基乙烯亞胺等。需要說明的是，聚陰離子(羧基)或聚陽離子(氨基）的官能團數(shù)優(yōu)選 為25個以上。
[0089](分散劑側(cè)結(jié)合性物質(zhì)）
[0090] 分散劑側(cè)結(jié)合性物質(zhì)根據(jù)需要并根據(jù)靶標物質(zhì)的種類來適當選擇即可。其種類優(yōu) 選考慮向上述分散劑基劑中的導入來選擇。具體物質(zhì)與作為上述顆粒側(cè)結(jié)合性物質(zhì)所列舉 的物質(zhì)含義相同。
[0091] 分散劑基劑與結(jié)合性物質(zhì)的結(jié)合方法沒有特別限定，例如可以舉出使雙方與相互 具有親和性的物質(zhì)(例如，親和素和生物素、谷胱甘肽和谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶)結(jié)合并藉由這些 物質(zhì)間接結(jié)合的方法。在使兩者直接結(jié)合的情況下，可以藉由官能團進行結(jié)合，例如在使用 官能團的情況下，可以根據(jù)Ghosh等的方法(Ghosh et al:Bioconjugate Chem.、l、71_76、 1990)的馬來酰亞胺-硫醇偶聯(lián)來進行結(jié)合。具體而言，可以舉出下述兩種方法。在其第1種 方法中，首先在核酸的5'端導入巰基(別名：硫氫基），另一方面，使6-馬來酰亞胺己酸琥珀 酰亞胺酯(例如，"EMCS(商品名)"（同仁化學研究所公司制造））與抗體反應而導入馬來酰亞 胺基。接著，使這兩種物質(zhì)藉由巰基和馬來酰亞胺基而結(jié)合。在第2種方法中，首先，與第1種 方法同樣地在核酸的5 '端導入巰基，使作為同雙官能性試劑的N，N-1，2-亞苯基二馬來酰亞 胺進一步與該巰基反應，由此向核酸的5'端導入馬來酰亞胺基，另一方面，向抗體上導入巰 基。接著，使這兩種物質(zhì)藉由巰基和馬來酰亞胺基而結(jié)合。
[0092]除此以外，作為將核酸導入至蛋白質(zhì)中的方法，例如已知Nuc 1 e i c Ac i ds Research第15卷5275頁（1987年）和Nucleic Acids Research第16卷3671頁（1988年）中記 載的方法。這些技術(shù)可以應用于核酸與抗體的結(jié)合。
[0093][檢測方法]
[0094]在使用了本發(fā)明的熒光標記顆粒的優(yōu)選檢測方法中，將熒光標記顆粒20、分散劑 30和包含靶標物質(zhì)S的樣本進行混合。接著，在熱響應性聚合物發(fā)生凝聚的條件下，判定熱 響應性聚合物的分散的有無。此時，對樣本照射激發(fā)光，通過其熒光發(fā)光來進行檢測。關(guān)于 此時的熒光標記顆粒20、分散劑30、靶標物質(zhì)S的行為，首先基于圖5來進行說明。
[0095]本實施方式中，有無分散(圖5的（1)、（2))的判定通過激發(fā)光的照射和由此產(chǎn)生的 熒光的檢測來進行。從通過目視或通用的傳感器來檢測熒光的觀點出發(fā)，優(yōu)選上述激發(fā)光 源發(fā)出下述波長區(qū)域的激發(fā)光。作為上述激發(fā)光源，可以舉出汞燈、鹵素燈和氙燈。特別優(yōu) 選使用由激光二極管或發(fā)光二極管照射的激發(fā)光。更優(yōu)選具備用于僅使來自上述激發(fā)光源 的特定波長的光透射的濾光器，進而，從通過目視等僅檢測熒光的觀點出發(fā)，進一步優(yōu)選具 備將上述激發(fā)光除去而僅使熒光透射的濾光器。進而，特別優(yōu)選具備接收熒光的光電倍增 管或CCD檢測器，由此還能夠檢測出無法通過目視確認的強度或波長的熒光。另外，由于能 夠測定其熒光強度，因而還能夠進行靶標物質(zhì)的定量，能夠進行高靈敏度檢測和定量。 [00 96] 上述激發(fā)光的波長優(yōu)選為300nm以上、更優(yōu)選為400nm以上、特別優(yōu)選為500nm以 上。作為上限，優(yōu)選為700nm以下、更優(yōu)選為600nm以下、特別優(yōu)選為550nm以下。通過為該范 圍的激發(fā)光，能夠高效地生成下述范圍的熒光，因而優(yōu)選。
[0097] 上述熒光的波長優(yōu)選為350nm以上、更優(yōu)選為450nm以上、特別優(yōu)選為530nm以上。 作為上限，優(yōu)選為800nm以下、更優(yōu)選為750nm以下、特別優(yōu)選為580nm以下。通過為該范圍， 容易利用目視進行觀察或容易利用通用的檢測器進行檢測，因而優(yōu)選。
[0098]下面，對于可帶來上述優(yōu)異效果的熒光標記顆粒進行更詳細的說明。需要說明的 是，圖示的方式中為了便于理解而將各材料示意性或夸張地示出，本發(fā)明并不由這些圖中 所示的方式來限定解釋。
[0099](靶標物質(zhì)）
[0100] 作為靶標物質(zhì)，可以舉出臨床診斷中利用的物質(zhì)，具體而言，可以舉出體液、尿、咳 痰、糞便等中包含的人免疫球蛋白G、人免疫球蛋白M、人免疫球蛋白A、人免疫球蛋白E、人白 蛋白、人纖維蛋白原(纖維蛋白和它們的分解產(chǎn)物）、α-甲胎蛋白（AFP)、C反應蛋白（CRP)、肌 紅蛋白、癌胚抗原、肝炎病毒抗原、人絨毛膜促性腺激素(hCG)、人胎盤催乳素(HPL)、HIV病 毒抗原、過敏原、細菌毒素、細菌抗原、酶、激素(例如，人促甲狀腺激素(TSH)、胰島素等）、藥 劑等。
[0101] 實施例
[0102] 通過實施例對本發(fā)明進行更詳細的說明，但本發(fā)明并不由此來限定解釋。
[0103] 利用表A所示的材料重現(xiàn)了圖5所示的體系。作為標記顆粒，如表A所示，將磁性顆 粒用二氧化硅顆粒被覆，其平均粒徑為約200nm。使其含有于包含樣本的試驗液中，在約50 °C下加熱15分鐘。之后照射激發(fā)光(550nm)，通過上述標記顆粒的發(fā)光（580nm)狀態(tài)對上述 樣本中包含的靶標物質(zhì)進行檢測。此時，在樣本的存在下，分散劑藉由靶標物質(zhì)結(jié)合于磁性 熒光熱響應性顆粒上，因而維持了分散，結(jié)果，與加熱前相比，熒光強度未發(fā)生變化;與此相 對，在不存在樣本的條件下，磁性熒光熱響應性顆粒通過加熱而凝聚，之后沉降，結(jié)果，與加 熱前相比，確認到熒光強度降低。
[0104] 雖然結(jié)合其實施方式對本發(fā)明進行了說明，但是申請人認為，只要沒有特別指定， 則本發(fā)明不限定于說明的任何細節(jié)，應當在不違反所附權(quán)利要求書所示的發(fā)明精神和范圍 的情況下寬泛地解釋。
[0105] 本申請主張基于2013年10月2日在日本進行專利申請的日本特愿2013-207388的 優(yōu)先權(quán)，將其參照于此并將其內(nèi)容作為本說明書記載內(nèi)容的一部分引入。
[0106] 符號說明
[0107] 1磁性材料相(磁性材料顆粒、核）
[0108] 2透明材料相(熒光二氧化硅相、殼）
[0109] 2a透明材料(連續(xù)相）
[0110] 2b焚光材料(焚光色素，分散相）
[0111] 3熱響應性聚合物(熱響應性聚合物相）
[0112] 4連結(jié)材料
[0113] 5顆粒側(cè)結(jié)合性物質(zhì)
[0114] 6分散劑側(cè)結(jié)合性物質(zhì)
[0115] 7分散劑基劑
[0116] 10熱響應性熒光顆粒
[0117] 11復合顆粒
[0118] 20熒光標記顆粒(焚光熱響應性磁性顆粒）
[0119] 30分散劑
[0120] 100連結(jié)結(jié)構(gòu)物
[0121] S靶標物質(zhì)
[0122] Μ 磁鐵
【主權(quán)項】
1. 一種熒光標記顆粒，其為檢測靶標物質(zhì)的標記顆粒，其在包含具有磁性材料的相和 具有熒光材料的相的復合顆粒的表面具有熱響應性聚合物。2. 如權(quán)利要求1所述的熒光標記顆粒，其中，在所述復合顆粒的表面進一步具有與靶標 物質(zhì)具有結(jié)合性的生物分子。3. 如權(quán)利要求1或2所述的熒光標記顆粒，其中，所述具有熒光材料的相由透明材料所 形成的連續(xù)相和熒光材料所形成的分散相構(gòu)成。4. 如權(quán)利要求1~3中任一項所述的熒光標記顆粒，其中，所述具有磁性材料的相形成 核，所述具有熒光材料的相以被覆該核的形態(tài)配置。5. 如權(quán)利要求1~3中任一項所述的熒光標記顆粒，其中，所述具有磁性材料的相和所 述具有熒光材料的相以海島狀或不定形混雜配置，且至少所述具有熒光材料的相的一部分 露出于表面。6. 如權(quán)利要求1~5中任一項所述的熒光標記顆粒，其中，所述熱響應性聚合物以臨界 溶解溫度(CST)為界使其形態(tài)發(fā)生變化，標記顆粒的凝聚性以所述臨界溶解溫度(CST)為界 發(fā)生變化。7. 如權(quán)利要求6所述的熒光標記顆粒，其中，超過所述臨界溶解溫度(CST)時，標記顆粒 容易凝聚，在所述臨界溶解溫度(CST)以下時，標記顆粒難以凝聚，所述臨界溶解溫度(CST) 為10°C~100°C的范圍。8. 如權(quán)利要求1~7中任一項所述的熒光標記顆粒，其中，所述復合顆粒的平均粒徑小 于 ΙμL?ο9. 如權(quán)利要求3~8中任一項所述的熒光標記顆粒，其中，所述透明材料包含二氧化硅 或聚苯乙烯。10. 如權(quán)利要求1~9中任一項所述的熒光標記顆粒，其中，所述磁性材料為磁鐵礦、氧 化銀、鐵氧體、鉆鐵氧化物、鎖鐵氧體、碳鋼、媽鋼、KS鋼、稀土類鉆磁鐵或赤鐵礦。
【專利摘要】一種熒光標記顆粒，其為檢測靶標物質(zhì)的標記顆粒，其在包含具有磁性材料的相和具有熒光材料的相的復合顆粒的表面具有熱響應性聚合物。
【IPC分類】G01N33/543, G01N21/64, G01N33/553
【公開號】CN105556310
【申請?zhí)枴緾N201480050936
【發(fā)明人】西田昌貴, 大久保典雄, 三好一富, 福島將行
【申請人】古河電氣工業(yè)株式會社
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2014年10月1日
【公告號】WO2015050149A1