這種急性反應(yīng)物在炎癥反應(yīng)中的濃度會(huì)比其在正常時(shí)升高1000倍，升幅高于CRP，此時(shí)它經(jīng)由其N(xiāo)端與高密度脂蛋白(HDL)結(jié)合可以置換與HDL結(jié)合的載脂蛋白A-1(ApoA-1)從而形成急性相時(shí)的SAA/HDL復(fù)合體，其半衰期僅為50分鐘左右。研究表明，在炎癥嚴(yán)重的情況下，SAA表達(dá)量的高低與壞死細(xì)胞和組織的數(shù)量密切相關(guān)。SAA的表達(dá)量在炎癥發(fā)生的第3天出現(xiàn)高峰，第7天回到基線。
[0003]降鈣素原(PCT)是一種蛋白質(zhì)，當(dāng)嚴(yán)重細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時(shí)它在血漿中的水平升高。自身免疫、過(guò)敏和病毒感染時(shí)PCT不會(huì)升高。局部有限的細(xì)菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會(huì)導(dǎo)致其升高。細(xì)菌內(nèi)毒素在誘導(dǎo)過(guò)程中擔(dān)任了至關(guān)重要的作用。PCT在人體內(nèi)的半衰期為25-30h，穩(wěn)定性好，在正常人血清中含量極低。在導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)的許多情況下，諸如細(xì)菌性感染、胰腺炎、燒傷、多發(fā)傷，血中CT前肽物質(zhì)的所剪切產(chǎn)物異常升高，其中PCT是最主要的產(chǎn)物，而CT無(wú)明顯變化。血PCT水平與感染及損傷的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，且已成為用于膿毒癥，嚴(yán)重膿毒癥，膿毒癥休克的診斷和療效監(jiān)測(cè)的有效指標(biāo)。
[0004]PCT反映了全身炎癥反應(yīng)的活躍程度。影響PCT水平的因素包括被感染器官的大小和類型、細(xì)菌的種類、炎癥的程度和免疫反應(yīng)的狀況。另外，PCT只是在少數(shù)患者的大型外科術(shù)后l-4d可以測(cè)到。
[0005]C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)，1930年Tillet和Francis因在急性大葉性肺炎患者血清中發(fā)現(xiàn)能在鈣離子存在時(shí)與肺炎球菌C多糖起沉淀反應(yīng)而得名，是人類重要的急性期反應(yīng)蛋白，急性期濃度可升高上千倍，循環(huán)中的CRP半衰期為19小時(shí)。人類CRP是由肝臟產(chǎn)生，由五個(gè)相同的亞基依靠非共價(jià)鍵形成的環(huán)狀五聚體，這一特征性結(jié)構(gòu)使其歸類于五聚素(一組具有免疫防御特性的鈣結(jié)合蛋白)家族。
[0006]與C反應(yīng)蛋白(CRP)類似，血清淀粉樣蛋白A的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標(biāo)，有助于診斷炎癥，評(píng)估其活性，監(jiān)控其活動(dòng)及治療。但是，SAA檢測(cè)在診斷腎移植排斥反應(yīng)伴發(fā)病毒感染的患者(特別是進(jìn)行免疫抑制治療的患者)以及用腎上腺皮質(zhì)激素治療的囊性纖維化患者方面，比PCT更能夠準(zhǔn)確判斷炎癥的活動(dòng)狀態(tài)
[0007]PCT對(duì)嚴(yán)重細(xì)菌感染診斷有較高的診斷效能，并具有較高的靈敏度和特異度。優(yōu)于CRP和SAA等感染標(biāo)志物，PCT對(duì)病毒感染與細(xì)菌感染的鑒別診斷有一定的應(yīng)用價(jià)值。但是，在自身免疫疾病的炎癥性疾病活動(dòng)期間，PCT含量無(wú)升高，但CRP含量升高。在小兒感染性疾病早期，很難鑒別是細(xì)菌感染還是病毒感染CRP即對(duì)病毒感染缺乏敏感性，而SAA在細(xì)菌和病毒感染早期均可升高。另有研究表明CRP和SAA均可預(yù)示較差的預(yù)后，比如復(fù)發(fā)或死亡，而監(jiān)測(cè)感染急性期反應(yīng)，SAA是比CRP即更敏感的指標(biāo)
[0008]研究表明在診斷炎癥相關(guān)疾病，單獨(dú)使用一種指標(biāo)CRP、PCT或SAA不能有效準(zhǔn)確診斷，臨床上可將SAA，PCT和CRP等感染相關(guān)指標(biāo)與臨床資料相結(jié)合，對(duì)感染性疾病的診斷具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置的制備方法。
[0010]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0011]一種同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置，包括人血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測(cè)試紙、人降鈣素原(PCT)檢測(cè)試紙和C-反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)試紙，其中，
[0012]所述人血清淀粉樣蛋白A檢測(cè)試紙由包被SAA抗體(T線)和平行包被羊抗鼠IgG(C線)的硝酸纖維素膜、含有膠體金標(biāo)記的配對(duì)的抗人SAA抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；
[0013]所述人降鈣素原(PCT)檢測(cè)試紙由包被PCT抗體(T線)和平行包被抗鼠IgG (C線)的硝酸纖維素膜、含有膠體金標(biāo)記的配對(duì)抗人PCT抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；
[0014]所述c-反應(yīng)蛋白檢測(cè)試紙由包被CRP抗體(T線)和平行包被羊抗鼠IgG(C線)的硝酸纖維素膜、含有膠體金標(biāo)記的配對(duì)的抗人CRP抗體的膠體金墊、吸樣墊、樣品墊和塑料底板組成；
[0015]上述各試紙(人血清淀粉樣蛋白A檢測(cè)試紙、人降鈣素原檢測(cè)試紙和C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)試紙)中吸樣墊、硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊從塑料底板的一端依次排列至另一端。
[0016]優(yōu)選的，上述同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置，所述人血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測(cè)試紙和C-反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)試紙的樣品墊是由處理液處理的無(wú)紡布于室溫相對(duì)濕度不高于30% (—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存而得到的，其中，所述處理液包括50mM Tris^0.5%Tween-20、0.1 %牛血清白蛋白(BSA)、0.5%Trt1n-100；所述人降鈣素原(PCT)檢測(cè)試紙的樣品墊由濾血濾紙和經(jīng)紅細(xì)胞單抗處理后的纖維玻纖膜組成，其中，上層為纖維玻纖膜、下層為濾血濾紙，纖維玻纖膜和濾血濾紙的邊緣有l(wèi)_2mm重疊，于室溫相對(duì)濕度不高于30% (—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存而得到的。
[0017]優(yōu)選的，上述同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置，所述各試紙(人血清淀粉樣蛋白A檢測(cè)試紙、人降鈣素原檢測(cè)試紙和C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)試紙)的吸樣墊為吸水濾紙。
[0018]優(yōu)選的，上述同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置，所述各試紙的硝酸纖維素膜(NC膜)是由下述方法制備得到的:
[0019]人血清淀粉樣蛋白A(SAA)檢測(cè)試紙的硝酸纖維素膜:將SAA抗體用含1%的0.01MpH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成0.8-1.5mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數(shù)用噴膜儀進(jìn)行劃線，包被試紙條的SAA抗體作為T(mén)線，同時(shí)將羊抗鼠IgG用含1%的0.01MpH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)配制成l-2mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數(shù)用噴膜儀進(jìn)行劃線，包被試紙條的羊抗鼠IgG作為C線，于室溫相對(duì)濕度不高于30%(—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0020]人降鈣素原(PCT)檢測(cè)試紙的硝酸纖維素膜:將PCT抗體用含1%的0.01M pH 7.4磷酸鹽緩沖液(ros)配制成0.8-1.5mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4u 1 /cm的參數(shù)用噴膜儀進(jìn)行劃線，包被試紙條的PCT抗體作為T(mén)線，同時(shí)將羊抗鼠IgG用含1 %的0.01M pH7.4磷酸鹽緩沖液(roS)配制成1 -2mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4u 1 /cm的參數(shù)用噴膜儀進(jìn)行劃線，包被試紙條的羊抗鼠IgG作為C線，于室溫相對(duì)濕度不高于30% (—般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存?zhèn)溆茫?br>[0021 ] C-反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)試紙的硝酸纖維素膜:將CRP抗體用含1%的0.01M pH 7.4磷酸鹽緩沖液(ros)配制成0.8-1.5mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4u 1 /cm的參數(shù)用噴膜儀進(jìn)行劃線，包被試紙條的CRP抗體作為T(mén)線，同時(shí)將羊抗鼠IgG用含1 %的0.01M pH7.4磷酸鹽緩沖液(roS)配制成1 -2mg/ml的抗體溶液，在NC膜上以1.2-1.4u 1 /cm的參數(shù)用噴膜儀進(jìn)行劃線，包被各自試紙條的羊抗鼠IgG作為C線，于室溫相對(duì)濕度不高于30 % (一般在濕度為15-30%)的條件下干燥，密封保存?zhèn)溆谩?br>[0022]優(yōu)選的，上述同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置，所述各試紙(人血清淀粉樣蛋白A檢測(cè)試紙、人降鈣素原檢測(cè)試紙和C-反應(yīng)蛋白檢測(cè)試紙)的寬度為3-4mm，長(zhǎng)度為7cm，所述各試紙的T線(檢測(cè)線)和C線(質(zhì)控線)的間距為0.7cm。
[0023]優(yōu)選的，上述同時(shí)定量檢測(cè)SAA/PCT/CRP的檢測(cè)裝置，所述各試紙的膠體金墊是由下述方法制備