丙草胺的免疫膠體金檢測卡及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及谷物食品中農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及丙草胺的免疫膠體金 檢測卡及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 丙草胺是具有高溫選擇性的水稻田專用除草劑。對水稻安全，殺草譜廣。雜草種 子在發(fā)芽過程中吸收藥劑，根部吸收較差。該品為芽前除草劑，主要用于防除禾本科雜草。 產(chǎn)品屬2-氯化乙酰替苯胺類除草劑，是細(xì)胞分裂抑制劑，用于土壤處理可防除稻田稗草、 異型莎草、牛毛氈、鴨舌草、窄葉澤瀉等。具有一定的毒性，因此安全問題受到高度重視。國 標(biāo)中規(guī)定大米中為0.1 mg/kg。因此定期對丙草胺殘留進(jìn)行檢測成為許多國家的監(jiān)控的必 要手段。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)對于丙草胺的檢測主要是氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜法等檢測方 法，但這些技術(shù)的缺陷明顯：設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、難以推廣。所以，建立一種簡單、有效、適 合基層使用的測定方法是極其必要的。本發(fā)明的目的是研制一種更適合企業(yè)進(jìn)行現(xiàn)場檢測 且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對以上情況，本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種丙草 胺的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡便地檢測出丙草胺的問題。
[0005] 本發(fā)明的丙草胺膠體金檢測卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金結(jié) 合墊、包被了丙草胺-BSA和羊抗鼠 IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料 模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結(jié)合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘 附吸水墊。
[0006] 本發(fā)明的丙草胺膠體金檢測卡的制備方法，是由以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 膠體金溶液制備：取1 L三角燒瓶1個，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸 (HAuC14*3H20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況 下加入1%檸檬酸三鈉（Na3C6H 507 · 2H20)溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變 為透明的紫紅色時，維持5 min后停止加熱，補(bǔ)水至原體積，冷卻至室溫，2-8°C保存?zhèn)溆茫?(2) 抗體的預(yù)處理：將要標(biāo)記的丙草胺抗體在1000 r/min, 4°C條件下，離心20 min, 取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL;或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過 0. 22 Mm 濾膜； ⑶膠體金標(biāo)記物的制備：取步驟⑴中的膠體金溶液40 mL，用0. 25 mol/L K2C03調(diào) 節(jié)膠體金溶液pH至8. 5,電磁攪拌器250 r/min攪拌，逐滴加入4 mL含0.3 mg抗體蛋白 的蛋白溶液，反應(yīng)10 min;逐滴加入4 mL 10% BSA，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10 min;金標(biāo)抗體溶液常 溫低速（1500 r/min)離心10 min,棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；紅色上清溶液4°C, 12000 r/min離心20 min,棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標(biāo)抗體稀釋液定容至1 mL,制備 成丙草胺單克隆抗體膠體金標(biāo)記物； (4) 膠體金膜的制備：將步驟（3)丙草胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物用劃 膜儀以5 PL/cm的濃度均勻噴在載體玻璃纖維素膜上，室溫自然晾干或者37°C烘干3 h，制 成含丙草胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金膜； (5) 包被膜制備：將羊抗鼠 IgG抗體、丙草胺蛋白質(zhì)偶聯(lián)物稀釋成1 mg/mL，用劃膜儀依 次以1 PL/cm的濃度噴涂在硝酸纖維素膜上，制備成包被膜，37°C包被2 h后，室溫自然晾 干或者37 °C烘干； (6) 樣品墊前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60% 的條件下，室溫自然晾干； (7) 檢測卡的組裝：PVC膠板自上而下依次粘貼樣品墊、膠體金膜、包被膜和吸水棉，組 裝成試紙條，切割成一定寬度的長條，再將試紙條安裝在長條扁平殼狀的檢測卡外殼中。
[0007] 所述步驟（5)中所包被的檢測線T設(shè)在質(zhì)控線C的下方； 所述步驟（6)中的樣品墊處理液是由1 g小牛血清蛋白（BSA)和0. 8 g氯化鈉（NaCl), 用含有 0· 5%TRIT0N-100 的 0· 01 mol/L PBS 定容至 100 mL ; 本發(fā)明可有效用于測定丙草胺，方法簡單，方便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確。
【附圖說明】
[0008] 圖1為本發(fā)明丙草胺的免疫膠體金檢測卡的結(jié)構(gòu)圖：圖中1.加樣孔 2.檢測線 3.質(zhì)控線4.檢測孔5.試紙條6.檢測卡外殼。
[0009] 圖2為本發(fā)明丙草胺的免疫膠體金檢測卡內(nèi)的試紙條的剖視結(jié)構(gòu)圖，圖中7.樣品 墊8.膠體金結(jié)合墊9. PVC膠板10.硝酸纖維素膜11.吸水墊。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1 圖1、圖2所示的實(shí)施例：圖中9為PVC膠板；7為樣品墊；8為膠體金結(jié)合墊，該膠體金 結(jié)合墊上包被了單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；10為包被膜，即硝酸纖維素膜，該硝酸纖維素 膜上包被了丙草胺-BSA和羊抗鼠 IgG ;11為吸水墊，由吸水材料如濾紙制成。
[0011] 在PVC膠板9的一端上（樣品端）粘附樣品墊7、結(jié)合墊8,樣品墊7和結(jié)合墊8 為并排結(jié)構(gòu)。
[0012] 在PVC膠板9的中間粘附硝酸纖維素膜10。在硝酸纖維素膜10上設(shè)置有羊抗鼠 IgG質(zhì)控線3和丙草胺-BSA檢測線2。
[0013] 在PVC膠板9的另一端粘附吸水墊11。硝酸纖維素膜10的一端與結(jié)合墊8略交 叉，另一端與吸水墊11略交叉。該試紙條5可裝入有塑料模具制成的檢測卡外殼6中，制 成檢測卡，在檢測卡外殼6的上蓋上設(shè)有加樣孔1和檢測孔4,樣品墊7正對加樣孔1，硝酸 纖維素膜10正對檢測孔4。
[0014] 實(shí)施例2 丙草胺膠體金檢測卡制備，是由以下步驟具體實(shí)現(xiàn)： 膠體金溶液制備：取1 L三角燒瓶1個，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸 (HAuC14*3H20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況 下加入1%檸檬酸三鈉（Na3C6H507 · 2H20)溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變 為透明的紫紅色時，維持5 mi