一種清熱散結膠囊指紋圖譜的建立方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及中藥制劑的質量控制方法，特別是設及一種用高效液相色譜法對清熱 散結膠囊制劑指紋圖譜的構建方法及其指紋圖譜。
【背景技術】
[0002] 中藥質量控制是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容，指紋圖譜技術被認為是中藥質量控制研 究的有效手段。中藥指紋圖譜能比較全面地反映中藥中化學物質的種類與數(shù)量，是實現(xiàn)中 藥真實性、質量可控性和產(chǎn)品穩(wěn)定性的可行模式，能更好地反映中藥的內(nèi)在品質。隨著中藥 指紋圖譜及化學模式識別技術的發(fā)展，指紋圖譜技術已日益成為國內(nèi)外廣泛接受的中藥質 量評價模式?；诙恐讣y圖譜技術的中藥質量控制模式是W傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論體系為基礎 的綜合控制模式，體現(xiàn)了中醫(yī)藥整體治療的特色。定量指紋圖譜技術在原有指紋圖譜的方 法上賦予指紋圖譜大量的定性、定量信息共同應用于中藥質量控制，對指紋圖譜中目標成 分尤其是有效成分進行準確定量，使中藥質量控制更加準確，能更真實反映中藥的質量狀 況和產(chǎn)品組成，產(chǎn)品的質量和穩(wěn)定性更加可靠。
[0003] 清熱散結膠囊是由千里光提取制成的純中藥制劑，具有消炎解毒、散結止痛、抗腫 瘤的作用，用于急性結膜炎、急性咽喉炎、急性扁桃腺炎、急性菌頻、上呼吸道炎、急性支氣 管炎、淋己結炎、瘡巧疼痛、中耳炎、皮炎濕疹等。文獻報道千里光的主要有效成分是綠原 酸，常作為含量測定中質量控制指標性成分。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥的高速發(fā)展，現(xiàn)行的清熱散結膠 囊的質量控制標準已不能真實反映清熱解散膠囊的內(nèi)在品質及批次之間產(chǎn)品質的一致性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種清熱散結膠囊指紋 圖譜的建立方法及其指紋圖譜，該方法用高效液相色譜法對清熱散結膠囊種的指標成分進 行含量測定，獲得指紋圖譜，用于評價和控制清熱散結膠囊的質量，可W保證清熱散結膠囊 的質量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而確保清熱散結膠囊的安全性和有效性。
[000引為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下的技術方案：
[0006] 本發(fā)明一種清熱散結膠囊指紋圖譜的建立方法:取清熱散結膠囊內(nèi)容物用甲醇溶 液超聲波提??；W綠原酸為對照品；W千里光浸膏粉及千里光藥材為對照品，照高效液相色 譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。
[0007] 進一步的，上述清熱散結膠囊指紋圖譜的建立方法:取清熱散結膠囊內(nèi)容物，研細 后用75%甲醇溶液超聲波提取，再用0.22WI1~0.45μπι微孔濾頭濾過，取濾液；W綠原酸為對 照品，加75%甲醇溶劑溶解；W千里光浸膏粉為對照品，用75%甲醇溶液超聲波提取，濾過， 取濾液；W千里光藥材為對照藥材，用75 %甲醇溶液于75~85°C水浴加熱回流提取，濾過， 取濾液，照高效液相色譜法建立指紋圖譜，洗脫過程為梯度洗脫。
[000引前述方法中所述高效液相色譜法的色譜條件為:0DS C18色譜柱，流動相A為乙臘， 流動相B為憐酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫25~35°C，檢測波長:Omin-22化m， 15min-280nm，30min-325nm，40min-360nm。
[0009] 超聲處理條件為功率250W，頻率50kHz下，超聲提取20~40分鐘。
[0010] 具體的，前述清熱散結膠囊指紋圖譜的建立方法如下：
[0011] (a)供試品溶液的制備:取清熱散結膠囊內(nèi)容物0.5~5. Og，充分研細后加入75% 甲醇溶液25~250ml，稱定重量，超聲處理20~40分鐘，取出放冷，用75 %甲醇補足減失的重 量，濾過，取濾液作為供試品溶液，
[0012] 所述超聲處理條件為功率250W，頻率50kHz下，超聲提取20~40分鐘；所述濾過為 義用0.22曲1~0.45曲1微孔濾頭濾過；
[0013] (b)對照品溶液的配制：
[0014] 綠原酸對照品溶液的配制:精密稱取綠原酸對照品適量，加75%甲醇制成每1ml含 綠原酸0. 〇5mg的溶液，作為綠原酸對照品溶液；
[0015] 千里光浸膏粉對照品溶液的配制：取浸膏0.2~Ig，加入75%甲醇溶液10~50ml， 稱定重量，超聲處理20~40分鐘，取出放冷，用75%甲醇補足減失的重量，濾過，取濾液作為 千里光浸膏粉對照品溶液；
[0016] 千里光藥材對照品溶液的配制：取千里光藥材0.5~5. Og，精密稱定，置具塞錐形 瓶中，精密加入75%甲醇25~250ml，稱定重量，于75~85°C水浴加熱回流1小時，取出放冷， 用75%甲醇補足減失的重量，濾過，取濾液作為千里光藥材對照品溶液，
[0017] 所述超聲提取條件為功率250W，頻率50kHz下，超聲提取20~40分鐘；所述濾過為 義用0.22曲1~0.45曲1微孔濾頭濾過；
[0018] (C)色譜條件為:0DS C18色譜柱，流動相A為乙臘，流動相B為憐酸水溶液，梯度洗 脫，流速 l.Oml/min，柱溫 25 ~35°C，檢測波長：0min-220nm，15min-280nm，30min-325nm， 40min-360nm；
[0019] (d)測定:精密吸取供試品溶液、對照品溶液化1，分別注入液相色譜儀，照高效液 相色譜法測定，得到清熱散結膠囊的指紋圖譜。
[0020] 進一步地，前述清熱散結膠囊指紋圖譜的方法優(yōu)選方案如下：
[0021] (a)供試品溶液的制備:取清熱散結膠囊內(nèi)容物Ig，充分研細后加入75%甲醇溶液 50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷，用75%甲醇補足減失的重量，濾過，取濾液作 為供試品溶液，超聲提取條件為功率250W，頻率50曲Z下，超聲提取30分鐘，
[0022] 所述超聲處理條件為功率250W，頻率50kHz下，超聲提取20~40分鐘；所述濾過為 義用0.22曲1~0.45曲1微孔濾頭濾過；
[0023] (b)對照品溶液的配制：
[0024] 綠原酸對照品溶液的配制:精密稱取綠原酸對照品2.5mg，加75%甲醇50ml充分溶 解，作為綠原酸對照品溶液；
[0025] 千里光浸膏粉對照品溶液的配制：取浸膏0.4g，加入75%甲醇溶液20ml，稱定重 量，超聲處理30分鐘，取出放冷，用75%甲醇補足減失的重量，濾過，取濾液作為千里光浸膏 粉對照品溶液，超聲提取條件為功率250W，頻率50曲Z下，超聲提取30分鐘；
[0026] 千里光藥材對照品溶液的配制：取千里光藥材Ig，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精 密加入75%甲醇50ml，稱定重量，于75~85°C水浴加熱回流1小時，取出放冷，用75%甲醇補 足減失的重量，濾過，取濾液作為千里光藥材對照品溶液，
[0027] 所述超聲處理條件為功率250W，頻率50kHz下，超聲提取20~40分鐘；所述濾過為 義用0.22曲1~0.45曲1微孔濾頭濾過；
[0028] (C)色譜條件為:0DS C18色譜柱，流動相A為乙臘，流動相B為0.05%憐酸水溶液， 梯度洗脫，流速 l.Oml/min，柱溫 30°C，檢測波長：0min-220nm，15min-280nm，30min-325nm， 40min-360nm；
[0029] (d)測定:精密吸取供試品溶液、對照品溶液化1，分別注入液相色譜儀，照高效液 相色譜法測定，得到清熱散結膠囊的指紋圖譜。
[0030] 前述方法中千里光浸膏粉的制備方法：
[0031 ]取千里光90g，加水煎煮2次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.18-1.19(25°C)的稠膏，加入相當于稠膏1倍量的乙醇，靜置12小時使沉淀，濾過，濾液回收乙 醇，濃縮至相對密度為1.30(80°C)的稠膏，真空干燥，粉碎成細粉，即得浸膏粉。
[0032] 前述方法中所述梯度洗脫的程序W如下體積比濃度配置進行：
[0033]
[0034]
[003引用前述方法建立的指紋圖譜中有12特征峰，其中峰7為綠原酸，圖譜總長度為 60min。
[0036]上述指紋圖譜中所述12個特征共有峰的平均保留時間(min)如下： 「00371

[0038] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果如下：
[0039] (1)用本發(fā)明所提供的方法建立的清熱散結膠囊HP1X指紋圖譜與對照圖譜的相似 度均大于0.9，能有效的表征其質量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質量。
[0040] (2)指紋圖譜注重各特征峰的關聯(lián)性和指紋圖譜的整體面貌特征，避免了清熱散 結膠囊質量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質量達標的可能性。
[0041] (3)本發(fā)明基于指紋圖譜用特征指標成分控制產(chǎn)品質量，保證了產(chǎn)品質量的長期 穩(wěn)定性，療效的安全性和可靠性。
[0042] (4)本發(fā)明具有方便、快捷、穩(wěn)定、精密度高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點，可準確可靠的控制 清熱散結膠囊的質量。
【附圖說明】
[0043] 圖1清熱散結膠囊指紋圖譜。
[0044] 圖2 8批次清熱散結膠囊的指紋圖譜。
[004引圖3綠原酸特征圖譜對照圖譜。
[0046] 圖4千里光浸膏粉特征圖譜對照圖譜。
[0047] 圖5千里光藥材特征圖譜對照圖譜。
【具體實施方式】
[0048] 除非另有定義，本發(fā)明使用的所有技術和科學術語的含義與本發(fā)明所屬技術領域 普通技術人員通常理解的含義相同。通常，本發(fā)明使用的命名及下述實驗方法都是本領域 公知的或常用的。為了使本發(fā)明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，W 下結合具體實施例，對本發(fā)明作進一步的說明。
[0049] 儀器:Waters高效液相色譜儀(Waters2695分離單元，Waters2996二極管陣列檢測 器，Empower色譜工作站）；AB104-N萬分之一天平(梅特勒-托利多）；AUW2200十萬分之一天 平（SHIMADZU島津）；KQ3200超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；Mi 1 i-Q超純水儀： (美國Milipore公司）。
[0050] 試藥和試劑:清熱散結膠囊由江西普正制藥有限公司提供(批號：121101、121102、 121103、121104、121201、121202、130702、130703);千里光藥材、甲醇(分析純）、乙臘(色譜 純）、憐酸(分析純)均購于市售。
[0051 ]實施例1:清熱散結膠囊基于指紋