一種信號(hào)放大方法及相關(guān)裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及一種用于檢測祀物質(zhì)的信號(hào)放大方法及相關(guān)裝置。
【背景技術(shù)】
[0002] 簡單、靈敏、有效的檢測技術(shù)在疾病診斷、新藥開發(fā)、生化防御等領(lǐng)域意義重大。中 國專利CN 01822390.7公開了一種檢測分析物的測試條測試法，該方法是首先對(duì)檢測抗體 (祀向試劑)進(jìn)行生物素(配體)化修飾，示蹤顆粒標(biāo)記了抗生物素抗體(標(biāo)記物），運(yùn)樣在檢 測過程中會(huì)形成"樹枝狀"結(jié)構(gòu)，使檢測信號(hào)得W放大?；谶\(yùn)一原理制備的乙肝表面抗原 檢測試紙條較Abbott公司的乙肝表面抗原檢測試紙條更為靈敏。中國專利CN200880132189 公開了一種免疫層析測試中信號(hào)放大的方法W及使用該方法的免疫層析試劑盒，該方法采 用兩種不同粒徑的偶聯(lián)物超靈敏檢測祀物質(zhì)的信號(hào)方法，也是采用了樹枝狀信號(hào)放大技 術(shù)。
[0003] 現(xiàn)有的檢測祀物質(zhì)(或分析物)的信號(hào)放大方法只能針對(duì)一種祀物質(zhì)進(jìn)行分析，但 在檢測領(lǐng)域，往往需要對(duì)樣品中的多種祀物質(zhì)進(jìn)行超靈敏檢測，方可作出準(zhǔn)確可靠的判斷， 現(xiàn)有的檢測方法往往是每個(gè)項(xiàng)目單獨(dú)檢測，然后綜合各個(gè)檢測結(jié)果，得出檢測結(jié)論，且需要 準(zhǔn)備多種試紙條并采用多份樣品進(jìn)行測試?，F(xiàn)有的聯(lián)檢方法都是在各個(gè)單檢體系中尋找一 個(gè)折衷的體系建立起來的，運(yùn)個(gè)折衷的體系往往是W犧牲檢測靈敏性為代價(jià)的，所W目前 已有的聯(lián)合同時(shí)檢測方法的靈敏性往往不夠理想，無法滿足現(xiàn)實(shí)需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于檢測祀物質(zhì)的信號(hào)放大方法及相關(guān) 裝置，該信號(hào)放大方法不但能夠高靈敏檢測祀物質(zhì)，而且實(shí)現(xiàn)了多種祀物質(zhì)的同時(shí)檢測。 [000引本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題通過W下技術(shù)方案予W實(shí)現(xiàn)： 一種檢測祀物質(zhì)的信號(hào)放大方法，包括： 將具有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子的偶聯(lián)體與多種祀物質(zhì)結(jié)合，偶聯(lián)體 還包括連接體、和與多種第一分子和連接體結(jié)合的第一顆粒； 橋接體與偶聯(lián)體的連接體結(jié)合，橋接體包括能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體的第二分 子； 通過能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子分別捕獲與橋接體結(jié)合后的偶聯(lián)體上 的多種祀物質(zhì)。
[0006] -種檢測祀物質(zhì)的信號(hào)放大方法，包括： 將具有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子的偶聯(lián)體與多種祀物質(zhì)結(jié)合，偶聯(lián)體 還包括與多種第一分子結(jié)合的第一顆粒； 橋接體與偶聯(lián)體的第一分子結(jié)合，所述橋接體包括能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的多種第一分 子的第二分子； 通過能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子分別捕獲與橋接體結(jié)合后的偶聯(lián)體上 的多種祀物質(zhì)。
[0007] 優(yōu)選地，所述祀物質(zhì)為蛋白質(zhì)分子、蛋白質(zhì)分子復(fù)合物、核酸、核酸復(fù)合物中的任 意一種。
[0008] -種檢測祀物質(zhì)的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第一結(jié) 合墊、層析膜、吸水墊;所述第一結(jié)合墊包被有偶聯(lián)體和橋接體，其中該偶聯(lián)體包括能特異 性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子、連接體及與多種第一分子和連接體結(jié)合的第一顆粒， 橋接體包括能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體的第二分子;所述層析膜上不同區(qū)域的檢測線固 定有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子。
[0009] -種檢測祀物質(zhì)的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第一結(jié) 合墊、層析膜、吸水墊;所述第一結(jié)合墊包被有偶聯(lián)體和橋接體，其中該偶聯(lián)體包括能特異 性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子、和與多種第一分子結(jié)合的第一顆粒，橋接體包括能特 異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體的第二分子;所述層析膜上不同區(qū)域的檢測線固定有能特異性結(jié) 合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子。
[0010] -種檢測祀物質(zhì)的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第二結(jié) 合墊、第Ξ結(jié)合墊、層析膜、吸水墊;所述第Ξ結(jié)合墊包被有偶聯(lián)體，該偶聯(lián)體包括能特異性 結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子、連接體及與多種第一分子和連接體結(jié)合的第一顆粒，所 述第二結(jié)合墊包被有具有能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體的第二分子的橋接體;所述層析膜 上不同區(qū)域的檢測線固定有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子。
[0011] -種檢測祀物質(zhì)的免疫層析試紙，包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第二結(jié) 合墊、第Ξ結(jié)合墊、層析膜、吸水墊;所述第Ξ結(jié)合墊包被有偶聯(lián)體，該偶聯(lián)體包括能特異性 結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子、和與多種第一分子結(jié)合的第一顆粒;所述第二結(jié)合墊包 被有具有能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的多種第一分子的第二分子的橋接體;所述層析膜上不同區(qū) 域的檢測線固定有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子。
[0012] 優(yōu)選地，所述第二結(jié)合墊與第Ξ結(jié)合墊調(diào)換位置順序。
[0013] -種檢測祀物質(zhì)的免疫層析裝置，包括反應(yīng)微孔和免疫層析試紙，該免疫層析試 紙包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第四結(jié)合墊、層析膜、吸水墊;所述反應(yīng)微孔含有 偶聯(lián)體，該偶聯(lián)體包括能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子、連接體及與多種第一分 子和連接體結(jié)合的第一顆粒;所述第四結(jié)合墊包被有具有能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體的 第二分子的橋接體，所述層析膜上不同區(qū)域的檢測線固定有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多 種第Ξ分子。
[0014] -種檢測祀物質(zhì)的免疫層析裝置，包括反應(yīng)微孔和免疫層析試紙，該免疫層析試 紙包括依次搭接粘貼在底板上的樣品墊、第四結(jié)合墊、層析膜、吸水墊;所述反應(yīng)微孔含有 偶聯(lián)體，該偶聯(lián)體包括能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子、和與多種第一分子結(jié)合 的第一顆粒;所述第四結(jié)合墊包被有具有能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的多種第一分子的第二分子 的橋接體，所述層析膜上不同區(qū)域的檢測線固定有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分 子。
[0015] -種祀物質(zhì)的免疫滲濾裝置，由滲濾卡、封閉液、偶聯(lián)體、橋接體、洗涂液組成，其 中滲濾卡由卡底、吸水墊料、滲濾膜、卡蓋依次疊加組成，該免疫滲濾裝置的檢測方法包括 W下步驟： 1) 往滲濾膜上滴加一滴封閉液； 2) 液體濾過之后，滴加一滴血清樣本； 3) 血清濾完之后，滴加一滴洗涂液； 4) 濾完之后滴加一滴權(quán)利要求1或2所述的偶聯(lián)體、一滴權(quán)利要求1或2所述的橋接體； 5) 等液體濾完之后，滴加一滴洗涂液； 6) 濾完之后，觀察結(jié)果； 其中，滲濾膜上不同區(qū)域的檢測點(diǎn)固定有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ分子。
[0016] 本發(fā)明具有如下有益效果： 本發(fā)明的信號(hào)放大方法將具有能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第一分子與樣品中不 同祀物質(zhì)結(jié)合后與橋接體結(jié)合，隨后由位于固相上的能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的多種第Ξ 分子捕獲固定，從而得到信號(hào)放大效果，不但能夠高靈敏檢測祀物質(zhì)，而且實(shí)現(xiàn)了多種祀物 質(zhì)的同時(shí)檢測。同樣，也使用該信號(hào)放大方法制造出了高靈敏度且同時(shí)檢測多種祀物質(zhì)的 免疫層析試紙條或免疫層析裝置，其層析膜上不同區(qū)域上設(shè)有多個(gè)檢測線，各個(gè)檢測線的 夾屯、反應(yīng)不會(huì)相互影響，達(dá)到了一份液體樣品同時(shí)檢測多種祀物質(zhì)，且在同樣條件下進(jìn)行， 既節(jié)約了檢測時(shí)間，也減小了檢測誤差，同時(shí)降低了檢測成本。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發(fā)明同時(shí)檢測兩種祀物質(zhì)的信號(hào)放大的原理示意圖； 圖2為本發(fā)明一種使用該信號(hào)放大方法同時(shí)檢測多種祀物質(zhì)的免疫層析試紙的結(jié)構(gòu)示 意圖； 圖3為本發(fā)明另一種使用該信號(hào)放大方法同時(shí)檢測多種祀物質(zhì)的免疫層析試紙的結(jié)構(gòu) 示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明，實(shí)施例僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施 方式，不是對(duì)本發(fā)明的限定。
[0019] 本發(fā)明所提及的術(shù)語"連接體"表示通過特異性反應(yīng)(如:抗原-抗體反應(yīng)、核酸雜 交反應(yīng))與第Ξ分子特異性結(jié)合使得偶聯(lián)體與橋接體結(jié)合的材料;術(shù)語"橋接體"表示通過 特異性反應(yīng)(如:抗原-抗體反應(yīng)、核酸雜交反應(yīng))與偶聯(lián)體上的連接體或第一分子進(jìn)行特異 性結(jié)合將偶聯(lián)體橋接在一起形成樹枝狀結(jié)構(gòu)的材料。
[0020] 本發(fā)明的信號(hào)放大方法中，偶聯(lián)體包括多種第一分子、連接體及與多種第一分子 和連接體結(jié)合的第一顆粒，多種第一分子能分別特異性結(jié)合不同的祀物質(zhì);橋接體包括能 特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體的第二分子;在檢測時(shí)，偶聯(lián)體上多種第一分子與樣品中的不 同祀物質(zhì)結(jié)合，隨后橋接體的第二分子與偶聯(lián)體的連接體結(jié)合將偶聯(lián)體橋接在一起形成多 個(gè)樹枝狀結(jié)構(gòu)，該樹枝狀結(jié)構(gòu)上含有多種不同的祀物質(zhì)，位于固相上的能特異性結(jié)合不同 祀物質(zhì)的多種第Ξ分子捕獲該樹枝狀結(jié)構(gòu)上的多種祀物質(zhì)(偶聯(lián)體的第一分子與位于固相 上的第Ξ分子分別結(jié)合同一祀物質(zhì)上的不同位點(diǎn)），進(jìn)而達(dá)到放大信號(hào)的目的。當(dāng)橋接體的 第二分子可與偶聯(lián)體的第一分子結(jié)合，則偶聯(lián)體上可不含有連接體。
[0021] 所述祀物質(zhì)可W為蛋白質(zhì)分子、蛋白質(zhì)分子復(fù)合物、核酸、核酸復(fù)合物中的任意一 種，還可w是其他能夠發(fā)生特異性結(jié)合的分子。
[0022] 多種第一分子包括至少兩種能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的單克隆抗體或多克隆抗 體，但不局限于抗體。多種第Ξ分子包括至少兩種能特異性結(jié)合不同祀物質(zhì)的單克隆抗體 或多克隆抗體，但不局限于抗體。所述第一分子和第Ξ分子可W相同或不同。
[0023] 連接體可W是蛋白質(zhì)、核酸、多糖、膚等可W與橋接體發(fā)生特異性結(jié)合的材料。
[0024] 橋接體可W是能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體或第一分子的第二分子，還可W是偶 聯(lián)有能特異性結(jié)合偶聯(lián)體的連接體或第