一種右歸丸中多種成分含量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種右歸丸中多種成分含量的檢測(cè)方法，屬于成分檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 右歸丸出自《景岳全書》，其組成和制備方法為"大懷熟地八兩，山藥(炒）四兩，山 榮英(微炒)Ξ兩，構(gòu)杞(微炒）四兩，鹿角膠(炒珠）四兩，寃絲子(制）四兩，杜仲(姜湯炒）四 兩，當(dāng)歸Ξ兩(便漉勿用），肉桂二兩(漸可加至四兩），制附子二兩(漸可加至五六兩）。上先 將熟地蒸爛巧膏，加煉蜜為丸，如梧桐子大"。右歸丸被后世廣泛應(yīng)用臨床治療腎陽(yáng)虛的病 證，并具有確切療效。
[0003] 目前對(duì)右歸丸化學(xué)成分報(bào)道較少，杜麗霞等(杜麗霞，何文智，劉曉陽(yáng)，王智民，任 艷玲.左_右歸丸及其拆方中馬錢巧的變化規(guī)律.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014,20(21) :56-59)采用HPLC法測(cè)定了右歸丸中馬錢巧的含量，為右歸丸的質(zhì)量控制提供了標(biāo)準(zhǔn);劉加寶 巧IJ加寶.HPLC法測(cè)定右歸丸中桂皮醒的含量.黑龍江科學(xué)，2014，5 (8): 15-16)通過HPLC法 建立了快速測(cè)定右歸丸中桂皮醒含量的方法;王麗雙（王麗雙.中藥復(fù)方左歸丸、右歸丸和 濟(jì)生腎氣丸的鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)研究：[碩±學(xué)位論文]，山東大學(xué)，2011年)建立了紅外指紋 圖譜、HP1X指紋圖譜鑒定方法，對(duì)右歸丸的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。但W上研究?jī)H選取了右歸丸中一 個(gè)活性成分測(cè)定或僅進(jìn)行定性分析，覆蓋范圍相對(duì)局限，右歸丸中其他化學(xué)成分尚不清楚， 應(yīng)用于右歸丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)難免相對(duì)片面。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種右歸丸中多種成分含量的檢測(cè)方法。
[0005] 本發(fā)明所提供的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0006] 1)利用甲醇超聲提取右歸丸，然后進(jìn)行濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試 品溶液；
[0007] 2)向所述供試品溶液中加入內(nèi)標(biāo)溶液，作為待測(cè)樣品；
[000引3)采用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)所述待測(cè)樣品，即得到右歸丸中下述 任一種成分的含量：
[0009] a)新烏頭原堿、b)山榮英新巧、C)地黃巧A、d)附子靈、e)宋果靈、f)金絲桃巧、g)苯 甲酯次烏頭原堿、h)松果菊巧、i)苯甲酯烏頭原堿、j)地黃巧D、k)苯甲酯中烏頭原堿、1)尼 奧靈、m)馬錢巧、η)多根烏頭堿、0)猜芽菜巧和P)莫諾巧。
[0010] 上述的檢測(cè)方法中，步驟1)中，過濾時(shí)得到的前幾滴濾液作為初濾液，常棄去，取 0.1~0.2mL即可，后續(xù)所得濾液為續(xù)濾液，用于測(cè)定。
[0011] 上述的檢測(cè)方法中，步驟1)中，所述甲醇的用量可為:0.1g所述右歸丸需要添加1 ~5mL甲醇。
[0012] 上述的檢測(cè)方法中，步驟1)中，所述超聲提取的頻率可為20~80KHZ，具體可為 45Ifflz，所述超聲提取的時(shí)間可為30~60min，具體可為30min;
[001引所述濾膜可為尼龍66膜，所述濾膜的孔徑可為ο. 22μπι或ο. 45皿。
[0014] 上述的檢測(cè)方法中，步驟2)中，
[0015] 所述內(nèi)標(biāo)溶液為下螺環(huán)酬的甲醇水溶液；
[0016] 所述下螺環(huán)酬的用量為：1~5ng/mL所述待測(cè)樣品。
[0017] 上述的檢測(cè)方法中，步驟3)中，所述高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法中的 色譜條件如下：
[001引流動(dòng)相A:體積分?jǐn)?shù)為0.05%~0.2%的甲酸的乙臘溶液，具體可為0.1 % ;
[0019] 流動(dòng)相B:體積分?jǐn)?shù)為0.05%~0.2%的甲酸的水溶液，具體可為0.1 % ;
[0020] 色譜柱:AgilentEclipsePlus-C18色譜柱，柱長(zhǎng)為100mm、柱徑為2.1mm和填料粒 徑為3.如m;
[0021] 柱溫:20~30°C，具體可為25°C;
[0022] 流速:〇.45mL/min;
[0023] 進(jìn)樣體積：10或20μ1^;
[0024] 每個(gè)樣品的運(yùn)行時(shí)間：12.Omin;
[002引洗脫梯度如下：
[00%] 0-1.5min:流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)為98%，流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)為2% ;
[0027] 1.5-4min:流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)從98%降至55%，流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)從2%升至45% ;
[0028] 4-8min:流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)從55%降至15%，流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)從45%升至85% ;
[0029] 8-9min:流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)為15%，流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)為85% ;
[0030] 9-9.Olmin:流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)從15%升至98%，流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)從85%降至2% ; [0031 ] 9-12min:流動(dòng)相A體積分?jǐn)?shù)為98%，流動(dòng)相B體積分?jǐn)?shù)為2%。
[0032] 所述高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)步驟中的質(zhì)譜條件如下：
[0033] 離子源:電噴霧離子化源；
[0034] 質(zhì)譜工作模式:正離子掃描的MRM檢測(cè)模式；
[0035] 氣簾氣、霧化氣和滿流加熱氣均使用氮?dú)猓湓O(shè)定值分別為20~30psi、50~60psi 和50~60psi，具體可為20psi、55psi和55psi ;
[0036] 離子源溫度為350~500°C，具體可為500°C;
[0037] 離子源噴射電壓為4500~5500V，具體可為5500V。
[0038] 所述右歸丸中的16種化合物按編號(hào)1-編號(hào)16依次為新烏頭原堿、山榮英新巧、地 黃巧A、附子靈、宋果靈、金絲桃巧、苯甲酯次烏頭原堿、松果菊巧、苯甲酯烏頭原堿、地黃巧 D、苯甲酯中烏頭原堿、尼奧靈、馬錢巧、多根烏頭堿、猜芽菜巧和莫諾巧，此16種化合物均具 有很強(qiáng)的正離子信號(hào)。
[0039] 其中，編號(hào)為1的新烏頭原堿的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為486.2;產(chǎn)品離 子定量值(m/z)為436.2;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為454.2448，404.2079;去簇電壓為250V;碰 撞電壓為44eV;碰撞室射出電壓為25V。
[0040] 編號(hào)為2的山榮英新巧的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為565.1;產(chǎn)品離子定量 值(m/z)為163.3;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為403.1011,255.0845;去簇電壓為250V;碰撞電壓 為39eV;碰撞室射出電壓為12V。
[0041] 編號(hào)為3的地黃巧A的質(zhì)譜工作參數(shù)如下：母離子(m/z)為547.1;產(chǎn)品離子定量值 (m/z)為203.1;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為385.1115,203.0532;去簇電壓為151V;碰撞電壓為 44eV;碰撞室射出電壓為15V。
[0042] 編號(hào)為4的附子靈的質(zhì)譜工作參數(shù)如下：母離子(m/z)為454.1;產(chǎn)品離子定量值 (m/z)為436.2;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為436.2707，418.2600;去簇電壓為89V;碰撞電壓為 41eV;碰撞室射出電壓為25V。
[0043] 編號(hào)為5的宋果靈的質(zhì)譜工作參數(shù)如下：母離子(m/z)為358.2;產(chǎn)品離子定量值 (m/z)為340.2;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為340.2280;去簇電壓為98V;碰撞電壓為35eV;碰撞 室射出電壓為20V。
[0044] 編號(hào)為6的金絲桃巧的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為487.1;產(chǎn)品離子定量值 (m/z)為185.1;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為325.0329,185.0425;去簇電壓為100V;碰撞電壓為 33eV;碰撞室射出電壓為10V。
[0045] 編號(hào)為7的苯甲酯次烏頭原堿的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為574.2;產(chǎn)品離 子定量值(m/z)為542.2;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為542.2766，510.2499;去簇電壓為150V;碰 撞電壓為41 eV;碰撞室射出電壓為15V。
[0046] 編號(hào)為8的松果菊巧的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為809.2;產(chǎn)品離子定量值 (m/z)為663.2;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為663.1917,501.1384;去簇電壓為50V;碰撞電壓為 62eV;碰撞室射出電壓為15V。
[0047] 編號(hào)為9的苯甲酯烏頭原堿的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為604.3;產(chǎn)品離子 定量值(m/z)為572.3;產(chǎn)品離子定性值(m/z)為572.2868，554.2764;去簇電壓為150V;碰撞 電壓為49eV;碰撞室射出電壓為15V。
[004引編號(hào)為10的地黃巧D的質(zhì)譜工作參數(shù)如下:母離子(m/z)為709.2;產(chǎn)品離子定量值 (m/z)為3