一種消癥止痛顆粒中三七的含量測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及到的是一種中藥復(fù)方質(zhì)量控制的領(lǐng)域，具體涉及一種消癒止痛顆粒中 的Η走含量測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 消癒止痛顆粒原方來(lái)源于名老中醫(yī)驗(yàn)方，由丹參、川寫、Η走等9味藥材組成，具 有巧癒消癒、行氣止痛的功效。該方不僅能明顯縮減子宮內(nèi)膜異位癥患者的盆腔包塊，消除 和減輕患者的痛經(jīng)，同時(shí)還能有效緩解胸脅、乳房脹痛，舒緩情志等。
[0003] 復(fù)方中Η走的現(xiàn)有測(cè)定方法主要采用高效液相色譜梯度洗脫系統(tǒng)，采用紫外檢測(cè) 器進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)在203nm。供試液的制備采用正了醇提取法、甲醇提取結(jié)合正了醇 萃取法、己醇提取結(jié)合正了醇萃取法、大孔樹(shù)脂除雜法、大孔樹(shù)脂結(jié)合正了醇萃取法等方法 制備供試液，上述送些方法都存在供試液制備方法步驟重復(fù)操作，過(guò)程兀長(zhǎng)的問(wèn)題，同時(shí)， 203nm處為紫外末端吸收，也是雜質(zhì)和溶劑峰的吸收波長(zhǎng)，故上述測(cè)定方法重復(fù)性、準(zhǔn)確度 均較低。
[0004] 《中國(guó)藥典》2010年版收載的品種如：S走血傷寧膠囊、云南白藥膠囊、 沈陽(yáng)紅藥膠囊、乳癖消膠囊、珍黃膠囊和消栓通絡(luò)膠囊等，丹義婦康煎膏國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) WS-10227狂D0227) 2002中均含有Η走，且均采用了正了醇提取或萃取的樣品制備過(guò)程，運(yùn) 用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器，在203nm處進(jìn)行測(cè)定，除Η走止血膠囊測(cè)定了人參皂巧Rgi 和化1兩個(gè)指標(biāo)，其它品種僅測(cè)定了人參皂巧Rgi，表明采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器的 測(cè)定方法，難W同時(shí)測(cè)定Η走皂巧Ri、人參皂巧Rgi和人參皂巧化1的含量。
[0005] 本處方藥味多，成分復(fù)雜，對(duì)上述通用方法進(jìn)行了認(rèn)真考察，同時(shí)對(duì)流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn) 行了詳細(xì)優(yōu)化，在采用紫外檢測(cè)器的條件下，運(yùn)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定上述方法制備 樣品中的Η走皂巧Ri、人參皂巧Rgi和人參皂巧化1的含量，色譜基線起伏較大，雜質(zhì)和溶 劑對(duì)目標(biāo)峰存在明顯干擾，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差，準(zhǔn)確度低。表明采用W上方法均不能對(duì)本品中的 Η走進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。
[0006] 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器是一種新型的通用型檢測(cè)器，樣品流入檢測(cè)器后，經(jīng)過(guò)霧化、蒸 發(fā)溶劑、激光束檢測(cè)后，能消除掉溶劑和部分雜質(zhì)的紫外吸收影響，基線平整。
[0007] 基于W上情況，本發(fā)明W蒸發(fā)光散射檢測(cè)器代替紫外檢測(cè)器，對(duì)消癒止痛顆粒中 的Η走進(jìn)行了含量測(cè)定研究，對(duì)各種供試液制備方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，最終，我們選擇了最簡(jiǎn)單 的超聲處理法制備供試液和最簡(jiǎn)單的流動(dòng)相洗脫系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。該方法簡(jiǎn)單，專屬性和重 復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了一種消癒止痛顆粒中Η走的含量測(cè)定方法，該方法利用高效液相色 譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法，同時(shí)測(cè)定顆粒中的Η走皂巧Ri、人參皂巧Rgi和人參皂巧化1的 含量。本發(fā)明包括W下步驟。
[0009] 1、對(duì)照品溶液的制備；精密稱取Η走皂巧Ri對(duì)照品、人參皂巧Rgi對(duì)照品及人參皂 巧抓1對(duì)照品適量，加甲醇制成混合對(duì)照品溶液，即得。配置成高低兩種不同濃度的對(duì)照品 溶液。
[0010] 2、供試品溶液的制備；取本品適量，研細(xì)，取約l.Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入30 %己臘25ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用30 %己臘補(bǔ)足 減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0011] 3、色譜條件；W十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑；W己臘-水為流動(dòng)相，按表1 中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；應(yīng)用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度100~11(TC，載氣流速為 2. 0~3.化/min,流速1.0ml/min。優(yōu)選的漂移管溫度106°C，載氣流速為3.化/min。
[0012] 4、樣品分析；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀， 測(cè)定，W外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算結(jié)果，即得。
[0013] 有益效果：
[0014] 本發(fā)明采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器代替紫外檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定本品中有效成分Η走皂 巧Ri、人參皂巧Rgi和人參皂巧化1的含量，可明顯提高測(cè)定方法的準(zhǔn)確度、顯著縮短檢測(cè)時(shí) 間等，同時(shí)供試液的制備方法更加簡(jiǎn)單。兩種方法比較結(jié)果見(jiàn)下表。本發(fā)明具有較強(qiáng)的專 屬性和良好的重現(xiàn)性。真正體現(xiàn)了本藥品安全、有效、質(zhì)量可控。兩種測(cè)定方法中的部分圖 譜見(jiàn)圖1~9。
[0015] 表1兩種方法測(cè)定本品的結(jié)果比較
[0016]

【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1 Η走皂巧Ri、人參皂巧Rgi、人參皂巧化1對(duì)照品的HPLC圖譜（VWD)
[001引圖2缺Η走陰性HPLC圖譜（VWD)-大孔樹(shù)脂法制備供試液 [001引圖3樣品HPLC圖譜（VWD)-大孔樹(shù)脂法巧[J備供試液
[0020] 圖4 Η走皂巧Ri、人參皂巧Rgi、人參皂巧化1對(duì)照品的HPLC圖譜（VWD)
[0021] 圖5缺Η走陰性HPLC圖譜（VWD)-正了醇萃取法制備供試液
[0022] 圖6樣品HPLC圖譜（VWD)-正了醇萃取法制備供試液
[0023] 圖7 Η走皂巧Ri、人參皂巧Rgi、人參皂巧化1對(duì)照品的HPLC圖譜巧LSD)
[0024] 圖8缺Η走陰性HPLC圖譜巧LSD)-超聲處理法制備供試液
[002引圖9樣品HPLC圖譜巧LSD)-超聲處理法巧[J備供試液
[0026] 圖10 Η走皂巧Ri線性關(guān)系圖
[0027] 圖11人參皂巧帖線性關(guān)系圖 [002引圖12人參皂巧抓1線性關(guān)系圖
【具體實(shí)施方式】
[0029] 實(shí)施例1
[0030] 1、儀器、試藥及樣品
[0031] 儀器；Agilentl260高效液相色譜儀，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（Alltech ELSD2000E巧。 Sartorius型電子天平；KQ-300E超聲波清洗器（頻率40KHZ，功率300W)，Cis色譜柱（Luna， 250 X 4. 6mm，5 μ m)。
[003引試藥；己臘和甲醇（色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），超純水，其余試劑均為 分析純。
[003引對(duì)照品；S走皂巧Ri (含量測(cè)定化批號(hào)：110745-200617)、人參皂巧Rgi(含量測(cè) 定用，批號(hào)；110703-201027)、人參皂巧化1 (含量測(cè)定用，批號(hào)；110704-201122)，均由中國(guó) 藥品生物制品檢定所提供。
[0034] 樣品；消癒止痛顆粒（120402、120403、120404、120901、120902、120903)
[0035] 2、系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)；對(duì)流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了篩選和優(yōu)化，分別考察了 W甲醇-水、己 臘-水、己臘-磯酸（均采用梯度洗脫方式），最終采用己臘-水系統(tǒng)（系統(tǒng)比例見(jiàn)表2)， 該洗脫條件峰分離度好，時(shí)間短。
[0036] 表2 Η屯含量測(cè)定的流動(dòng)相條件
[0037]
[003引 實(shí)施例2
[0039] 供試品溶液的制備；取本品顆粒適量，研細(xì)，取約l.Og，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入30 %己臘25ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用30 %己臘補(bǔ) 足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0040] 實(shí)施例3
[0041] 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)；根據(jù)表2的流動(dòng)相條件，對(duì)漂移管溫度和載氣流速進(jìn)行了考察， 漂移管溫度在l〇(TC，載氣流速為3.化/min時(shí)，測(cè)定本品中Η走的含量取得了良好的測(cè)定 效果。
[004引 實(shí)施例4
[0043] 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)；根據(jù)表2的流動(dòng)相條件，對(duì)漂移管溫度和載氣流速進(jìn)行了考察， 漂移管溫度在11(TC，載氣流速為2.化/min時(shí)，測(cè)定本品中Η走的含量取得了良好的測(cè)定 效果。