測(cè)定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚殘留量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種基于氣相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和 芝麻酚殘留量的方法，屬于食品添加劑理化指標(biāo)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 咪唑（分子結(jié)構(gòu)式如下所示），即1，3-二氮唑，是一個(gè)五元雜環(huán)芳香性有機(jī)化合物， 化學(xué)式為C3H 4N2，分子量為68.08，CAS號(hào)為288-32-4，它也是一個(gè)生物堿，呈白色或淺黃色固 體結(jié)晶，易溶于水、乙醇、乙醚、氯仿、啦啶，微溶于苯，極微溶于石油醚，具有酸性，也具有堿 性。咪唑?yàn)槠矫嫖逶h(huán)狀化合物，它的兩個(gè)氮原子間存在永久偶極，極性很強(qiáng)，偶極矩為 3.61D，并且分子間存在氫鍵締合，導(dǎo)致了咪唑具有反常高的沸點(diǎn)（256°C)。分子中存在一個(gè) 6電子共輒大π鍵，故具有典型的芳香性。與氫以 〇鍵相連的氮原子提供一對(duì)電子，環(huán)內(nèi)其余 四個(gè)原子各提供一個(gè)電子成鍵。毒理學(xué)數(shù)據(jù)表明該物質(zhì)有毒，對(duì)小鼠經(jīng)口 LD50為18.80mg/ kg，注射LD50為610mg/kg，其毒性及防護(hù)方法與乙二胺相似。此外，該物質(zhì)對(duì)環(huán)境可能有危 害，對(duì)水體應(yīng)給予特別注意。綜合文獻(xiàn)結(jié)果，一般說(shuō)來(lái)，咪唑并不直接當(dāng)作食品添加劑使用， 很大可能是作為副產(chǎn)物而被引入使用。
[0003]
[0004] -τ不廝甘〈刀、子結(jié)構(gòu)式如下所示），又稱2,4,6-三硝基-3,3-二甲基-5-叔丁基 苯，由間二甲苯用異丁烯烷基化后再硝化反應(yīng)而得，它是單一的化合物，不同于麝香屬于天 然的多組分混合物。化學(xué)式為&2Η 15Ν306，分子量為297.27，CAS號(hào)為81-15-2，呈現(xiàn)淺黃色粉 狀或針狀結(jié)晶，具較粗麝香香氣，熔點(diǎn)為112.5-114.5°C，沸點(diǎn)為200-202°C，在95%乙醇中 的溶解度為7g/L(25°C)，易溶于苯甲酸芐酯和鄰苯二甲酸二乙酯，不溶于水、甘油和丙二 醇，有干甜的麝香樣動(dòng)物香氣，氣勢(shì)較弱但留香長(zhǎng)。二甲苯麝香作為高持久性、高生物蓄積 性物質(zhì)，已被歐盟化學(xué)品管理署(ECHA)列為高關(guān)注度物質(zhì)（Substances of Very High 0)11(^?1，3￥!1〇。歐盟"保健和環(huán)境科學(xué)委員會(huì)"致癌、致突變或致生殖毒性(011〇專家工作 組在第29次會(huì)議上將二甲苯麝香列為第3類物質(zhì)。國(guó)際日化香料協(xié)會(huì)（IFRA)計(jì)劃在IFRA標(biāo) 準(zhǔn)第44次修訂稿中建議二甲苯麝香不作為日化香料成分使用。國(guó)際日化香料研究所(RIFM) 也建議二甲苯麝香不得用于唇用產(chǎn)品或口腔衛(wèi)生用品。我國(guó)化妝品衛(wèi)生規(guī)范及歐盟化妝品 規(guī)程(Council Direc2tive 76/768/EEC)中規(guī)定二甲苯麝香為化妝品組分中限用物質(zhì)（不 得用于口腔衛(wèi)生用品），在香精、花露水和其它產(chǎn)品中的限量分別為1.〇%、〇.4%和0.03%。
[0005]
[0006] 芝麻酚(分子結(jié)構(gòu)式如下所示），又稱3，4-亞甲二氧基苯酚，化學(xué)式為C7H 6〇3，分子 量為138.12,043號(hào)為533-31-3，熔點(diǎn)為62-65°(3，沸點(diǎn)為113-116°(3，略溶于水，呈現(xiàn)白色至 淺黃色結(jié)晶性粉末或顆粒，易溶于乙醇、乙醚，芝麻酚的合成技術(shù)主要有三條:其一是從芝 麻油中提取，其二是從胡椒胺出發(fā)進(jìn)行全合成，其三是從洋茉莉醛出發(fā)的半合成路線。芝麻 酚的致腫瘤數(shù)據(jù)表明：大鼠經(jīng)口TDLo為874mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標(biāo)準(zhǔn)，胃腸道-月中 瘤；小鼠經(jīng)口 TDLo為1092mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標(biāo)準(zhǔn)，胃腸道-腫瘤；大鼠經(jīng)口 TD為 1092mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標(biāo)準(zhǔn)，胃腸道-腫瘤；小鼠經(jīng)口 TD為1612mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標(biāo)準(zhǔn)，胃腸道-腫瘤。2006年，日本厚生勞動(dòng)省宣布禁用的42種食品添加劑中就 包括芝麻酚。
[0007]
[0008] 工業(yè)生產(chǎn)中不可或缺的化合物質(zhì)，其安全性是食品總體 安全性非常重要的一個(gè)方面，而食品安全性控制的源頭，根本在于生產(chǎn)原料，為此，必須對(duì) 食用香精中關(guān)注的化合物質(zhì)進(jìn)行監(jiān)控。文獻(xiàn)調(diào)研表明，現(xiàn)行檢測(cè)咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚 的方法主要有氣相色譜和液相色譜。鑒于咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚在食用香精中有可能 被用到，因此探索一種快速、準(zhǔn)確的同時(shí)檢測(cè)咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的方法，對(duì)食用香 精中該系列物質(zhì)的殘留量進(jìn)行有效控制，進(jìn)而保障食用添加劑的使用安全性，就顯得非常 迫切和十分必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有的技術(shù)缺陷，提供一種采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定食用 香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚殘留量的方法，該方法能準(zhǔn)確量化分析食用香精中痕量 咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的殘留量，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，基質(zhì)干擾少。
[0010] 具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0011] -種測(cè)定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚殘留量的方法，其特征在于，所述 方法包括以下步驟：
[0012] ⑴內(nèi)標(biāo)溶液的制備：以丙酸苯乙酯為內(nèi)標(biāo)物，使用乙醇為溶劑，制備內(nèi)標(biāo)溶液；
[0013] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：以咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的標(biāo)準(zhǔn)品為目標(biāo)物，使用 乙醇為溶劑，經(jīng)逐級(jí)稀釋制備成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，然后分別加入一定量的內(nèi)標(biāo)溶液，制備成標(biāo) 準(zhǔn)工作溶液；
[0014] (3)樣品溶液的制備:稱取一定量的食用香精樣品于離心管中，加入一定量的水， 再準(zhǔn)確移入一定體積的內(nèi)標(biāo)溶液，用漩渦混合器分散均勻;接著再加入一定體積的乙醇，超 聲萃取，加入一定量的無(wú)水硫酸鈉，搖勻后靜置，之后于離心機(jī)內(nèi)離心，取上層清液過(guò)有機(jī) 相濾膜，得樣品溶液；
[0015] (4)氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析：用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品 溶液進(jìn)行檢測(cè)分析；
[0016] (5)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制及樣品結(jié)果的計(jì)算。
[0017]其中，步驟(1)內(nèi)標(biāo)溶液的制備包括：
[0018] (la)內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：稱取0.2g丙酸苯乙酯，精確至O.OOOlg，用乙醇溶解并定容至 lOOmL容量瓶中，搖勻；
[0019] (lb)內(nèi)標(biāo)溶液:準(zhǔn)確移取0 · lmL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙醇定容至1 OOmL容量瓶中，搖勾。
[0020] 另外，步驟(2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備包括：
[0021] (2a)-級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚各O.lg，精確至 〇.〇〇〇lg，用乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻；
[0022] (2b)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確移取lmL-級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于100mL的容量瓶中，用乙醇 稀釋并定容至刻度；
[0023] (2c)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別準(zhǔn)確移取二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液20yL、50yL、100yL、200yL、500y L和1000yL至10mL的容量瓶中，再分別準(zhǔn)確加入100yL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙醇稀釋并定容至刻度， 得系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0024] 進(jìn)一步，步驟(3)樣品溶液的制備包括:稱取0.5g樣品，精確到0.0001 g，置于50mL 離心管中，加入lmL水，準(zhǔn)確移入100yL內(nèi)標(biāo)溶液，用漩渦混合器分散均勾，再加入8mL乙醇， 置于超聲波發(fā)生器內(nèi)超聲萃取20min，加入0.5g無(wú)水硫酸鈉，搖勾后靜置5min，之后于離心 機(jī)內(nèi)在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min，取上層清液過(guò)0.45μηι有機(jī)相濾膜，得到樣品進(jìn)樣溶液。 [0025] 優(yōu)選地，步驟（4)GC-MS/MS分析的儀器分析條件為：采用規(guī)格為30m X 0.25mm X 0.25μπι的HP-INN0WAX毛細(xì)管色譜柱;載氣為氦氣，恒流速度為1. OmL/min;進(jìn)樣方式:進(jìn)樣量 為lyL，脈沖不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣脈沖壓力為25psi，時(shí)間為lmin;進(jìn)樣口溫度為250°C;傳輸線 溫度為260°C;升溫程序?yàn)槌跏紲囟葹?00°C，以3°C/min的速率升高至240°C，保持5min;質(zhì) 譜分析條件為：電離方式為EI源，正離子模式;離子源溫度:230°C;四極桿溫度:均為150°C; 碰撞氣:氮?dú)猓魉?.5mL/min，載氣氦氣流速為2.25mL/min;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM模式，詳細(xì)參數(shù) 列于下表：
[0026] 目標(biāo)物的MRM參數(shù)情況
[0027]
Ο
[0028] 在以上方法中，步驟(5)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及結(jié)果計(jì)算如下：以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中目標(biāo)物 與內(nèi)標(biāo)的濃度之比為橫坐標(biāo)，以色譜圖中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性 回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，將相同條件下測(cè)得的樣品溶液中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面 積比，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，根據(jù)下列公式求得食用香精樣品中目標(biāo)物的含量：
[0029]
[0030] _